高中生物苏教版选择性必修3生物技术与工程第二章第三节第3课时动物细胞融合技术及其应用（71张）

第3课时动物细胞融合技术

及其应用1.阐明动物细胞融合技术的概念，举例说出诱导动物细

胞融合的方法。2.概述单克隆抗体的制备过程。学习目标1.科学思维：建立模型——动物细胞融合的方法和单克

隆抗体制备的基本操作流程。2.社会责任：认同单克隆抗体在临床上具有重要的应用

价值。素养要求内容索引网络构建课时对点练一、动物细胞融合技术二、动物细胞融合技术的应用一、动物细胞融合技术1.概念：是指在一定的条件下将

动物细胞，通过物理、化学或生物方法，结合形成

细胞的技术。2.融合方法(1)自发融合缺点：频率

。(2)人为促进细胞融合①生物方法a.诱导物：

，如仙台病毒、疱疹病毒、腮腺炎病毒等。b.诱导机理：病毒可以与细胞质膜发生作用，使细胞紧密凝集，直至融合。c.缺点：病毒进入细胞后，可能会对细胞的

产生一定的干扰。教材梳理预习新知

夯实基础两个或多个一个极低病毒生命活动②化学方法a.诱导剂：

。b.局限性：有一定的

，对某些细胞(如

)不适用。③物理方法a.诱导方法：

融合法。b.优点：对细胞伤害

，易操作、控制和观察。(3)诱导细胞融合的机理在各种方法的促融合作用下，细胞质膜出现

、

和

，进而发生细胞质融合和细胞核的融合，最终形成

。聚乙二醇毒性卵细胞电场诱导小粘连破裂融合杂种细胞(4)融合结果人工诱导细胞融合后，可能产生

类型的细胞，因此需要对细胞进行_____，挑选出所需要的细胞。多种筛选(1)细胞融合体现了细胞质膜的流动性(

)(2)通过诱导只能使同物种细胞发生融合，而不能使不同物种的细胞之间发生融合(

)(3)与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导方法有聚乙二醇(PEG)诱导融合法、灭活的病毒诱导融合法(

)(4)二倍体动物细胞融合后的杂种细胞仍然是二倍体细胞(

)判断正误√×××核心探讨1.19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中，观察到多核细胞。如何解释这一现象？突破重难强化素养提示病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。2.比较动物细胞融合技术和植物体细胞杂交技术(1)动物细胞融合和植物体细胞杂交技术的原理分别是什么？提示动物细胞融合的原理是细胞质膜的流动性；植物体细胞杂交技术的原理是细胞质膜的流动性和植物细胞的全能性。(2)两者在方法上有什么异同？提示都可用聚乙二醇(PEG)诱导融合法和电场诱导融合法诱导融合；但动物细胞还可用灭活的病毒诱导融合法诱导细胞融合。(3)两者在最终结果上有什么不同？提示动物细胞融合最终得到的是杂种细胞，而植物体细胞杂交技术最终得到的是杂种植株。核心归纳动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞质膜的流动性、细胞的全能性细胞质膜的流动性步骤酶解法去掉细胞壁后，诱导原生质体融合，形成杂种细胞，再经植物组织培养形成杂种植株分散成单个细胞后诱导细胞融合，形成杂种细胞方法化学融合法(聚乙二醇法)、物理融合法(电融合法)生物方法(病毒诱导融合法)、化学方法(聚乙二醇诱导融合法)、物理方法(电场诱导融合法)结果形成杂种植株形成杂种细胞，以生产细胞产品意义打破生殖隔离，实现远缘杂交育种突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能典题应用1.对比动物细胞融合和植物体细胞杂交技术，下列论述合理的是A.均可使用PEG、电融合或灭活病毒诱导细胞融合B.两者都可以跨越种属间的生殖隔离C.两者都可以体现细胞的全能性D.在适宜的条件下，均可产生完整个体及时反馈知识落实√解析灭活的病毒诱导是动物细胞融合特有的生物方法，A错误；动物细胞融合和植物体细胞杂交技术都可以打破生殖隔离，B正确；植物体细胞杂交技术体现了细胞的全能性，动物细胞融合没有体现，C错误；目前，动物细胞融合技术不能产生完整个体，D错误。2.基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合，用灭活的病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的细胞A.AAaa B.AaBbC.Aabb D.BBbb解析基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合，用灭活的病毒处理后，会有以下情况出现：Aa和Aa融合形成的细胞是AAaa，Bb和Bb融合形成的细胞是BBbb，Aa和Bb融合形成的细胞是AaBb。√二、动物细胞融合技术的应用1.应用前景在

、

等领域展现出美好的前景。2.单克隆抗体的制备和应用(1)传统方法制备的抗体的缺点①是含有多种抗体的

抗体。②不能

地对付某一类病原体。③治疗效果不佳。教材梳理预习新知

夯实基础基因治疗疾病诊断混合专一性(2)单克隆抗体的制备过程浆细胞杂交细胞特定抗体克隆(3)单克隆抗体的应用①制备单克隆抗体

，其优点是对肿瘤细胞有较好的

杀伤作用。②由于单克隆抗体可以高度

地识别抗原，它在

上也有一定的临床价值。③利用单克隆抗体进行

，其目的是利用

的单克隆抗体在体内显示肿瘤

，用以指导手术范围。靶向制剂选择性特异性疾病诊断导向手术同位素标记位置(1)浆细胞与骨髓瘤细胞融合后需要进行筛选(

)(2)实验室制备单克隆抗体可通过动物体内培养或体外培养两种途径获得(

)(3)要提取单克隆抗体必须要破碎细胞(

)判断正误√√×核心探讨1.根据单克隆抗体的制备过程，回答以下问题。(1)给小鼠注射特定抗原的目的是什么？突破重难强化素养提示目的是能从该小鼠的脾脏中得到可以产生特定抗体的浆细胞。(2)浆细胞与骨髓瘤细胞经诱导融合后，培养基中共出现几种细胞？其中融合的细胞有几种？(若融合的话，只考虑两两融合)提示共有5种细胞；其中融合的细胞有3种。(3)如图是核苷酸合成的两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶。制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选特定的细胞，请问该培养基是一种什么培养基？诱导后能在该培养基中存活的是什么细胞？不能存活的是什么细胞？原因分别是什么？提示HAT培养基是选择培养基。骨髓瘤细胞及其自身融合的细胞中缺乏转化酶，无法进行上述两个途径，因而在HAT培养基上不能增殖；浆细胞和自身融合的细胞因高度分化而不能增殖，在该培养基上能增殖的只有杂交瘤细胞，因为虽然杂交瘤细胞中全合成途径被物质A阻断，但其可借助浆细胞的补救合成途径来合成核苷酸，进而大量繁殖。(4)经HAT培养基筛选出来的杂交瘤细胞都是分泌所需抗体的杂交瘤细胞吗？如果不是，怎样将分泌所需抗体的杂交瘤细胞筛选出来？提示不全是；可以通过抗原—抗体杂交将分泌所需抗体的杂交瘤细胞筛选出来。2.根据资料，回答问题。资料使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞。但细胞毒素没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，这限制了它在临床上的应用。抗体—药物偶联物(antibody－drugconjugate，ADC)通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。ADC通常由抗体、接头和药物(如细胞毒素)三部分组成，它的作用机制如右图所示。(1)据图分析ADC进入肿瘤细胞的方式是什么？需不需要能量？提示胞吞；需要能量。(2)ADC的抗体和药物各具有什么作用？提示抗体具有靶向运输作用；药物具有治疗作用。(3)ADC与传统的化疗相比较具有什么优势？提示ADC协同发挥了抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用，具有靶点清楚、毒副作用小的优点。核心归纳1.单克隆抗体制备的过程2.单克隆抗体制备过程中两次筛选的比较比较项目第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种融合细胞，还有未融合的细胞等由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择培养获得的杂交细胞中有能产生其他抗体的细胞筛选目的筛选出杂交细胞筛选出能分泌特定抗体的杂交细胞筛选方法用特定的选择培养基筛选；未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交细胞才能生长用96孔板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交细胞的情况下进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到足够数量的能分泌特定抗体的细胞典题应用3.(2021·江苏泰州中学高二期中)下列有关单克隆抗体制备过程的叙述错误的是A.过程①注射一种灭活病毒可使

小鼠体内产生浆细胞B.过程②形成的两两融合细胞只

有图中所示的类型C.过程③采用抗原—抗体反应进

行特定杂交细胞的筛选D.过程④获得的全部杂交细胞都只能产生同一种抗体及时反馈知识落实√可借助抗原—抗体间特异性结合反应进行特定杂交细胞的筛选，筛选出能产生特定抗体的杂交细胞，C正确；经过过程③筛选获得特定的杂交细胞，再经过④克隆获得的全部杂交细胞都只能产生同一种抗体，D正确。解析灭活的病毒可作为抗原引起小鼠体内产生免疫反应，产生浆细胞，A正确；过程②形成的融合细胞包括同种细胞融合和异种细胞融合，即过程②还可以形成浆细胞与浆细胞、瘤细胞与瘤细胞间的融合细胞，B错误；4.下图是一种“生物导弹”的作用原理示意图，没有与肿瘤细胞结合的“生物导弹”一段时间后被机体清除。阿霉素是一种抗肿瘤药，可抑制DNA和RNA的合成，对正常细胞也有一定毒性。下列说法不正确的是A.单克隆抗体是由杂交细胞合

成和分泌的B.活化阿霉素能抑制细胞中的

DNA复制和转录过程C.在治疗中，应先注射非活化

磷酸阿霉素再注射生物导弹D.单克隆抗体特异性强，能减轻阿霉素对正常细胞的伤害√活化的阿霉素抑制DNA和RNA的合成，DNA合成是经过DNA的复制，RNA的合成经过转录，B正确；根据图中信息阿霉素的活化需要生物导弹携带的碱性磷酸酶，所以在治疗中，应先注射生物导弹再注射非活化磷酸阿霉素，但不能间隔时间太长，因为没有与肿瘤细胞结合的“生物导弹”一段时间后被机体清除，C错误；解析单克隆抗体是由骨髓瘤细胞和浆细胞融合形成的杂交细胞合成分泌的，A正确；单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、可大量制备的特点，根据特异性强这一特点，在该过程中是针对肿瘤细胞的，所以能减轻阿霉素对正常细胞的伤害，D正确。网络构建课时对点练题组一动物细胞融合技术1.下列关于动物细胞融合的叙述错误的是A.在体外培养条件下，动物细胞可自发融合，但是频率极低B.聚乙二醇具有一定的毒性，对卵细胞不适用C.物理方法对细胞伤害小，易操作、控制和观察D.在人工诱导条件，只能使不同物种的细胞之间发生融合√12345678910对点训练111213141516解析通过人工诱导细胞融合，不仅能使同物种细胞发生融合，也能使不同物种的细胞之间发生融合。2.(2021·安徽高二月考)下列关于植物体细胞杂交和动物细胞融合的叙述，错误的是A.植物体细胞杂交和动物细胞融合的原理中都用到细胞膜的流动性B.植物体细胞杂交需要用酶解法去除细胞壁C.诱导原生质体融合的方法和诱导动物细胞融合的方法完全不同D.植物体细胞杂交最终培育成杂种植株，动物细胞融合没有培育成杂种

个体√12345678910111213141516解析二者都可以用电融合法、聚乙二醇试剂诱导等方法进行融合，C错误。3.将携带抗P基因、不带抗Q基因的鼠细胞去除细胞核后，与携带抗Q基因、不带抗P基因的鼠细胞融合，获得的胞质杂种细胞具有P、Q两种抗性。该实验证明了A.抗Q基因位于细胞核中B.该胞质杂种细胞具有无限增殖能力C.抗P基因位于细胞质中D.该胞质杂种细胞具有全能性12345678910111213141516√12345678910111213141516解析“将携带抗P基因、不带抗Q基因的鼠细胞去除细胞核后”，该细胞只留下细胞质，但胞质杂种细胞具有P、Q两种抗性，说明抗P基因位于细胞质中，抗Q基因既可能位于细胞核中，也可能位于细胞质中。题组二单克隆抗体及其应用4.下面是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过程注射的物质和A细胞的名称分别为A.抗体、T细胞

B.抗原、T细胞C.抗体、浆细胞

D.抗原、浆细胞√解析单克隆抗体是由骨髓瘤细胞与浆细胞融合而成的杂交细胞产生的，其中浆细胞必须经过特定抗原刺激后才能成为具有分泌抗体功能的细胞。123456789101112131415165.关于应用动物细胞工程技术获取单克隆抗X抗体的具体操作步骤如下，其中对单克隆抗体制备的相关叙述不正确的是①将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的浆细胞②从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞③利用促细胞融合因子使两种细胞发生融合④将杂交细胞注入小鼠腹腔中培养⑤筛选出能产生抗X抗体的杂交细胞⑥从腹水中提取抗体A.实验顺序应当是①②③⑤④⑥B.④过程中产生多个杂交细胞的过程也属于克隆C.③过程中获得的细胞均可无限增殖D.③到⑤过程中通常要经过两次筛选12345678910111213141516√解析诱导动物细胞融合后，浆细胞自身融合的细胞不能无限增殖。6.下图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程，下列有关叙述不正确的是A.图中实验小鼠注射

的甲是能与抗人体

胃癌抗体特异性结

合的抗原B.利用PEG诱导融合法、灭活的病毒诱导法和电场诱导融合法等均可诱导细胞

融合获得乙C.用特定的选择培养基对乙筛选，融合细胞均能生长，未融合细胞均不能生长D.丙需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选后可获得大量能分泌所需抗体

的丁√12345678910111213141516解析选择培养基只能让特定的符合条件的细胞存活下来，在题目给定的选择培养基上，只有特定的杂交细胞才能够存活。123456789101112131415167.甘草酸是中药甘草中的主要活性成分。为了快速检测甘草酸，科研人员利用动物细胞工程技术制备了抗甘草酸的单克隆抗体，其基本操作过程如图。下列相关叙述正确的是A.过程①注射相应抗原后应立即

从小鼠脾脏中提取细胞甲B.过程②诱导细胞融合，利用了

细胞质膜的选择透过性C.过程③④的筛选方法相同，细胞丙、丁的遗传物质相同D.过程⑤无论在体内还是体外进行，细胞丁都可大量增殖√12345678910111213141516解析过程①注射相应抗原后，需要机体进行免疫，使B细胞增殖分化产生具有免疫能力的浆细胞，才可以从小鼠脾脏中提取细胞甲，A错误；过程②诱导细胞融合，利用了细胞质膜的流动性，B错误；过程③是用选择性培养基筛选获得杂交细胞，过程④是用抗体检测和克隆培养得到能产生特定抗体的杂交细胞，C错误。123456789101112131415168.下列有关单克隆抗体制备的叙述，不正确的是A.小鼠骨髓瘤细胞染色体数为40，其浆细胞的染色体数为40，二者融合

后形成的杂交细胞DNA分子数为80B.在单克隆抗体的制备过程中，至少涉及两次筛选C.单克隆抗体的制备需要用到动物细胞培养、动物细胞融合等技术D.浆细胞与骨髓瘤细胞经细胞融合后有三种融合细胞类型(若仅考虑细胞

两两融合的情况)√12345678910111213141516解析小鼠骨髓瘤细胞染色体数为40，其浆细胞的染色体数为40，二者融合后形成的杂交细胞染色体数为80，由于细胞质中也有DNA，所以DNA数大于80，A错误；浆细胞与骨髓瘤细胞经细胞融合后有三种两两融合的细胞类型，即杂交细胞、浆细胞—浆细胞、骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞，D正确。123456789101112131415169.如图为杂交细胞制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT－)，在HAT筛选培养液中不能正常合成DNA，无法生长。下列叙述不正确的是A.可用灭活的仙台病毒诱导细胞融合B.两两融合的细胞都能在HAT培养液中生长C.杂交细胞需进一步筛选才能用于生产D.细胞质膜的流动性是细胞融合的基础12345678910√111213141516解析灭活的仙台病毒是诱导动物细胞融合的方法之一，A项正确；骨髓瘤细胞之间融合因为都缺少次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT－)而不能生长，B项错误；12345678910111213141516第二次筛选能产生特定抗体的杂交细胞，C项正确；细胞融合体现了细胞质膜的流动性这一结构特点，D项正确。选择题10～11题为单选题，12～14题为多选题。10.双抗体夹心法(如图)是医学上常用的定量检测抗原的方法，利用细胞工程技术制备的单克隆抗体能增强该过程的有效性。下列相关叙述正确的是A.将相关抗原注射到小鼠

体内，可从小鼠脾脏中

获得所需的单克隆抗体B.固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于两者结构相同C.加入酶标抗体的目的是通过测定酶反应产物量来判断待测抗原量D.该方法与只使用单克隆抗体相比，能增加识别抗原的种类√12345678910111213141516综合强化12345678910111213141516解析将相关抗原注射到小鼠体内，可从小鼠脾脏中获得能产生相应抗体的浆细胞，A项错误；据图可知，固相抗体和酶标抗体分别与抗原的不同部位结合，说明两者的结构不同，B项错误；加入酶标抗体的目的是酶催化检测底物反应，可通过测定酶反应产物量来判断待测抗原量，C项正确；据图可知，该方法没有增加识别抗原的种类，D项错误。11.将人、鼠细胞悬液混合并诱导细胞融合(只考虑细胞两两融合)后，在HAT培养基上，同时含有T、H基因(独立遗传)的细胞才能存活和增殖。增殖过程中，细胞内人染色体随机丢失，只残留一条或几条。对处于分裂中期的细胞进行镜检，结果如表所示。已知人、鼠细胞的基因型分别为ttHH和TThh，下列叙述正确的是A.在HAT培养基上，融合细胞均能存活

和增殖B.可以确定①的基因组成为TTTTHHhhhhC.可以确定①②③的相关基因组成相同D.可以将T(t)基因定位于人第17号染色体上12345678910√111213141516融合细胞细胞样编号残留人染色体①17②10、17③17、X解析在HAT培养基上，同时含有T、H基因(独立遗传)的细胞才能存活和增殖，融合细胞中若携带有H基因或T基因的染色体丢失，该融合细胞就不能在HAT培养基上存活和增殖，A错误；①含有鼠的全部基因及人的第17号染色体上的基因，②含有鼠的全部基因及人的第10号和第17号染色体上的基因，③含有鼠的全部基因及人的第17号和X染色体上的基因，在细胞融合过程中鼠的染色体不丢失，①②③都含有鼠的全部基因，即一定都含有TThh，而①只含有人的第17号染色体上的基因，且可以在HAT培养基上存活，所以人的第17号染色体上一定携带H基因，故可以将H(h)基因定位于人第17号染色体，处于分裂中期的细胞由于DNA在细胞分裂间期已完成复制，基因已加倍，故①的基因组成为TTTTHHhhhh，B正确，C、D错误。1234567891011121314151612.人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，下列有关叙述错误的是A.①过程常用灭活的病毒，

不可用聚乙二醇B.②过程筛选出的杂交细

胞都能产生抗HCG抗体C.③过程利用的原理是抗原和抗体的特异性结合D.④过程需要添加抗生素等物质，以做到无菌、无毒12345678910111213141516√√②过程筛选出的杂交细胞不一定全部产生抗HCG抗体，还需要进行专一抗体检测，B错误；③过程以抗HCG单克隆抗体为抗原，利用抗原—抗体杂交的原理进行检测，C正确；④过程需要添加抗生素等物质，目的是防止杂菌污染，以做到无菌、无毒，D正确。故选AB。12345678910111213141516解析动物细胞融合可以用灭活的病毒诱导处理，也可以用聚乙二醇诱导融合，A错误；13.树突状细胞(DC)是一种具有很强抗原提呈功能的免疫细胞。癌细胞有肿瘤抗原，免疫系统能通过识别肿瘤抗原区别癌细胞和正常细胞。通过细胞融合技术将DC细胞与癌细胞融合形成的杂交细胞，既能表达多种肿瘤抗原，又能合成激活T细胞的细胞因子，为癌症的治疗提供了新的方法。流程如下图，下列相关叙述正确的是A.利用病患自体的肿瘤组织与DC细胞制备

肿瘤疫苗效果更好B.DC细胞与癌细胞的融合过程体现了细胞

质膜具有一定的流动性C.经诱导获得的融合细胞均可用于肿瘤疫苗的制备D.肿瘤疫苗可提呈多种抗原，增强免疫系统的识别能力12345678910√111213141516√√质膜的融合，体现了细胞质膜具有一定的流动性，B正确；经诱导获得的融合细胞有骨髓瘤细胞融合型、浆细胞融合型、骨髓瘤细胞和浆细胞融合型，只有骨髓瘤细胞和浆细胞融合型细胞才可用于肿瘤疫苗的制备，C错误；通过细胞融合技术将DC细胞与癌细胞融合形成的杂交细胞，既能表达多种肿瘤抗原，又能合成激活T细胞的细胞因子，增强免疫系统的识别能力，D正确。12345678910111213141516解析利用病患自体的肿瘤组织与DC细胞制备肿瘤疫苗效果更好，没有免疫排斥反应，A正确；DC细胞与癌细胞的融合过程首先是细胞14.以H1N1病毒核衣壳蛋白为抗原，采用细胞工程制备单克隆抗体，下列叙述正确的是A.用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清为单克隆抗体B.体外培养单个浆细胞可以获得大量针对H1N1病毒的单克隆抗体C.将等量浆细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导融合后的细胞并不都是产生

特定抗体的杂交细胞D.利用该单克隆抗体与H1N1病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可以诊断

该病毒感染体12345678910111213141516√√解析用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清不止一种，还掺杂有其他抗原引起免疫反应产生的抗体，A错误；在体外培养的条件下，浆细胞无法无限增殖，因此无法获得大量针对H1N1病毒的单克隆抗体，B错误；将等量浆细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导融合后的细胞有以下几种情况：①浆细胞与浆细胞进行融合；②骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞进行融合；③浆细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交细胞，C正确；单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特点，因此，利用该单克隆抗体与H1N1病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可以诊断该病毒感染体，D正确。1234567891011121314151615.甲胎蛋白(AFP)是癌细胞表面的一种特异性糖蛋白，可以用来进行肝癌的早期诊断。现用单克隆抗体技术生产抗AFP单克隆抗体，过程如下图一。请回答问题：(1)细胞①是

，它与骨髓瘤细胞融合时可使用的化学试剂是

__。浆细胞聚乙二醇解析细胞①是浆细胞，它与骨髓瘤细胞融合时使用的化学试剂是聚乙二醇。12345678910111213141516(2)细胞融合是随机的，为将需要的杂交瘤细胞筛选出来，利用的选择培养基原理是：细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。浆细胞中有两条DNA合成途径，而骨髓瘤细胞中只有D途径，如12345678910111213141516图二。如果只考虑细胞两两融合，融合的细胞有

种类型。根据上述原理将杂交细胞分离出来，使用的选择培养基里面应加入

___。3氨基蝶呤解析仅考虑细胞的两两融合，融合的细胞有：浆细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞、杂交细胞，共3种类型细胞。为了筛选出杂交细胞，除去其他细胞，可向培养液中加入氨基蝶呤，使D合成途径阻12345678910111213141516断，仅有该合成途径的骨髓瘤细胞及彼此融合的瘤细胞就不能增殖，但人浆细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交细胞可以利用浆细胞中的S途径合成DNA而增殖。(3)制备单克隆抗体需要进行两次筛选，其中第二次筛选的方法为_______________技术。12345678910111213141516解析第一次筛选的方法是利用特定选择培养基筛选，获得杂交细胞，即AB型细胞；