TCIRA 59-2023 白纹伊蚊雄蚊规模化生产技术要求

白纹伊蚊雄蚊规模化生产技术要求发布IT/CIRA59—2023 Ⅲ1范围 1 13术语和定义 14蚊品系建立 2 2 2 28蚊蛹雌雄分离 2 310关键指标 311注意事项 3 4 5Ⅲ1白纹伊蚊雄蚊规模化生产技术要求本文件适用于在工厂条件下规模化生产白纹伊蚊雄蚊。对规模化生产埃及伊蚊(Aedesaegypti)2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文NY/T1964.3—2010农药登记用卫生杀虫剂室内试验试虫养殖方法第3部分：白纹伊蚊3术语和定义孵化出幼虫的数量与孵化蚊卵初始总数量的比值。蚊蛹雌雄分离sexseparationatpupalstage24.1从野外采集蚊幼虫，实验室饲养至成蚊，经形态学与基因型(线粒体细胞色素氧化酶I基因)鉴定4.2蚊品系应在实验室稳定传代6代以上，所产蚊卵转移至工厂进行规模化孵化。5蚊卵规模化孵化5.1.2配制0.09%酵母蛋白胨溶液，在(28±2)℃静置发酵24h,得到蚊卵孵化液。5.2.1称取10mg蚊卵(1mg约有131个蚊卵)于15mL的离心管中，加入8mL蚊卵孵化液，放置在(29±1)℃的恒温培养箱中孵化1.5h。5.3.1根据幼虫饲养盘的表面积与孵化率之积计算所需的蚊卵质量，控制幼虫密度(2～3)条/cm²。6幼虫规模化饲养6.2将孵化出的幼虫转移至幼虫饲养盘，幼虫饲养盘放置在幼虫饲养架上，每千条幼虫饲养每日投食参考量见附录A。6.3幼虫饲养条件设定温度(27±2)℃,相对湿度(75±10)%,光照周期12L:12D(L表示光照，D表示7化蛹及蛹幼分离7.1以蚊卵孵化当天作为第1天，饲养至第8天左右，或观察约50%幼虫形成蚊蛹时，可开始蛹幼分7.3将蚊蛹及幼虫转移至含有15%盐水(氯化钠)溶液中，浸泡1h至幼虫全部死亡并沉底。8蚊蛹雌雄分离8.1根据雌雄蚊蛹的大小差异利用雌雄分离器进行分离。8.2雄蛹平均获得率，即实际获得的雄蛹数量与理论雄蛹数量的比值应≥65%。39雄蚊羽化与喂食9.1把羽化笼转移至温度(26±2)℃,相对湿度(75±10)%的羽化间。9.2约24h后，在羽化笼上放置经10%葡萄糖溶液浸泡的棉球，供羽化的雄蚊吸食。9.4约48h,将收集容器从羽化笼中取出，存余的1日龄～2日龄雄蚊在羽化笼中继续饲养24h。规模化生产的产能应具有每天生产不低于50万只雄蚊的能力。单只雄蚊平均质量应达到1.0mg～1.4mg,计算方法见附录B的B飞离测试筒的样品雄蚊数量占测试雄蚊数量的比值应≥85%,计算方法见B.2。羽化雄蚊样品中雌蚊所占的比值应≤0.3%,计算方法见B.3。11.1幼虫饲料可用鱼饲料等进行饲养，蛋白质含量应达到20%～40%。4(资料性)白纹伊蚊幼虫饲养每日投食参考量见表A.1。天数/d1234567食物量/g注：该投食量是根据每千条幼虫计算所得。5T/CIRA59—2023(资料性)关键指标的计算方法将9.4羽化笼中雄蚊，转移至(10±2)℃的冷库进行冻麻。随机挑选雄蚊并称重，记录总质量M。然后将雄蚊转移于-20℃冰箱，放置30min～60min直至雄蚊全部死亡，再进行计数，记录雄蚊数量n。单只雄蚊平均质量m,按公式(B.1)计算：将9.4羽化笼中雄蚊，转移至(10±2)℃的冷库进行冻麻。随机挑选部分雄蚊，记录雄蚊总数N。将雄蚊转移至室温，立即放在直径12cm和高度60cm的测试筒底部。约30min,用盖子盖住测试筒，记录仍停留在测试筒的雄蚊数量n₁。雄蚊飞行率Fb(%),按公式(B.2)计算：B.3混雌率将9.4羽化笼中雄蚊，转移至(10±2)℃的冷库进行冻麻。随机挑选部分样品雄蚊，