TAQNS 002-2023 白及多糖产品中多糖含量的测定

ICSCCSAQNSDeterminationofpolysaccharidecontentinBletillastriatapolysaccharidesproductsIT/AQNS002—2023 2规范性引用文件 3术语和定义 4原理 5试验仪器 6试剂 7分析步骤 8分析结果的表述 9精密度 T/AQNS002—2023本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由安庆市营养学会提出并归口。本文件起草单位：安庆职业技术学院、安徽省食品药品检验研究院、安庆市营养学会、合肥工业大本文件主要起草人：刘冬、吕新霞、谭炜、汪祝华、金季也、陈玮、叶红玲、叶明。1T/AQNS002—2023白及多糖产品中多糖含量的测定本标准规定了用苯酚硫酸法测定白及多糖产品中多糖含量的方法。本标准适用于以兰科白及Bletillastriata（Thunb.）Reichb.f.的地下假鳞茎为原料，用水在高温下提取后经乙醇沉淀制成的白及多糖产品中多糖的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1白及多糖Bletillastriatapolysaccharides以兰科白及Bletillastriata（Thunb.）Reichb.f.的地下假鳞茎为原料原料，经过水提取、乙醇沉淀、水溶解等工序而制成的白及多糖。4原理多糖在浓硫酸的作用下，水解成单糖并迅速脱水生成糖醛衍生物，糖醛酸衍生物与苯酚反应生成橙黄色溶液，在490nm处有特征吸收。5试验仪器5.1分析天平：精确到0.0001g。5.2紫外分光光度计。5.3恒温水浴锅。5.4迷你振荡器。5.5高速破壁机。5.6超声波提取器。5.7离心机，4000r/min。5.8组织捣碎机。6试剂除另有规定外，仅使用分析纯试剂和GB/T6682规定的一级水。6.1葡萄糖（C6H12O6，CAS号：50-99-7）标准品，纯度≥98.0%。使用前应于105℃恒温干燥至恒重。2T/AQNS002—20236.2硫酸（H2SO4），ρ=1.84g/mL。6.3无水乙醇（C2H6O）。6.4苯酚（C6H6O），重蒸馏。6.5葡萄糖对照品溶液（100mg/L称取0.1g（精确至0.001g）葡萄糖标准品，置于100mL烧杯中，加少量水溶解，转至1000mL棕色容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀后置于4℃冰箱中避光保存。6.680%乙醇溶液：量取无水乙醇80mL，置于100mL容量瓶中，加水定容至刻度。6.780%苯酚溶液：称取苯酚80g（精确至0.01g置于100mL烧杯中，加水少量溶解，转移至100mL棕色容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀后置于4℃冰箱中避光保存。6.85%苯酚溶液：量取5mL80%苯酚溶液（5.2.3），溶于75mL水中，混匀，现配现用。7分析步骤7.1标准工作曲线准确量取葡萄糖对照品溶液（6.5）0.0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL分别置于20mL具塞试管中，用水补至1.0mL。加入5%苯酚溶液1.0mL（6.8然后快速加入硫酸5.0mL（6.2）（与液面垂直加入，勿接触试管壁，以便与反应液充分混合静置10分钟。使用旋涡振荡器使反应液充分混合，将试管放置于30℃水浴中反应20分钟，在490nm处测定吸光度。以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。7.2试样的测定取样品0.03g精确到0.0001g置500mL容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，静置2h，待用。吸取2.0mL上述溶液，置于20mL具塞试管中，加入5%苯酚溶液1.0mL（6.8），然后快速加入硫酸5.0mL（6.2与液面垂直加入，勿接触试管壁，以便与反应液充分混合静置10分钟。使用旋涡振荡器使反应液充分混合，将试管放置于30℃水浴中反应20分钟，在490nm处测定吸光度。若样品多糖含量较高（吸光度不在0.1~0.8之间），可适当稀释后再进行分析测定。7.3空白试验与试样的测定平行进行，取相同量的所有试剂，采用相同的分析步骤，但不添加试样。8分析结果的表述总多糖含量计算方法见式（1）X0.9104···········································(1)样品中多糖含量以质量分数X计，单位以克每百克（g/100g）计；式中：m0——空白样从标准曲线上查得样品测定液中含糖量，单位为微克(μgm1——试样从标准曲线上查得样品测定液中含糖量，单位为微克(μg）；v1——样品定容体积，单位为毫升（mL）；v2——比色测定时所移取样品测定液的体积，