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文档简介
34TechnicalregulationfornestedPCRdetectionmethodforporcinecircovirustypI本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定萧县畜牧兽医水产服务中心、岳西县畜牧兽医水产服务中心、望江县畜牧兽医技术推广1《病死及病害动物无害化处理技术规范》(农医发(2017)25号)猪圆环病毒3型porcinecircovirustype3,PCV34.2台式高速冷冻离心机：可控温至4℃,离心力12000g以上25.2DNA提取纯化试剂盒：商品化试剂。5.40.5×TBE缓冲液：称取108gTris、7.44g枸橼酸钠、55g硼酸，溶于1000mL水中，配5.51%琼脂糖：称取1g琼脂糖，溶于100mL0.5×TBE缓冲液中。5.6磷酸盐缓冲液(PBS):称取8gNaCl、0.2gKC1、1.44gNa₂HPO₄和0.24gKH₂PO4,溶于800保存于室温或4℃冰箱中。引物名称引物序列扩增基因第1轮扩增上游引物(F1)5'-CCACATGCGAGGGCGTTTAC-3”第1轮扩增下游引物(R1)第2轮扩增上游引物(F2)5³-CTTTGGTGCCGTAGAAGTCTG-3’第2轮扩增下游引物(R2)5'-CGCCTAAACGAATGGGAAAC-3”3取样品约1g放入1.5mL离心管中，用手术剪剪碎，加入1mLPB9样品DNA提取第1轮扩增第2轮扩增881倍稀释)1总体积总体积4第1轮、第2轮PCR反应条件均为：95℃预变性5min后，35个循环扩增(95℃变性30s、58℃将第2轮PCR扩增产物于1%琼脂糖凝胶(在凝胶中加入DNA核酸染料)进行电泳，电压100V,时间30min～40min。2%的84消毒液浸泡30min后，放置于危险废弃物容器内暂存，委托有资质的固体废弃物无害56A.7加入20μL灭菌一级水溶解沉淀，即用或-7(资料性)猪圆环病毒3型PCR产物电泳图标引序号说明：M——DN
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