生物技术制药题库附加答案

1.利用基因工程技术生产药物的优点？答：1大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽，为临床使用提供有效的保障；2、可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围；3、可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；4、内源生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；5、可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。2.基因工程药物制造的主要程序有哪些？基因工程药物制造的主要步骤有：目的基因的克隆，构造DNA重组体，构造工程菌，目的基因的表达，外源基因表达产物的分离纯化产品的检验逆转录法：逆转录法就是先分离纯化目的基因的mRNA，再反转录成cDNA，然后进行cDNA的克隆表达。⒈mRNA的纯化⒉cDNA第一链的合成⒊cDNA第二链的合成⒋cDNA的克隆⒌将重组体导入宿主细胞：⒍cDNA文库的鉴定：抗性基因失活法、噬菌斑颜色改变法⒎目的cDNA克隆的分离和鉴定：核酸探针杂交法、免疫反应鉴定法4．基因工程宿主菌应满足那些要求？答：1、容易获得较高浓度的细胞；2能利用廉价易得的原料；3、不致病、不产生内毒素；4、发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；5、容易进行代谢调控；6、容易进行DNA重组技术操作；7、产物的产量、产率高，产物容易提取。5.表达载体须具备哪些条件？常用载体有哪些？答：1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。2、具多个限制酶切点，但每种切口最好只有1个，以便与外源基因连接。3、具有某些标记基因，便于进行筛选。4、所产生的mRNA必须有翻译的起始信号。5、具有很强的启动子。6、有很强的终止子。常用载体有：1、细菌细胞的质粒。2、λ噬菌体载体。6。真核基因在原核细胞中表达载体必须具备条件⑴载体能够独立复制。载体本身是一个复制子，具有复制起点。⑵应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆鉴定和筛选。⑶应具有很强的启动子，能为大肠杆菌RNA聚合酶所识别。⑷应具有阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录。⑸应具有很强的终止子，只转录克隆的基因，所产生的mRNA较为稳定。⑹所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号AUG和SD序列，以便转录后顺利翻译。影响目的基因在酵母菌中表达的因素⑴外源基因的拷贝数：⑵外源基因的表达效率；⑶表达产物的稳定性；⑷细胞代谢负荷：⑸工程菌的培养条件8.影响目的的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？（1）外源基因的计量（2）外源基因的表达效率：a、启动子的强弱b、核糖体的结合位点c、SD序列和起始密码的间距d、密码子组成（3）表达产物的稳定性（4）细胞的代谢付荷（5）工程菌的培养条件9真核基因在大肠杆菌中的表达形式？答：有三种形式：(1)融合蛋白的表达形式。（由一段短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的蛋白质,称为融合蛋白.。）(2)非融合蛋白的表达形式。(3)分泌型表达形式。10质粒不稳定分为哪些类，产生的机制是什么？质粒不稳定分为分裂分为分裂不稳定和结构不稳定。质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象；质粒的结构不稳定是DNA从质粒上丢失或碱基重排，缺失所致工程菌性能的改变。基因工程菌的遗传不稳定性的的产生机制1．受体细胞中的限制修饰系统对外源重组DNA分子的降解2．外源基因的高效表达严重干扰受体细胞正常的生长代谢3．重组质粒在受体细胞分裂时的不均匀分配，这是重组质粒逃逸的基本原因4．受体细胞中内源性的转座元件促进重组分子的缺失重排12分离纯化工艺应遵循以下原则：⑴具有良好的稳定性和重复性⑵尽可能减少组成工艺的步骤⑶各技术步骤间要相互适应和协调⑷工艺过程中尽可能少用试剂⑸工艺所用时间要短⑹工艺和技术必须收率高、易操作、能耗低⑺具有较高的安全性16、动物细胞的生理特点（⒈）动物细胞的分裂周期长：（⒉）细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象。（⒊）正常二倍体细胞的生长寿命是有限的。原代培养；（4)动物细胞对周围环境十分敏感：对理化因素敏感，(⒌)动物细胞对培养基要求高：必需氨基酸（12种）、维生素（8种）、无机盐、微量元素、葡萄糖、细胞生长因子、贴壁因子等。(⒍)动物细胞蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同。19动物细胞的培养条件和培养基细胞体外培养基本条件:①无菌②营养充足,防止有害物质③氧气④随时清除代谢有害物质⑤良好的生存外环境：pH、渗透压、离子浓度⑥及时分种，适当的细胞密度20、动物细胞的培养基的种类和组成⒈天然培养基：血清、羊水、腹水等。成分复杂、成分不稳定，来源少。2.合成培养基（常用培养基成分及配方）⑴氨基酸⑵维生素⑶糖类⑷无机盐⑸其它成分添加小牛血清的作用⑴提供生长因子和激素⑵提供贴附因子和伸展因子⑶提供结合蛋白（识别离子、激素、维生素、脂质）⑷提供必需脂肪酸和微量元素3.无血清培养基优点：①提高重复性（细胞）②减少微生物污染（病毒）③供应充足稳定④细胞产品易纯化⑤避免血清因素对细胞的毒性⑥减少血清中蛋白对生物测定的干扰21、动物细胞大规模培养的方法1.悬浮培养2.贴壁培养3.贴壁-悬浮培养（假悬浮培养）23、动物细胞培养的操作方式1.分批式操作2.半连续式操作3.灌流式操作:取出、补充培养基，细胞仍保留在反应器内。优点：1.营养好，代谢废物少。2.细胞密度高（107～108个/mL）产量高。3.产品罐内停留时间短。4.培养基比消耗率低。24的动物细胞生物反应器的基本要求1.生物反应器的材料无毒2.生物反应器的结构：满足传质、传热、混合的功能3.密封良好，避免污染4.自动检测、调节控制精度高5.长期连续运转6.容器内表面光滑，无死角7.拆装、连接、清洁方便，能耐高压蒸汽消毒8.设备成本低25植物无菌培养：（1）幼苗及植株的培养（2）愈伤组织培养（外植体，细胞聚集体）（3）悬浮培养（单细胞或小细胞