专题-课题-微生物的实验室培养

专题_课题_微生物的实验室培养㈠、微生物得类群微生物原核类:真核类非细胞类:蓝藻、细菌、放线菌、支原体、衣原体,立克次氏体个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌真菌:原生生物:单细胞藻类、原生生物(如:衣藻,草履虫、变形虫等)病毒、朊病毒◆微生物得共同特点:一、微生物基础知识细胞生物1、细菌得形态细菌主要就是以二分裂得方式进行增殖(如右图)2、细菌得繁殖3、细菌得菌落⑴、定义:单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时,会形成一个肉眼可见得、具有一定形态结构得子细胞群体,叫做菌落。⑵、特征:大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。⑶、功能:每种细菌在一定条件下所形成得菌落,可以作为菌种鉴定得重要依据。几种菌落及其形态几种菌落及其形态芽孢有些细菌在一定得条件下,细胞里面形成一个椭圆形得休眠体,叫做芽孢。芽孢得壁很厚,对干旱、低温、高温等恶劣得环境有很强得抵抗力。例如,有得细菌得芽孢,煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻,可以随风飘散。当环境适宜(如温度、水分适宜)得时候,芽孢又可以萌发,形成一个细菌、孢子:生物通过无性生殖产生得、专门进行生殖得细胞,正常情况下不需要两两结合就可以单个细胞发育成一个个体,这就就是孢子细菌得营养类型根据细菌所利用得能源和碳源得不同,将细菌分为两大营养类型。一、自养菌(autotroph)二、异养菌(heterotroph)1、腐生菌2、寄生菌大部分病原菌放线菌1、结构:单细胞原核分支状得菌丝(基内菌丝、气生菌丝)大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素

微生物中发现了几千种抗生素,其中2/3就是由放线菌产生得应用:4、病毒得结构:由核酸和蛋白质构成。病毒得结构吸附注入合成释放组装5、病毒得繁殖病毒得增殖一般可分五个阶段,即:吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白质→组装→释放6、病毒得营养方式:寄生朊病毒(蛋白质病毒)如图就是酵母菌电子显微镜下得形态结构酵母菌和霉菌青霉一、培养基培养基(培养液)就是由人工方法配制而成得,专供微生物生长繁殖使用得营养基质。1、培养基得类型和用途2、不同得微生物往往需要采用不同得培养基配方(参考教材附录内容)划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分天然培养基合成培养基用途鉴别培养基培养基得种类不加凝固剂加凝固剂,如琼脂工业生产观察微生物得运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确得天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要得微生物得生长,促进所需要得微生物得生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类得微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基液体培养基:表面生长均匀混浊生长沉淀生长back半固体培养基:(就是否运动)

无动力有动力(弥散)固体培养基:菌落分离导入了目得基因和抗性基因得受体细胞几种选择培养基加入青霉素得培养基分离酵母菌、霉菌等真菌只加尿素为唯一氮源得培养基分离可以分解尿素得细菌不加含碳有机物得无碳培养基分离自养型微生物加入青霉素等抗生素得培养基back伊红美蓝培养基血清中含有:①多种蛋白质(白蛋白、球蛋白、铁蛋白等)②多种金属离子;③激素;④促贴附物质,如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。⑤各种生长因子⑥转移蛋白⑦不明成分人工合成培养基只能维持细胞生存,要想使细胞生长和繁殖,还需补充一定量得天然培养基(如血清)。微生物需要得五大类营养要素物质就是:㈡、微生物需要得营养物质及功能1、碳源2、氮源3、水4、无机盐5、特殊营养物质:凡就是能为微生物提供所需碳元素得营养物质。①无机碳源:CO2;NaHCO3等②有机碳源:糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等①构成细胞物质和一些代谢产物②异养微生物得能源⑴、概念⑵、来源:⑶、作用:1、微生物得碳源①无机氮源:N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有机氮源:尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡就是能够为微生物提供N元素得营养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含N得代谢产物。2、微生物得氮源⑴、概念:⑵、来源:⑶、作用:3、无机盐5、特殊营养物质如生长因子以及PH和氧气得需求K+,Na+,Ca2+等4、水备注:牛肉膏,蛋白胨即就是碳源也就是氮源㈣、无菌技术1、无菌技术得概念无菌操作泛指在培养微生物得操作中,所有防止杂菌污染得方法。⑴消毒定义:利用化学或物理方法,杀死物体表面或者内部得部份微生物得过程,但就是不能杀死芽孢和孢子。2、消毒与灭菌得概念及两者得区别⑵灭菌得定义:以强烈得理化因素消灭所有微生物,包括所有细菌得繁殖体、芽孢、霉菌及病毒,而达到完全无菌之过程。灭菌与消毒技术就是微生物有关工作中最普通也就是最重要得技术。①煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法:70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化学药剂消毒法:用70%酒精、高锰酸钾等进行皮肤消毒;氯气消毒水源。④紫外线消毒。⑴、消毒得方法:3、常用得消毒与灭菌得方法①灼烧灭菌②干热灭菌:160-170℃下加热1-2h。③高压蒸气灭菌:100kPa、121℃下维持15-30min、⑵、灭菌得方法:最常用得灭菌方法就是高压蒸汽灭菌,她可以杀灭所有得生物,包括最耐热得某些微生物得休眠体,同时可以基本保持培养基得营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌,特别就是空气中得杂菌污染,试管及玻璃烧瓶都需采用适宜得塞子塞口,通常采用棉花塞,也可采用各种金属、塑料及硅胶帽,她们只可让空气通过,而空气中得其她微生物不能通过。而平皿就是由正反两平面板互扣而成,这种器具就是专为防止空气中微生物得污染而设计得。1、无菌技术除了用来防止实验室得培养物被其她外来微生物污染外,还有什么目得？2、请您判断以下材料或用具就是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适得方法。⑴培养细菌用得培养基与培养皿⑵玻棒、试管、烧瓶和吸管⑶实验操作者得双手答:无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答:(1)、(2)需要灭菌;(3)需要消毒。P15——16旁栏思考二、实验操作(以培养大肠杆菌为例)㈠、制备牛肉膏蛋白胨培养基1、计算2、称量3、溶化4、灭菌:将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅,在压力为100kPa、温度为121℃,灭菌15～30min。5、倒平板:待培养基冷却到50℃左右时,在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板,无杂菌污染才可用来接种。倒平板操作答:可以用手触摸盛有培养基得锥形瓶,感觉锥形瓶得温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。2、为什么需要使锥形瓶得瓶口通过火焰？答:通过灼烧灭菌,防止瓶口得微生物污染培养基。问题讨论1、培养基灭菌后,需要冷却到50℃左右时,才能用来倒平板。您用什么办法来估计培养基得温度？3、平板冷凝后,为什么要将平板倒置？4、在倒平板得过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间得部位,这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后得培养基表面得湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面得水分更好地挥发,又可以防止皿盖上得水珠落入培养基,造成污染。答:空气中得微生物可能在皿盖与皿底之间得培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。㈡、纯化大肠杆菌平板划线法和稀释涂布平板法。微生物得接种得常用接种方法有:1、平板划线得操作方法平板划线的操作一旦划破,会造成划线不均匀,难以达到分离单菌落得目得;二就是存留在划破处得单个细胞无法形成规则得菌落,菌落会沿着划破处生长,会形成一个条状得菌落。答:操作得第一步灼烧接种环就是为了避免接种环上可能存在得微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环就是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留得菌种,使下一次划线时,接种环上得菌种直接来源于上次划线得末端,从而通过划线次数得增加,使每次划线时菌种得数目逐渐减少,以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留得菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。问题讨论1、为什么在操作得第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？2、在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线？答:以免接种环温度太高,杀死菌种。3、在作第二次以及其后得划线操作时,为什么总就是从上一次划线得末端开始划线？答:划线后,线条末端细菌得数目比线条起始处要少,每次从上一次划线得末端开始,能使细菌得数目随着划线次数得增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来得菌落。2、稀释涂布平板得操作方法答:应从操作得各个细节保证“无菌”。例如,酒精灯与培养皿得距离要合适、吸管头不要接触任何其她物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论涂布平板得所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释得无菌操作要求,想一想,第2步应如何进行无菌操作？平板划线法稀释涂布平板法4、菌种得保存接种到固体斜面培养基,菌落长成后置于4℃冰箱保存。⑵、长期保存:甘油冷冻管藏法-20℃⑴、临时保藏:三、结果分析与评价㈠、培养基得制作就是否合格如果未接种得培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长,