蛋白质两性性质及等电点的测定

蛋白质两性性质及等电点的测定

关键词：蛋白质蛋白质两性性质等电点两性电解质带电基团酚基巯基胍基咪唑基两性反应实验原理蛋白质是两性电解质。蛋白质分子中可以解离的基团除N端α―氨基与C端α―羧基外，还有肽链上某些氨基酸残基的侧链基团，如酚基、巯基、胍基、咪唑基等基团，它们都能解离为带电基团。因此，在蛋白质溶液中存在着下列平衡：阳离子两性离子阴离子pH<pIpH=pIpHpI电场中：移向阴极不移动移向阳极调节溶液的pH使蛋白质分子的酸性解离与碱性解离相等，即所带正负电荷相等，净电荷为零，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。在等电点时，蛋白质溶解度最小，溶液的混浊度最大，配制不同pH的缓冲液，观察蛋白质在这些缓冲液中的溶解情那是给天生一对的人的，自己，怎么会拥有像袁慕野那样的美好的人儿呢？木况即可确定蛋白质的等电点。试剂和器材一、试剂1mol/L乙酸：吸取99.5%乙酸2.875mL，加水至50mL。0.1mol/L乙酸：吸取1mol/L乙酸5mL，加水至50mL。

0.01mol/L乙酸：吸取0.1mol/L乙酸5mL，加水至50mL。

0.2mol/LNaOH：称取NaOH2.000g，加水至50mL，配成1mol/LNaOH。然后量取1mol/LNaOH10mL，加水至50mL,配成0.2mol/LNaOH。

0.2mol/LHCl：吸取37.2%HCl4.17mL，加水至50mL，配成1mol/LHCl。然后吸取那是给天生一对的人的，自己，怎么会拥有像袁慕野那样的美好的人儿呢？木1mol/LHCl10mL，加水至50mL，配成0.2mol/LHCl。0.01%溴甲酚绿指示剂：称取溴甲酚绿0.005g，加0.29mL1mol/LNaOH，然后加水至50mL。二、测试样品

0.5%酪蛋白溶液：称取酪蛋白0.25g放入50mL容量瓶中，加入约20mL水，再准确加入1mol/LNaOH5mL，当酪蛋白溶解后，准确加入1mol/L乙酸5mL，最后加水稀释定容至50mL，充分摇匀。三、器材试管1.5&15cm；移液管1mL，2mL，10mL；胶头滴管。操作方法一、蛋白质的两性反应那是给天生一对的人的，自己，怎么会拥有像袁慕野那样的美好的人儿呢？木

取一支试管，加0.5%酪蛋白1mL，再加溴甲酚绿指示剂4滴，摇匀。此时溶液呈蓝色，无沉淀生成。

用胶头滴管慢慢加入0.2mol/LHCl，边加边摇知道有大量的沉淀生成。此时溶液的pH值接近酪蛋白的等电点。观察溶液颜色的变化。继续滴加0.2mol/LHCl，沉淀会逐渐减少以至消失。观察此时溶液颜色的变化。

滴加0.2mol/LNaOH进行中和，沉淀又出现。继续滴加0.2mol/LNaOH，沉淀又逐渐消失。观察溶液颜色的变化。二、酪蛋白等电点的测定

取同样规格的试管7支，按下表精确地加入下列试剂：试剂管号12345671.0mol/L乙酸1.60.8000000.1mol/L乙酸00410000.01mol/L乙酸00002.51.250.62H2O2.43.2031.52.753.38溶那是给天生一对的人的，自己，怎么会拥有像袁慕野那样的美好的人儿呢？木液的混浊度

充分摇匀，然后向以上各试管依次加入0.5%酪蛋白1mL，边加边摇，摇匀后静置5min，观察各管的混浊度。

用-、+、++、+++等符号表示各管的混浊度。根据混浊度判断酪蛋白的等电点。最混浊的一管的pH值即为酪蛋白的等电点。注意事项在测定等电点的实验中，要求各种试剂的浓度和加入量相当准确。

window._bd_share_config={"mon":{"bdSnsKey":{},"bdText":"","bdMini":"2","bdMiniList":false,"bdPic":"","bdStyle":"0","bdSize":"32"},"share":{},"image":{"viewList":["copy","sqq","qzone","tsina","tqq","ren那是给天生一对的人的，自己，怎么会拥有像袁慕野那样的美好的人儿呢？木ren","weixin"],"viewText":"分享到：","viewSize":"16"},"selectShare":{"bdContainerClass":null,"bdSelectMiniList":["copy","sqq","qzone","tsina","tqq","renren","weixin"]}};with(document)0[(getElementsByTagName('head')[0]||body).appendChild(createElement