课堂讲义系列高中生物浙科版选修三文档324植物的克隆

第二章克隆技术

第4课时植物的克隆

【选考报告】

知识内容考试属性及要求考情解读

1.简述植物细胞全能性的含义和植物组织培养

的程序。

2.举例说明植物细胞全能性的体现。

3.简述植物细胞培养和器官培养的方法和意

植物的克隆加试(b)

义。

4简.述植物原生质体获得的方法及植物细胞工

程的概念、操作过程和应用。

5.简述多途径的植物克隆实践。

课堂导学夯实基础，以例求法

一、植物细胞全能性和植物组织培养

【知识梳理】

1.植物细胞的全能性

(1)概念：植物体的每个生活细胞都具有遗传上的全能性，因而都具有发育成完整植株的潜能。

(2)原理：植物细胞具有全能性。生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质,

都有发育成为完整个体所需的全部基因。

(3)在生物体内细胞没有表现出全能性，而是分化为不同的组织或器官，这是基因在特定的时

间和空间条件下选择性表达的结果。

2.植物组织培养

(1)一般程序：配制半固体培养基一获取消毒的植物组织一组织培养,获得愈伤组织一诱导新

植株形成。

⑵过程：离体的植物器官、组织或细胞脱会化愈伤组织的化胚状体(或根、芽)一幼苗

移入大田

成熟植株。

小贴士细胞分化、脱分化、再分化的比较

过程形成的结构条件

基因在特定时间和空形成不同组织或器

分化生物体生长发育中

间条件下选择性表达官

①离体

已经分化的细胞转变形成排列疏松、高度

脱分化②提供激素

成未分化细胞液泡化的愈伤组织

③提供营养物质

④提供适宜的外界条

由愈伤组织分化出胚形成具根、芽的胚状

再分化件

状体（幼苗）体

⑤无菌操作

3.植物细胞全能性的体现

植物细胞的全能性更容易体现，植物的组织培养比动物更方便。由于不同种类植物或同种植

物的不同基因型个体之间遗传性的差异,细胞全能性的表达程度大不相同。

【典例剖析1】下图为将胡萝卜的离体组织在一定条件下培育形成试管苗的过程示意图。有

关叙述不正确的是（）

A.①②过程都会发生细胞的增殖和分化

B.这种技术利用了植物细胞全能性

C.适当配比的营养物质和生长调节剂会调节过程①②

D.过程①②需严格控制无菌无毒环境

解析图示为植物组织培养的流程，过程①表示脱分化，过程②表示再分化，脱分化过程不

存在细胞的分化。

答案A

【防错笔记】

植物组织培养基本操作要求

（1）取材：含形成层（分生组织）的部分易于诱导形成愈伤组织。尽管植物体其他已分化的部分

也可以用于组织培养，但诱导形成愈伤组织比较困难。

（2）灭菌：培养基中含有丰富的营养物质，不仅有利于培养物的生长，也有利于各种杂菌的生

长。一旦污染，迅速生长的各种杂菌不仅会与培养物争夺营养，而且杂菌会产生大量对培养

02/15

物有害的物质，导致培养物死亡。

(3)营养物质和生长调节剂的配比要适当，以免影响脱分化和再分化过程。

(4)组织培养过程中使用的培养基对培养过程的影响

起点培养基过程

分化出芽和根的分生组织，然后再继续发育成完整的

愈伤组织固体培养基

植株

单个细胞液体培养基发育成胚状体，最后再生出完整的植株

【典例剖析21下列有关细胞全能性的叙述中，不正确的是()

A.受精卵在自然条件下能使后代细胞形成完整个体，因此其全能性最高

B.生物体内细胞由于细胞分化，全能性不能表达

C.卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性很高

D.植物体细胞在一定条件下离体培养能表现出全能性

解析受精卵是个体发育的起点，在自然条件下，通过细胞的分裂、分化形成完整的个体，

所以其全能性最高。生物体内每一个体细胞都是由受精卵通过有丝分裂形成的，都含有发育

成完整个体所必需的全套基因，理论上讲都应该具有全能性，但由于细胞分化，基因在不同

的细胞中选择性表达，所以生物体内细胞并没有表达出其全能性。卵细胞在一定的条件下，

全能性表达比体细胞高，但与受精卵不同的是，卵细胞的分化程度也很高。分化的植物体细

胞尽管具有全能性，但必须在一定的条件下离体培养才可表达。

答案C

【防错笔记】

植物细胞表达全能性的条件

(1)离体状态。脱离植物体的植物细胞、组织和器官统称为外植体，制备外植体是细胞全能性

表达的必要条件。

(2)无菌条件。外植体消毒、接种和培养要做到无菌操作。

(3)尽量选择性状优良、细胞全能性表达充分的基因型。

(4)环境条件适宜(营养物质、激素、温度等)。植物组织培养时，培养基中除含有一定的水分、

无机盐外，还要通过平衡的植物激素配比进行调控，实现不同器官的发生和形态建成。

二、植物克隆的成就

【知识梳理】

1.细胞培养

(1)过程：单个植物细胞经过培养基中成分的诱导，依次发育成细胞团、球形胚、心形胚和胚

状体,最后再生出完整的植株。

(2)细胞培养的诱导方法：主要通过平衡的植物激素配比进行调控。例如，适量的生长素和细

胞分裂素配比可以诱导芽的分化;适量的呼I噪乙酸(IAA)及适当减除其他植物激素，则可以诱

导生根。

2.器官培养

在植物器官培养方面，雌性花器官的培养成果显着,例如子房的培养、胚囊的培养均已取得

进展。

3.原生质体培养和植物细胞工程

(1)植物原生质体的获得方法：在0.5〜0.6mol/L的甘露醇溶液环境(较高渗透压)下用纤维素酶

和果胶酶混合液处理根尖、叶片、愈伤组织或悬浮培养细胞，将细胞壁消化除去,获得球形

的原生质体。

(2)植物细胞工程的概念和操作过程：培养植物细胞(包括原生质体)，借助基因工程方法,将

外源遗传物质(DNA)导入受体细胞(包括原生质体受体)中，或通过细胞融合、显微注射等将不

同来源的遗传物质重新组合，再通过对这些转基因细胞或重组细胞进行培养，获得具有特定

性状的新植株。

4.多途径的植物克隆实践

植物克隆技术应用

能产生重要次生代谢产物(如某些中药)

大量培养特定细胞系

的细胞的大量克隆和产物的工业化生产

花药(花粉)培养，进行单倍体克隆对烟草、大麦等育种

选择细胞培养产生的表现出遗传变异的

选择具备有益性状的作物新类型

新植株

在培养基中加入不同浓度NaCl或病原

诱发和筛选抗盐或抗病突变体

体的毒蛋白

产生抗赖氨酸类似物突变体,其中赖氨

在培养基中加入不同浓度的赖氨酸类似

酸、蛋氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的水平

物

会升高

【典例剖析】植物叶肉细胞原生质体的分离和培养的主要过程可用下图所示图解简单表示,

请据图回答下列问题：

04/15

（1）培育胚状体利用了这一项生物技术，胚状体再继续培养，则可培育出完整的植株,

这体现了植物细胞的。

（2）要获得植物叶肉细胞的原生质体，需要在________溶液环境下，用酶和

酶去除细胞壁。

（3）培养基中除了含有一定的营养外，还必须含有等植物激素，还需要对培养基进行

严格的o

（4）如果愈伤组织是三七叶肉细胞培养产生的，若为了获得三七的人工种子，则需要培养到

;若为了获得三七的细胞产物，则只需要培养到。如果愈伤组织是棉花叶

肉细胞培养产生的，通过基因工程要获取抗虫棉，重组DNA分子导入棉花愈伤组织细胞常

用的方法是法。

（5）从叶片的叶肉细胞到获得胚状体的过程中，必须要经过________（不定项选择：A.有丝分裂

B.减数分裂C.原生质体融合D.脱分化E.再分化）。

解析（1）离体植物细胞通过脱分化形成愈伤组织，通过再分化形成具有根和芽的胚状体，再

通过细胞分裂、分化发育成一个完整的植株。该技术称为植物组织培养，其原理为植物细胞

的全能性。（2）制备叶片原生质体的酶混合液中，一般含较高浓度的甘露醇，其目的是避免制

备的原生质体吸水涨破；根据酶的专一性，去除植物细胞壁需用纤维素酶和果胶酶。（3）培养

基的成分包括水、无机盐、维生素、氨基酸、蔗糖、植物激素（生长素和细胞分裂素等）等；

培养基要求进行严格的灭菌。（4）三七的细胞产物为细胞的代谢产物，将三七叶肉细胞培养到

愈伤组织即可；获得人工种子需培养至胚状体；棉花为双子叶植物，导入抗虫基因常用农杆

菌转化法。（5）离体叶肉细胞培养到胚状体的过程中必须经过脱分化和有丝分裂形成愈伤组

织，再分化和有丝分裂形成具有根和芽的胚状体。

答案（1）植物组织培养全能性（2）0.5~0.6mol/L的甘露醇纤维素果胶（3）细胞分裂

素、生长素灭菌（4）胚状体愈伤组织农杆菌转化（5）ADE

【防错笔记】

L植物细胞工程过程

植物细胞（包括原生质体）

一

培养「基因工程方法外

源

遗

显微注射传

导人物

质

—细胞融合一

转基因细胞（或重组细胞）

培养

新赢

2.原生质体

⑴特点

①比较容易摄取外来的遗传物质。

②便于进行细胞融合，形成杂交细胞。

③与完整细胞一样具有全能性，仍可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株。

（2）获得原生质体的方法：在0.5〜0.6mol/L的甘露醇溶液环境（较高渗透压）下，用纤维素酶和

果胶酶混合液处理组织、器官、细胞。

（3）培养过程

植物细胞错误!，纤维素酶和果胶酶））球形的原生质体一植株

【变式训练】利用植物的茎尖、叶片、茎段或花粉等，在无菌条件下，培养在玻璃器皿中人

工配制的培养基上，使它发育成完整的植株。这种技术可以用来培育植物新品种，也可以在

较短时间内大量繁殖植物，还可以防止植物病毒的危害。下列关于这种技术的叙述，不正确

的是（）

A.这种技术利用了植物细胞的全能性

B.这种技术叫做植物组织培养，可以克隆生物体

C.这种技术属于细胞工程的应用领域之一

D.这种技术是一种有性繁殖的方式

解析植物体细胞都含有该物种全套遗传信息，所以理论上每个细胞都具有全能性，都有发

育成完整植物体的潜能。植物组织培养是在体外通过人工方法让植物细胞表现出全能性，是

植物细胞工程的基础技术手段。因为没有生殖细胞的结合，所以植物组织培养技术是一种无

性繁殖方式。

答案D

I知识卡片|

1.植物克隆的技术基础是植物组织培养。

2.植物克隆的理论基础是植物细胞的全能性。

3.植物细胞的全能性是指植物体的每个生活细胞都具有发育成完整植株的潜能。

4.植物组织培养的一般流程是：

离体的植物组织、细胞脱殳生愈伤组织性殳化胚状体（或根、芽）一完整植株

5.植物原生质体获得方法：在0.5〜0.6mol/L的甘露醇溶液环境下用纤维素酶和果胶酶混合液

处理植物细胞。

06/15

随堂检测分类演练，点点突破_____________________________________________________________

1.判断正误

（1）配制植物组织培养培养基时，需要先灭菌，再加入适当营养物质和植物生长调节剂。（X）

（2）植物组织培养所用的小组织块需要消毒。（J）

（3）将植物组织块放在培养基上经再分化可形成愈伤组织。（义）

（4）培养形成愈伤组织和形成新植株所用的培养基生长调节剂的配比不同。（J）

（5）原生质体包括质膜、细胞质和细胞核。（J）

2.下列有关植物克隆的方法，错误的是（）

A.愈伤组织细胞一具芽和根的分生组织一完整植株

B.愈伤组织细胞一单细胞f细胞团一球形胚心形胚一胚状体f完整植株

C.愈伤组织一花器官（如风信子）

D.植物细胞一原生质体一胚状体一完整植株

解析原生质体培养过程未经胚状体这一结构。

答案D

3.如图为某植物的培育过程，请据图判断下列说法中错误的是（）

ABCDEF

组织分化

A.A-F不能体现细胞的全能性

B.C中是无特定形态的薄壁细胞

C.植株A和F中的染色体组数不同

D.植株F一般不能直接应用于生产

解析A-F为花药的离体培养过程，能体现细胞的全能性。该过程为：花药细胞也至生愈伤

组织购g试管苗幽F植株，但F植株是单倍体植株，植株弱小且高度不育，一般不能直

接应用于生产，需经秋水仙素处理其幼苗得到可育的纯合子，方可应用于生产。

答案A

4.某科研团队利用植物细胞工程技术，把基因序列已知的抗除草剂（Bar）基因导入原生质体获

得抗除草剂大豆。请回答下列相关问题：

IBai•基因—_________

-----------［重组DNA|

I载体P~~

I幼叶组织l-M忌闲耳福

⑴对于已获得的Bar基因可以用技术进行扩增。图中的a过程通常使用相同的

酶和DNA连接酶，使目的基因与载体连接形成重组DNA。

(2)在b过程中，获得原生质体除了需要纤维素酶和果胶酶，还需要用到的试剂是o

(3)成功导入重组DNA的原生质体经脱分化形成I,进而生长发育成植株。下列不

属于I细胞应具有的特征是o

A.薄壁细胞B.细胞质丰富

C.液泡小D.细胞核小

⑷若要判断转基因抗除草剂大豆是否培育成功，比较简便的检测方法是

解析(1)利用PCR技术可以在体外大量复制特定的DNA片段，对目的基因大量扩增就可以

通过PCR实现。通常使用相同的限制性核酸内切酶和DNA连接酶，使目的基因与载体连接

形成重组DNA。在较高浓度的甘露醇溶液环境下，用纤维素酶和果胶酶混合液处理幼叶组织,

可获得原生质体。(3)成功导入重组DNA的原生质体经脱分化形成愈伤组织，进而生长发育

成植株。愈伤组织是由相对没有分化的薄壁细胞组成，其细胞细胞质丰富、液泡小而细胞核

大。(4)若要判断转基因抗除草剂大豆是否培育成功，可用一定浓度0.5〜0.6mol/L的除草剂

喷洒，观察转基因大豆的生长情况。

答案(l)PCR限制性核酸内切(2)(较高浓度的)0.5〜0.6mol/L甘露醇

(3)愈伤组织D(4)用一定浓度的除草剂喷洒，观察转基因大豆的生长情况

5.下面是关于植物克隆的问题。请回答：

(1)为培育能高效吸收和富集重金属镉的转基因植物，将野外采得的某植物幼叶消毒后，用酶

混合液处理，获得了原生质体。酶混合液中含有适宜浓度的甘露醇，其作用是

(2)将目的基因导入到原生质体，经培养形成愈伤组织，再将含有愈伤组织培养物的试管放在

________上，通过________得到分散的胚性细胞，发育成，继续发育可形成转基因

植株。

(3)愈伤组织继代次数过多会丧失细胞全能性的表达能力，下列原因错误的是(A.愈伤

组织发生遗传变异B.愈伤组织不能分散成单细胞C.愈伤组织中激素平衡发生改变D.愈

08/15

伤组织对外源激素敏感性发生改变）。

答案（1）维持渗透压（2）摇床液体悬浮培养胚状体（3）B

教材问题详解助教兴学，教材通关______________________________________________________

［思考与练习］（第27页）

一、判断题

1.V

2.X［不同种类植物或同种植物的不同基因型个体之间由于遗传性的差异，细胞全能性的表

达程度大不相同。］

3.X［植物细胞工程技术包含植物组织培养、植物体细胞杂交等多种技术。］

二、简答题

L开放性题目，按自己的理解回答，合理即可。如植物组织培养技术是植物克隆的重要技术

之一，其他各种技术最终都要利用植物组织培养技术等。

2.略。

课时作业课后训练，练出高分___________________________________________________________

（时间：30分钟满分：50分）

一、选择题（共8小题，每小题2分，共16分）

1.下列属于组织培养的是（）

A.花粉培育成单倍体植株

B.芽发育成枝条

C.根尖分生区发育成成熟区

D.受精卵发育成植株

解析植物组织培养的过程简要概括为：离体的植物器官、组织或细胞经脱分化形成愈伤组

织，经再分化形成根、茎、叶等器官，并进一步培育成完整的植株。花粉离体培养是组织培

养的新技术，花粉细胞具有全能性；芽发育成枝条、根尖分生区发育成成熟区是正常的生长

过程；受精卵发育成植株，属于自然生长，不属于组织培养的范畴。

答案A

2.下列关于植物组织培养技术的叙述中，错误的是（）

A.培养基中添加营养物质的目的是提供营养和调节渗透压

B.培养基中的植物生长调节剂影响愈伤组织的生长和分化

C.离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织

D.同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因型相同

解析植物组织培养技术既可对植物体细胞进行组织培养，也可对生殖细胞进行组织培养。

假设某植株的基因型为Aa,取其根尖细胞离体培养形成的愈伤组织基因型仍为Aa；若取该

植株花药细胞离体培养，形成的愈伤组织基因型为A或a。

答案D

3.植物细胞表现出全能性的必要条件是（）

A.给予适宜的营养和外界条件

B.导入其他植物细胞的基因

C.脱离母体后，给予适宜的营养和外界条件

D.将成熟筛管的细胞核移植到去核的卵细胞内

解析植物细胞表达全能性的条件有二点：①在离体状态下；②在一定的营养物质、激素和

其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。

答案C

4.如图为植物组织培养过程，有关说法不正确的是（）

组织块*w-愈伤组织Z—

日-培养基导或培养基

ABD

A.B试管中细胞全能性最高

B.D试管中培育出的个体都是纯合子

C.A-B的过程需要激素的刺激

D.A-D的细胞分裂都是有丝分裂

解析植物组织培养能保持亲本的优良性状。A-B的过程需要激素的刺激。A~D只发生有

丝分裂，不发生减数分裂。D试管中是否为纯合子取决于亲本。

答案B

5.植物细胞培养是在植物组织培养技术的基础上发展起来的，下列有关植物细胞培养的叙述,

不正确的是（）

A.植物细胞培养技术的目的之一是为了获得大量有生理活性的次级代谢产物

B.植物细胞培养技术快速、高效，不受季节、地域等条件的限制

C.利用生物反应器悬浮培养人参细胞，提取人参皂虱，用于生产保健药品和美容护肤用品

D.植物细胞培养需要在一定的温度、pH等条件下进行，但不需要进行无菌操作

10/15

解析植物细胞培养和植物组织培养一样，整个培养过程必须在无菌条件下进行，否则培养

基内将长出许多杂菌与离体细胞争夺营养与生存空间，影响细胞增殖和细胞次级代谢产物的

获得。A项所述为植物细胞培养的目的，B项为特点，C项为应用。

答案D

6.下图是两种二倍体植物细胞（甲、乙）融合并培育新植株的过程，下列有关分析正确的是（）

¥相龙砥二田《田一甘

乙尊）一尊）J、田一,

A.过程①的目的为除去细胞膜获得原生质体

B.过程②要用聚乙二醇等方法诱导原生质体融合，主要依据细胞膜具有选择透性原理

C.过程④⑤⑥需要根据生长发育进程更换不同的培养基

D.最终得到的植株相对于甲、乙而言发生了染色体数目变异，不具有可育性

解析过程①的目的为除去细胞壁获得原生质体。诱导原生质体融合主要依据细胞膜具有流

动性。过程④⑤⑥需要根据生长发育进程更换不同的培养基，诱导生芽、生根。最终得到的

植株相对于甲、乙而言发生了染色体数目变异，由于存在同源染色体，具有可育性。

答案C

7.下图表示利用棉花叶肉细胞原生质体培养进行遗传改良的过程，据图分析不正确的是（）

紫外线照射

[②

雕2a原生质体旦愈伤组织里根、芽一棉花幼苗

A.①过程需在适宜条件下用纤维素酶和果胶酶处理

B.②过程能定向诱导原生质体产生优良性状的突变

C.③过程中叶肉细胞失去了其特有的结构和功能

D.④过程需用适宜浓度的植物激素配比

解析通过紫外线诱导原生质体产生具有优良性状的突变，属于基因突变或染色体畸变，但

这些变异是不定向的。

答案B

8.下列四个选项中，没有采用植物组织培养技术的是（）

A.利用离体茎尖培养得到植株

B.利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗得到多倍体植株

C.利用基因工程培育抗棉铃虫的棉花植株

D.利用细胞工程培育“番茄一马铃薯”杂种植株

解析利用基因工程培育抗虫棉的过程中，把目的基因导入受体细胞后，要诱导其分裂、分

化，最后发育为一个植物体，必须经过组织培养才能实现。培育“番茄一马铃薯”杂种植株

的过程中，对融合的杂种细胞也必须经过组织培养才能形成杂种植株。用秋水仙素处理萌发

的种子或幼苗长成多倍体植株未用到植物组织培养。

答案B

二、非选择题（共4小题，共34分）

9.（8分）利用基因工程技术将突变的IPA1基因转入水稻细胞中从而获得某水稻新品种。

（1）培育该转基因水稻新品种的核心是构建_______o该过程需要用到的工具酶有o

在将重组DNA分子导入受体细胞过程中，常用氯化钙处理土壤农杆菌，以增加的

通透性，使含有目的基因的重组DNA分子进入宿主细胞。

（2）在含目的基因的水稻细胞培育成植株过程中可以将含有愈伤组织的培养物放在摇床上，通

过_______培养分散成单细胞。其中培养过程正确的是（A.配制只含有适当营养物质

的培养基，倒在灭菌试管中凝固成半固体B.从灭菌的根、茎或叶上切取一些小组织块，进

行培养C.这种单细胞具有细胞质丰富、液泡大、细胞核大的特征D.水稻体细胞与这种单

细胞的全能性表达程度大不相同）

（3）利用水稻细胞制备原生质体时，需在0.5〜0.6mol/L的甘露醇溶液中进行处理，该溶液浓

度与水稻细胞中的浓度相当。

答案（1）重组DNA分子限制性核酸内切酶、DNA连接酶（写全得分）细胞壁（2）液体悬

浮D（3）细胞液

10.（8分）某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答：

（1）原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5〜0.6mol/L甘露醇（维

持较高渗透压）的混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。

⑵原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。此时，应该

培养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成

再生植株。途径一：细胞团经球形胚、和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞

团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。上述

发芽培养基中含量相对较高的激素是,胚性细胞的主要特点是：-（A.液泡

小、细胞核小B.液泡大，细胞核大C.液泡大，细胞核小D.液泡小、细胞核大）

（3）为了对烟草的某些性状进行改良，分离得到两种烟草的原生质体后，通过__________方法

12/15

将他们的遗传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的DNA,

采用扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。

解析（1）原生质体的分离，需要在较高渗透压的甘露醇溶液中，将植物细胞用纤维素酶和果

胶酶处理，去除细胞壁，从而得到原生质体。（2）当原生质体再生出细胞壁后，应当降低培养

基中甘露醇浓度，否则将会影响细胞的分裂和生长。胚性细胞继续培养形成细胞团。然后经

球形胚、心形胚和胚状体，最后发育成植株。发芽培养基中含量相对较高的激素是细胞分裂

素，而生长素含量较低。胚性细胞的主要特点是细胞质丰富、液泡小而细胞核大。（3）分离得

到两种烟草的原生质体后，可以通过原生质体融合的方法将它们的遗传物质组合在一起，经

培养获得具有新性状的再生植株。在体外扩增相关基因的方法是采用PCR技术。

答案（1）纤维素酶和果胶酶（2）降低心形胚细胞分裂素D（3）原生质体融合PCR

11.（8分）兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转入矮牵牛

中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力。请回答：

⑴从兔肝细胞中提取mRNA,在酶的作用下形成互补的DNA,然后以此DNA为模

板扩增得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成,再

导入用氯化钙处理的,侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得

到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是（A.叶片在含合适浓度生长素的培养基上分

化形成愈伤组织B.愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽C.再生

的芽在细胞分裂素含量高的培养基上生根D.愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养

基上脱分化形成再生植株）。

（2）取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中。将试管置

于_______上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是

否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养的作用：一是提供营养；二是，

从而使叶片保持正常的形态。

解析（1）以mRNA为模板合成DNA的过程为逆转录过程，这一过程需要在逆转录酶的催化

下进行。获得目的基因后，需在限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用下，将目的基因与

运载体（Ti质粒）连接形成重组质粒（重组DNA分子），再将其导入受体细胞。将目的基因导入

植物细胞常用农杆菌转化法，先将重组DNA导入经氯化钙处理的农杆菌，再用导入目的基

因的农杆菌感染植物细胞，最终实现将目的基因导入植物细胞内。导入目的基因的植物细胞

经组织培养过程形成转基因植物。组织培养过程中，叶片在含适宜浓度的生长素和细胞分裂

素的培养基上脱分化形成愈伤组织，然后在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成

芽，继而在生长素含量高的培养基上生根，最后形成完整的植