2024年大学试题(医学)-分子诊断学考试近5年真题集锦（频考类试题）带答案

（图片大小可自由调整）2024年大学试题(医学)-分子诊断学考试近5年真题集锦（频考类试题）带答案第I卷一.参考题库(共100题)1.病毒基因组存在（）A、基因重叠现象B、类核结构C、断裂基因D、质粒E、可移动基因成分2.基因工程疫苗研究开发应遵循的原则是什么？3.原核细胞和真核细胞转录的mRNA均具有与rRNA结合的SD序列，以利于进行有效的转录。4.下面哪种生物芯片不属于微阵列芯片（）A、基因芯片B、蛋白芯片C、PCR反应芯片D、芯片实验室5.在RNA纯化时，常使用的水饱和酚的pH值为（）A、3.5-4.0B、4.5-5.5C、6.0-7.5D、7.0-8.5E、9.0-10.06.一个典型的基因不包括（）A、增强子B、5′非编码区C、3′非编码区D、启始密码子E、终止密码子7.蛋白质组学的研究特点有哪些？8.T4DNA连接酶或TthDNA连接酶更容易识别哪类错配（）A、连接缺口上游探针的5’末端B、连接缺口上游探针的3’末端C、连接缺口下游探针的5’末端D、连接缺口下游探针的3’末端E、以上都不是9.简述变性高效液相色谱法检测基因变异的优点。10.DNA自动化测序系统中，最常用的标记物是（）A、荧光染料B、α-PC、γ-PD、生物素E、35S11.植入前遗传学诊断（PGD）12.人工染色体载体必须具有的元件是（）。A、染色体端粒B、着丝粒C、自主复制序列D、以上三项全部13.下列哪些技术属于分子影像技术（）A、UltrasoundB、SPECTC、MRID、CTE、PET14.甲型血友病基因倒位的分子检测法（）A、限制性内切酶MstⅡ切割法B、长距离PCR法（LD-PCR）C、多重PCRD、扩增产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳放射自显影E、Southern印迹杂交法15.HGP研究的主要内容不包括（）A、物理图B、SNP图C、连锁图D、序列图E、遗传图16.下列有关重组DNA技术的叙述，正确的是（）A、重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B、所有的限制酶都只能识别一种特定的核苷酸序列C、选细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快D、只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达17.在纯化核酸时往往含有少量共沉淀的盐，常用下列哪种浓度的乙醇洗涤去除（）A、100%B、95%C、70~75%D、50~60%E、30~40%18.简述酵母双杂交系统的优缺点。19.简述长病毒末端重复序列的特点和作用。20.简述常用的光学成像技术。21.下列哪项叙述不正确（）A、F质粒的主要特征是带有耐药性基因B、R质粒又称抗药性质粒C、Col质粒可产生大肠杆菌素D、F质粒是一种游离基因E、R质粒在基因克隆中应用最多22.简述化学法测定DNA序列的基本原理。23.临床基因扩增中，弱阳性室内质控样本发生失控，其原因可能是（）A、核酸提取中的丢失B、标本中扩增抑制物残留C、扩增仪孔间温度不均一D、Taq酶和/或逆转录酶失后E、扩增产物污染24.在定量PCR中，对原始模板准确定量的影响因素中，最大的是（）A、原始模板的量B、扩增效率C、循环次数D、扩增产物的量E、循环阈值25.感受态细胞（Competentcells）是一种处于（）状态的细胞。一般通过（）来诱导大肠杆菌感受态的形成。26.黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）。A、产生新切点B、易于回收外源片段C、载体不易环化D、影响外源基因的表达27.影响PCR反应的因素有哪些？28.如何有效地提高外源基因的表达效率？29.能对未知序列进行扩增的PCR是（）A、多重PCRB、巢式PCRC、原位PCRD、反向PCRE、不对称PCR30.亨廷顿病IT15基因CAG常用的分子诊断方法（）A、限制性内切酶MstⅡ切割法B、长距离PCR法（LD-PCR）C、多重PCRD、扩增产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳放射自显影E、Southern印迹杂交法31.如何保证临床基因扩增检验实验室的质量。32.蛋白质组学的研究内容有哪些？33.逆转录病毒编码的基本结构基因（）A、gag（编码核心蛋白）B、pol（编码逆转录酶等）C、rex（编码rex调节蛋白）D、tax（编码tax调节蛋白）E、env基因（编码包膜蛋白）34.目前进行蛋白质分离最有效的方法是（）。A、质谱分析B、二维凝胶电泳C、酵母双杂交技术D、DNase I 足纹分析35.亨廷顿致病基因-IT15基因外显子1的起始密码子ATG下游17个密码子处有一段多态性的三核甘酸重复序列，其为（）A、CCGB、CAAC、CGAD、CAGE、CGG36.（）影响DNA复性的因素。A、DNA的浓度B、DNA的大小和复杂性C、温度D、离子强度37.有哪几种反义核苷酸基因失活疗法？简述其原理。38.镰状细胞贫血分子诊断（）A、限制性内切酶MstⅡ切割法B、长距离PCR法（LD-PCR）C、多重PCRD、扩增产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳放射自显影E、Southern印迹杂交法39.人类免疫缺陷病毒的基因组（）A、双链DNAB、单链DNAC、双链RNAD、正链RNAE、负链RNA40.在重组DNA技术中，不常用到的酶是（）。A、限制性核酸内切酶B、DNA 聚合酶C、DNA 连接酶D、DNA 解链酶41.等电聚焦凝胶电泳的原理是什么？42.电泳时EB加在琼脂糖凝胶中一般会降低DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率。43.基因工程诞生的理论基础是什么？44.下列哪一种酶作用时需要引物？（）A、限制酶B、末端转移酶C、反转录酶D、DNA连接酶45.基因工程的操作步骤：①使目的基因与运载体结合②将目的基因导入受体细胞③检测目的基因的表达④提取目的基因。正确的顺序是（）A、③②④①B、②④①③C、④①②③D、③④①②46.黏粒（cosmid）是质粒－噬菌体杂合载体，它的复制子来自（）、cos位点序列来自（），最大的克隆片段达到45kb。47.用于核酸分子杂交的探针不能是放射性标记的（）。A、DNAB、RNAC、抗体D、寡核苷酸48.非放射性探针检测方法有（）A、直接法B、间接免疫法C、直接亲合法D、间接亲合法等49.基因序列经碱基替代，缺失或插入后，可使遗传信息产生三种不同的后果，分别为（）、（）、（）。50.CsCl2-EB法中在过量EB存在的下，超速离心后密度最大沉于管底的是（）A、蛋白质B、带切口的环状或线性DNAC、RNAD、复合糖类E、闭环质粒DNA51.下列哪些属于染色体以外的遗传因子（）A、转座子B、病毒核酸C、细菌的质粒D、高等植物的叶绿体E、转位因子F、插入序列G、真核生物的线粒体52.叙述原核生物基因组的结构特征。53.PCR检测技术有何临床应用。54.限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是（）。A、修复自身的遗传缺陷B、促进自身的基因重组C、强化自身的核酸代谢D、提高自身的防御能力55.真核表达调控的顺式作用元件有哪些？其作用特点是什么？56.入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点，替换型载体有2个成对的限制性酶切点。57.操纵子结构不存在（）A、细菌基因组中B、病毒基因组中C、真核生物基因组中D、大肠杆菌基因组中E、原核生物基因组中58.PCR反应过程分为三个步骤，即（），（）和（）。59.试证明Ct值与模板DNA的起始拷贝数成反比。60.Klenow酶在（）情况下，呈现DNA聚合酶活性，在（）情况下呈现外切酶活性。61.载体的功能是（）。A、外源基因进入受体的搭载工具B、不能为外源基因提供整合能力C、不能提供复制能力D、不能为外源基因提供表达能力62.简述CpG岛与DNA甲基化调控。63.简述bDNA信号放大系统的原理。64.PCR扩增阻碍突变系统检测突变的原理是基于（）A、由于突变，限制性内切酶识别位点变化，不能被切开B、由于突变，电泳迁移率发生变化C、连接酶不能连接与靶序列错配的两个DNA片段D、Taq酶不能延伸3’末端与靶序列错配的引物E、以上都不是65.TaqMan探针采用的是（）A、荧光标记的探针B、生物素标记的探针C、同位素标记的探针D、SYBR Green标记引物E、圆形探针66.下列有关连接反应的叙述，错误的是（）。A、连接反应的最佳温度为37℃B、连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%C、连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1mMD、接酶通常应过量2-5倍67.从高温嗜热细菌中发现高温DNApolymerase后，使得PCR技术得以广泛应用，在高温下有活性的DNApolymerase有（）、（）、（）、（）。其中具有3’-5’外切活性的高温DNApolymerase有（）和（）。68.简述基因的特点和鉴别标准。69.下列哪种方法不是分离纯化高分子量DNA的（）A、酚抽提法B、煮沸裂解法C、甲酰胺解聚法D、玻棒缠绕法E、异丙醇沉淀法70.简述质粒的概念和特性，常用的质粒载体有哪几种？71.有关DNA链末端终止法的不正确说法是（）A、需要ddNMPB、需要ddNTPC、dNTP：ddNTP的比例要合适D、需要放射性同位素E、需要dNTP72.外源基因在原核细胞中表达，常用的启动子有（）、（）、（）、（）、（）和（）。73.PND和PGD的适应症（）A、有可能孕育出严重遗传性疾病和先天性畸形胎儿的孕妇B、夫妇一方有某种遗传病或曾生出过某种遗传病患儿，或孕妇有X伴性隐性遗传病家族史C、夫妇任何一方为染色体异常、染色体平衡移位和倒位携带者D、早孕阶段曾服用过致畸药物或曾有病毒感染史等致畸情况E、羊水过多或过少F、原因不明的多次流产、死胎、死产的孕妇G、胎儿发育迟缓H、未触到正常的胎儿I、年龄超过35岁的孕妇等等74.常用的核酸探针荧光素标记物有（）A、异硫氰酸荧光素B、四乙基罗达明C、德克萨斯红D、吲哚二羧菁等75.通过凝胶电泳法可对RNA分子完整性进行鉴定，提示无RNA的降解时应（）A、28S RNA的荧光强度约为18S的2倍B、18S RNA的荧光强度约为28S的2倍C、5S RNA的荧光强度约为18S的2倍D、5S RNA的荧光强度约为28S的2倍E、28S RNA的荧光强度约为5S的2倍76.目前研究蛋白质间相互作用最常采用的方法是（）。A、质谱分析B、二维凝胶电泳C、酵母双杂交技术D、DNase I 足纹分析77.肌营养不良症分子诊断的常用方法（）A、限制性内切酶MstⅡ切割法B、长距离PCR法（LD-PCR）C、多重PCRD、扩增产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳放射自显影E、Southern印迹杂交法78.限制性内切核酸酶的星活性是指（）。A、在非常规条件下，识别和切割序列也不发生变化的活性B、活性大大提高C、切割速度大大加快D、识别序列与原来的完全不同79.基因组最大的生物（）A、人B、某些藻类C、某些细菌D、某些显花植物和两栖类动物E、某些哺乳动物80.基因治疗是把健康的外源基因导入（）A、有基因缺陷的DNA分子中B、有基因缺陷的染色体中C、有基因缺陷的细胞器中D、有基因缺陷的细胞中81.变性高效液相色谱法可分离（）A、单链DNA分子B、双链DNA分子C、环状DNA分子D、超螺旋DNA分子E、部分双链DNA分子82.（）影响核酸分子杂交的因素。A、DNA的浓度B、DNA的大小和复杂性C、温度D、离子强度83.A.基因重叠现象B.类核结构C.断裂基因D.质粒E.可移动基因成分原核生物具有（）84.细菌的移动基因存在着三种类型的转位因子包括（）、（）、（）。85.作为一种遗传标记，人类短串联重复序列（STR）的主要用途有哪几个方面？86.下列技术中，不能用来检测溶液中蛋白质分子的结构是（）。A、核磁共振B、圆二色谱法C、氢同位素交换法D、小角中子衍射法87.α珠蛋白基因由α类基因或假基因组成，以下那一个不是假基因（）A、ψζB、ψα1C、ψα2D、ζE、以上均不是88.能使扩增灵敏度提高的方法是（）A、多重PCRB、巢式PCRC、原位PCRD、反向PCRE、不对称PCR89.紫外分光光度法对DNA进行测定中，下列哪项是正确的（）A、DNA的最大吸收波长为280nmB、A260为1的光密度大约相当于50µg/ml双链DNAC、A260为1的光密度大约相当于40µg/ml双链DNAD、A260为1的光密度大约相当于33µg/ml双链DNAE、A260/A280大于2.090.何谓线粒体病？简述线粒体病的遗传学分类。91.能够引起遗传性视神经病的线粒体病遗传学分类类型是（）A、点突变B、mt DNA的大规模缺失C、mt DNA的大规模插入D、源于核DNA缺陷引起mtDNA缺失92.cDNA文库包括该种生物的（）。A、某些蛋白质的结构基因B、所有蛋白质的结构基因C、所有结构基因D、内含子和调控区93.Northern印迹技术是（）A、检测RNA的核酸杂交技术B、是以发明者的名字命名的C、属于固相杂交的范畴D、与Southern印迹杂交的方法类似，只是变性剂不同94.Maxam-Gilbert化学降解法测序时，从测序胶上直接读出的序列是用于测序的模板的互补序列。95.分离与纯化mRNA可采用下列哪种方法（）A、oligo（dT）-纤维素柱层析法B、oligo（dA）-纤维素液相结合离心法C、oligo（U）-滤纸法D、oligo（dC）-纤维素柱层析法E、oligo（dG）-纤维素液相结合离心法96.下列生物体的细胞基因组哪些会有断裂基因？（）A、大肠杆菌B、乙肝病毒C、人D、噬菌体97.简述分子影像在分子诊断中的应用。98.质粒的结构特点有（）A、以环状双链DNA分子存在B、质粒DNA有超螺旋结构C、以环状单链DNA分子存在D、质粒DNA有半开环结构E、以环状双链RNA分子存在F、质粒DNA有线性结构G、以线性双链DNA分子存在99.A260/A280100.试述质粒的类型有哪些？第I卷参考答案一.参考题库1.参考答案：A2.参考答案： （1）不能或难于培养的的病原体如乙型肝炎病毒（HBV），丙型肝炎病毒（HCV），戊型肝炎病毒（HEV），EB病毒（Epstein-Barr病毒，EBV），巨细胞病毒（CMV），人乳头瘤病毒（HPV），麻风杆菌，疾原虫、血吸虫等。 （2）有潜在致癌性或免疫病理作用的病原体，前者如1型嗜人T淋巴细胞病毒（HTLV-I），人免疫缺损病毒（HIV），单纯疱疹病毒（HSV），还有EBV、CMV、HPV等。后者如呼吸道合胞病毒（RSV），登革热病毒（DGV），肾综合征出血热病毒（HFRSV）。 （3）常规疫苗免疫效果差，如霍乱和痢疾菌苗；或者反应大，如百日咳和伤寒菌苗。 （4）能大大节约成本，简化免疫程序的多价疫苗，如以痘苗病毒，腺病毒，卡介苗或沙门氏菌为载体的多价活疫菌。3.参考答案：错误4.参考答案：C5.参考答案：B6.参考答案：A7.参考答案： ①整体性；②揭示生命的动态性过程；③体现生命现象的复杂性。8.参考答案：B9.参考答案： DHPLC突变检测技术与其它方法相比，具有更高的准确性和敏感性。 （1）DHPLC与各种电泳法的比较SSCP分析片段长度10.参考答案：A11.参考答案：植入前遗传学诊断主要是指在显微操作下从体外受精发育至6～8个细胞期的胚胎中，活检1～2个卵裂球细胞或直接获取受精前后的极体，通过聚合酶链式反应或荧光原位杂交，进行快速遗传学诊断，选择正常胚胎植入宫内，从而获得健康胎儿。12.参考答案：D13.参考答案：B,C,E14.参考答案：B15.参考答案：B16.参考答案：B17.参考答案：C18.参考答案： 酵母双杂交系统所具有的优点：①蛋白质作为被研究的对象不用被纯化；②检测在活细胞内进行，可以在一定程度上反映体内（细胞内）的真实情况；③由于这一系统可以反映基因表达产物的累积效应，因而可检测存在于蛋白质之间微弱或短暂的相互作用；④采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库，可用于分析多种不同功能的蛋白。 局限性：①双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内，而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等，这些反应在核内无法进行。②由于某些蛋白本身具有激活转录功能或在酵母中表达时发挥转录激活作用，从而引起报告基因的表达，产生“假阳性”结果。③双杂交只是反映蛋白质间能发生作用的可能性，这种可能还必须经过其他实验验证，尤其要与生理功能研究相结合，否则可能会误入歧途。19.参考答案：逆转录病毒基因组RNA在逆转录后生成的双链DNA中，两端有长末端重复序列（longterminalrepeat，LTR）结构。LTR在结构与功能上与上述重复序列不同。LTR中的重复序列只占一部分，另外还包括单一序列。5＇端的LTR包含许多特定的基因表达调控区域，是一组真核生物增强子和启动子单位，而3＇端的LTR具有转录终止的作用。另外，逆转录病毒基因组利用LTR中的重复序列形成环状结构，在整合酶作用下整合入宿主细胞基因组内。20.参考答案： 目前的光学成像技术主要包括荧光（fluorescence）和生物发光（bioluminescence）两种技术。 荧光成像技术常用GFP、RFP及等近红外线（NIR）荧光素基因为报告基因。NIR荧光素是目前荧光成像研究的热点。将NIR荧光素与传送载体通过一段蛋白酶特异性肽段连接起来就形成了NIR探针。在原始状态由于存在荧光共振能量转移作用，NIR荧光素不发出荧光信号。当出现靶向蛋白水解酶将特异性肽底物降解时，荧光素与传送载体分离，荧光淬灭作用消失，NIR荧光素即释放出高达几百倍的荧光。通过这类探针能活体无创性检测多种蛋白酶的活性及疾病早期的病理现象，还能评价治疗效果。有点是组织穿透能力较强（可达数cm），影像信噪比较高。 生物发光成像技术主要有两类报告基因：虫荧光素酶基因和Renilla虫荧光素酶基因，底物分别为虫荧光素和coelenterazine。通过分子克隆技术将荧光素酶基因插入靶基因，即可将所需研究的基因或细胞标记上荧光素酶，将标记好的细胞注入小鼠体内后， 观测前通过腹腔或静脉注射导入荧光素酶的底物—荧光素，即可在几分钟内产生发光现象。其优点是无自发荧光，所得影像的信噪比高，因此检测的敏感性与特异性均较高，目前被广泛应用于小动物全身成像。21.参考答案：A22.参考答案：化学法是对待测DNA进行化学降解。在化学法的测序系统中，先对待测DNA末端进行放射性标记，然后分成4组或5组互为独立的化学反应体系，每一组用不同的化学试剂特异地针对某一种或某一类碱基进行化学切割，通过化学降解后产生长短不一的DNA片段，其长度取决于改组反应所针对的碱基在待测DNA片断中的位置，将各组反应产物通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后直接识读待测DNA的序列。23.参考答案：A,B,D,E24.参考答案：B25.参考答案：容易接受外源DNA片段；CaCl2法26.参考答案：C27.参考答案：PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液，这些因素都对PCR反应产生影响。28.参考答案： ⑴提高启动子强度。 ⑵缩短启动子同克隆基因间距离。 ⑶高效的翻译起始序列。 ⑷高效的转录终止区。 ⑸提高质粒拷贝数及稳定性。 ⑹用以下方法提高翻译水平：①调整SD序列与AUG间的距离②用点突变的方法改变某些碱基③增加mRNA的稳定性的。 ⑺减轻细胞的代谢负荷：①诱导表达②表达载体的诱导复制。 ⑻提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：①克隆一段原核序列，表达融合蛋白②采用某种突变菌株③表达分泌蛋白质。29.参考答案：D30.参考答案：D31.参考答案：临床基因扩增检验实验室的常规测定由一系列步骤组成，包括样本收集、样本处理（核酸提取）、核酸扩增、产物检测结果报告及解释等。室内质量控制仅涉及样本处理、核酸扩增和产物分析等测定分析步骤，而室间质量评价则除了监测测定分析步骤外，还包括较大范围的实验室活动，诸如样本接收中的可靠性、结果报告及解释等。QA则是覆盖更广范围的活动，包括样本收集、结果报告和解释等。32.参考答案：蛋白质组学的研究包括两个方面：一是针对蛋白质表达模式的研究，一是在蛋白质功能模式方面的深入分析。33.参考答案：A,B,E34.参考答案：B35.参考答案：D36.参考答案：A,B,C,D37.参考答案： （1）将特异的反义基因重组到表达载体上（病态载体或质粒），导入靶细胞中转录出反义RNA，形成双链RNA（RNA/RNA双链体），阻碍基因的翻译。 （2）人工合成寡聚脱氧核糖核酸（ODN）经过化学修饰导入细胞，与mRNA和DNA结合，形成RNA/DNA杂链或DNA核苷酸三聚体，影响基因的翻译或转录。 （3）特异性的核酶，根据癌基因设计出特异的“锤头”或“发夹”结构，它能够催化切割，降解异常表达基因的mRNA而影响基因的翻译。38.参考答案：A39.参考答案：D40.参考答案：D41.参考答案：依据蛋白质分子的净电荷或等电点进行分离的技术。在等电聚焦过程中，电场所采用的载体两性电解质含有脂肪族多氨基多羧酸，可在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续pH梯度，蛋白质分子在一个载体两性电解质（ampholyte）形成的连续而稳定的线性pH梯度中电泳，当蛋白质迁移到其等电点位置时，净电荷为零，在电场中不再移动，因此可将各种不同等电点性质的蛋白质分离开来。42.参考答案：正确43.参考答案： 是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。理论上的三大发现： 1.证实了DNA是遗传物质。 2.揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理。 3.遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定。 技术上的三大发明：①限制核酸内切酶的发现与DNA切割②DNA连接酶的发现与DNA片段的连接③基因工程载体的研究与应用。44.参考答案：C45.参考答案：C46.参考答案：质粒；噬菌体47.参考答案：C48.参考答案：A,B,C,D49.参考答案：同义突变；错义突变；无义突变50.参考答案：C51.参考答案：A,C,D,E,F,G52.参考答案：在原核生物基因组中只有一个DNA复制起点。基因组DNA通常是由一条环状双链DNA（doublestrandedDNA，dsDNA）分子组成。基因组DNA与支架蛋白和RNA结合在一起，以复合体的形式存在。广泛存在操纵子结构。操纵子结构是原核生物基因组的功能单位，在原核基因调控中具有普遍的意义。原核生物的结构基因多数是单拷贝的并且结构基因中没有内含子成分。编码顺序一般不重叠。具有编码同工酶的不同基因。基因组中编码区所占比例为50﹪，不编码区中常常含有基因表达调控的序列。基因组DNA分子中存在多种功能的识别区域，这些区域经常有反向重复序列存在，并能形成特殊的结构。原核生物基因组存在着可移动的DNA序列，这些可移动的DNA序列，通过不同的转移方式发生基因重组，使生物体更适应环境的变化。53.参考答案：（1）PCR在病原微生物的检测中的应用；（2）PCR在遗传病中的应用；（3）PCR在肿瘤中的应用；（4）其它方面的应用：PCR技术除用于临床诊断和治疗外，还可用于DNA指纹、个体识别、亲子关系识别、法医物证等。54.参考答案：D55.参考答案： 顺式作用元件为一些能与DBP结合的特定序列的DNA片段，决定转录起始位点和RNA聚合酶的转录效应，按功能可分为启动子、增强子、沉默子、衰减子和终止子等DNA序列片段。 启动子：真核基因启动子是基因表达时与基因转录起始有关的5’端DNA序列，包括在-30bp区富含有AT的典型TATA盒（框）（TATA box）和在-70～-80bp区域（在TATA box上游）启动元件。前者是引导RNA聚合酶Ⅱ在正确起始位点转录mRNA所必需的DNA序列，即保证转录的精确起始。后者UPE是调节转录起始频率和提高转录效率的调控序列，后者的序列常为GGTCAAT和GGGCCC序列，称为GC box，它们经协同作用，以调控基因的转录效率。 增强子：增强子是使启动子的基因转录效率显著提高（增强转录活性）的一类顺式作用元件，其本身不具有启动子活性，是由多个独立的，具有特征性的核苷酸序列所组成。其基本的核心组件常由812bp组成，以单拷贝或多拷贝串联的形式存在。增强子一般有以下特性：⑴增强子能提高同一条DNA链上基因转录的速率；⑵增强子对同源或异源基因都有效 ⑶增强子的位置可在基因5’上游、3’下游或内部；⑷无方向性，增强子从5’→3’或是从3’→5’均可对启动子发挥作用；⑸增强子可远离转录起始点；⑹增强子一般无基因特异性，对各种基因启动子均有作用，但具有组织或细胞特异性。 典型的增强子首先发现于SV40的病毒中，为SV40的早期基因增强子，约200bp，含2个72bp的重复序列，位于早期启动子上游，增强子可促使病毒基因转录效率提高100倍，因此具有这一增强子的载体已得到了广泛的应用。些年来，来自于Rous肉瘤病毒基因长末端重复序列和人类巨细胞病毒（CMV）增强子也已被广泛用于真核细胞的基因表达。增强子能增强启动子的转录能力，有效的增强子能促进转录达10倍或100倍以上，在某些情况下，表达产物可能具有细胞毒效应。因此，最好使用一种可被外界刺激信号诱导表达外源基因的诱导型启动子，诱导型启动子有热休克启动子、金属硫蛋白启动子、糖皮质激和固醇类激素诱导的启动子，热休克启动子的诱导可通过提高细胞的培养温度使启动子转录水平提高，重金属离子可有效地促进金属硫蛋白启动子的转录活性。 R.NA剪接信号：多数高等的真核基因都含有内含子序列，在细胞核内转录产生的前体mRNA要经过剪接过程去掉内含子顺序后才成为成熟的mRNA分子。虽然许多基因的cDNA转入哺乳类动物细胞后，其表达不受有或无内含子的影响，但有些基因在真核细胞中表达需要有内含子的存在。一般来说，在哺乳动物细胞的表达载体中最好有一段内含子序列的剪接信号，以提供外源基因cDNA表达的需要。常用的内含子剪接序列有SV40的小t抗原的内含子序列等。 负调控元件：沉默子和衰减子是抑制基因转录的DNA序列，称为负调控元件，它们与反式作用因子相互结合而起作用。这些负调控元件不受距离和方向的限制，并可对异源基因表达起作用。 终止子和polyA信号：核基因转录的确切终止信号和终止机制，目前尚不清楚，终止过程不是在RNA聚合酶指导下完成的，在不明机制下发生转录终止。现在已发现模板DNA分子的3’端有转录终止信号序列，称终止子。通常由转录产生的具有polyA尾的基因终止信号是在多聚腺苷酸化位点下游的一段长度为数百个碱基的DNA区域内的G/T簇，例如在SV40中的AGGTTTTTT的DNA序列为终止转录调控元件。一般转录终止子为发夹结构的反向重复序列。现在基因工程表达载体上所使用的转录终止子都是病毒基因或细胞基因的3’端的一段序列，其中也包括3’端不翻译区。如SV40小t抗原和β-球蛋白的转录终止片段常用于构建真核基因表达载体。 在双启动子的表达载体中，启动子的转录方向为同向时，上游启动的转录由于会穿过下游启动子，这样就使得下游的转录受到极大的影响，造成下游转录水平的下降，但是如果在两个启动子间插入一个转录终止子后，上游启动子对下游启动子的影响就被消除了，这样下游启动子的表达量会有明显提高。当两个启动转录方向相反时，基因表达可能会被转录形成的反义RNA所抑制，这时插入转录终止子将会消除这种抑制作用。56.参考答案：正确57.参考答案：C58.参考答案：变性；退火；延伸59.参考答案： 一般来说，第n次PCR循环的荧光信号强度（Rn）等于背景信号强度（RB）加上每个分子的荧光强度（即单位荧光强度RS与分子数目的乘积），用数学式表示如下：Rn=RB+XO（1+Ex）nRs式中：Rn代表荧光信号强度；RB代表背景信号强度；Xo代表起始模板拷贝数；Ex代表扩增效率；Rs代表单位荧光强度；N代表循环次数。 对每一个特定的PCR反应来说，Ex、RT、RB、和Rs都是常数，所发Ct值与lgXo成反比，也就是说，Ct值与起始模板DNA的拷贝数（Xo）的对数成反比，起始DNA浓度每增一倍，Ct值减小一个循环。因此，Ct值的引入确保了实时荧光PCR定量的精确和严格。60.参考答案：有dNTP；没有dNTP61.参考答案：D62.参考答案： 大约有一半的人类基因富含CpG的顺序，称为CpG岛（CpGisland），CpG岛常位于转录调控区或其附近，主要存在于看家基因和一些组织特异性表达基因。在正常组织，除印记基因和失活的X染色体外，包括启动子区在内的基因5′端CpG岛大部分是非甲基化的。DNA甲基化与基因表达呈负相关，DNA甲基化调控基因表达直接的机制可能是因为甲基从DNA分子的大沟中突出，阻止了转录因子与基因相互作用，还可能直接抑制RNA聚合酶活性而抑制基因的表达。间接的机制包括两种类型：①与甲基化DNA结合蛋白结合；②改变染色质结构，这都间接阻碍转录因子与DNA结合而抑制转录。DNA甲基化对胚胎发育非常重要，与X染色体失活，基因组印记，特别是肿瘤密切相关。63.参考答案： 分枝DNA是人工合成的带有侧链的DNA片段，在每个侧链上都可以标记可被激发的标记物。以bDNA为基础建立的连续放大DNA信号以检测DNA的技术称为分枝DNA信号放大系统。 bDNA信号放大系统包括四种杂交探针，即目标探针、前放大体、 放大体和标记探针。首先用亲和素包被微孔，加入目标探针，该组探针能与等检核酸靶序列上不同区域互补，其5′端用生物素标记，能与微孔中的亲和素高度亲和结合；再向微孔中加入待测标本，目标核酸与固定于微孔中的目标探针结合；再加入前放大体，该组探针的一段能与目标核酸的不同区域互补结合，另一段与放大体（即分枝DNA）的主链部分的序列互补结合，分枝DNA由主链和数十根寡核苷酸组成，每个分枝上都有标记探针的杂交位点，由酶标寡核苷酸组成的标记探针与bDNA上的互补序列结合，加入底物后最后经化学发光检测仪检测。利用bDNA信号放大系统可在每个靶序列上结合60～300个酶分子，而且所有杂交反应同时进行，观察到的信号与靶DNA的量成正比，可通过标准曲线将靶DNA定量。64.参考答案：D65.参考答案：A66.参考答案：A67.参考答案：TaqDNA聚合酶；TthDNA聚合酶；VentDNA聚合酶；PwoDNA聚合酶；DNA聚合酶；PwoDNA聚合酶；PfuDNA聚合酶68.参考答案：对于数量很少的编码tRNA、rRNA和某些小分子RNA的基因，我们较易通过核酸序列加以判断。而对于数量极大的蛋白质编码基因，目前可根据其特点使用五项标准来鉴别：①开放阅读框（openreadingframe，ORF）；②序列特征和密码子偏爱；③序列保守性；④转录产物；⑤基因失活。但这些标准使用