DB5115T 127-2024 小琴丝竹组培快繁技术规程

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5115  发布202406152024-05-14发布四川省（宜宾市）地方标准DB5115/T127—2024小琴丝竹组培快繁技术规程CodeofpracticefortissuecultureofBambusamultiplexⅠDB5115/T127-2024Ⅰ目 次前 言 III范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1组培设施 1培养基配制 1诱导培养 2增殖培养 3生根培养 4炼苗 4组培苗移栽管理 4档案管理 5IIIDB5115/T127-2024III前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由宜宾林竹产业研究院提出。本文件由宜宾市林业和竹业局归口。本文件起草单位：宜宾林竹产业研究院、浙江农林大学、宜宾标计商品检测研究院。本文件主要起草人：周国强、高会彬、杨海芸、余英、赵翔。本文件为首次制定。小琴丝竹组培快繁技术规程

DB5115/T127-2024115.1 培养基类型的选择5 培养基配制按照NY/T2306第4章中的相关规定执行。4 组培设施组培苗plantlet利用植物组织、器官或细胞等作为起始材料，通过植物组织培养方式生产获得的植株。3.4消毒disinfection通过物理、化学方法去除物体表面大部分有害病原微生物的过程。3.3接种inoculation将消毒后的外植体或干净培养材料在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。3.2外植体explant从自然生长的活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的起始材料。3.1范围本文件适用于小琴丝竹组培苗快速培育。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程术语和定义NY/T2306界定的以及下列术语和定义适用于本文件。6.1 外植体选择6.1 外植体选择宜选择小琴丝竹当年生枝条的节间带芽部分，节上部保留0.5cm，节下部保留1.0cm。26 诱导培养诱导培养基宜使用直径3.0cm、高度1.2cm的培养皿分装，每个培养皿分装5ml；增殖培养基和生根培养基宜使用外径2.5cm、高度15.0cm的试管分装，每个试管分装15ml。分装时培养基不应沾附在培养容器口及周围。灭菌培养基灭菌配制的培养基应在12h内宜使用高压灭菌锅灭菌，在121℃条件下灭菌15min；灭菌后不应与未灭菌物品混放。接种工具灭菌剪刀、镊子等接种工具应使用高压灭菌锅灭菌，在121℃条件下灭菌25min；灭菌后不应与未灭菌物品混放。超净工作台灭菌将已灭菌的培养基和接种工具放置在超净工作台上，打开超净工作台风机和紫外灯灭菌30min，灭菌后关闭紫外灯。5.6.3.2 75%乙醇擦拭一遍。宜选择MS培养基为基本培养基。MS按照NY/T2306第7章中的相关规定执行。培养基配方诱导培养基MS+蔗糖30g/L+琼脂3.5g/L。增殖培养基MS+6-BA（6-苄氨基腺嘌呤）3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂3.5g/L。生根培养基MS+NAA（萘乙酸）0.1mg/L+6-BA（6-苄氨基腺嘌呤）0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂3.5g/L。PH应用1mol/LHCl或1mol/LNaOH调节培养基pH值至5.8。培养基分装转接应将生长健壮的无菌小琴丝竹组培苗切成含2个～3个芽的小丛，转接至增殖培养基上培养。转接应将生长健壮的无菌小琴丝竹组培苗切成含2个～3个芽的小丛，转接至增殖培养基上培养。培养条件培养环境温度宜设置为24℃～26℃，环境光照强度宜设置为2500lx，连续定时光照时间宜设置为16h/d。培养时间培养时间宜为14d～21d。培养代数37 增殖培养容器上。培养条件培养环境温度宜设置为24～2624h，后续环境光照强度宜设置为1500lx，连续定时光照时间宜设置为16h/d。培养时间培养时间宜为7d～14d。外植体清洗应将剪取的外植体用洗洁精冲洗1h。外植体消毒在超净工作台上，宜用75%的酒精消毒30sec，然后用0.5%次氯酸钠消毒8min，至外植体略微发黄后取出；再用无菌水冲洗5遍～6遍后备用。外植体接种接种工具消毒接种时，应将接种工具剪刀、手术刀和镊子等用电热灭菌器或酒精灯消毒后，冷却至室温备用。外植体处理应将已消毒的外植体切除两端消毒后发黄的部分，用无菌吸水纸吸干表面水分备用。接种将已处理好的外植体接种在诱导培养基上。每个培养皿宜接种1个茎段。标记接种后,每批应用记号笔将品种代号、培养基编号、工作人员编号及接种日期等信息标注在培养设施移裁阶段的圃区宜建有可控温控光的温室，双层以上可活动遮阳网，温室内宜设有顶部喷淋的苗床或可数字化调控温湿度的育苗箱。设施移裁阶段的圃区宜建有可控温控光的温室，双层以上可活动遮阳网，温室内宜设有顶部喷淋的苗床或可数字化调控温湿度的育苗箱。育苗容器育苗容器宜使用边长8cm～10cm的方形容器。育苗基质基质应以泥炭土、珍珠岩为主，体积比例宜为3:7。移栽炼苗后，用镊子将组培苗从培养基中取出，应洗掉基部附着的培养基，在温室内，栽植于基质中。管理410 组培苗移栽管理开或半打开培养瓶盖炼苗。9.3 炼苗时间炼苗时间宜为7d。继代增殖可以达到15代。如果组培苗继代后出现玻璃化、褐化等不良情况，应终止继代。生根培养增殖培养后，切取生长健壮、长势一致，含有2个～3个分支的丛苗，转接至生根培养基上培养。培养条件按7.2。培养时间7.3。瓶苗要求培养瓶内组培苗长出2条～3条长度1.5cm～3.0cm的不定根，便可炼苗。炼苗条件培养瓶宜放置在遮光率为70%～75%，相对湿度为70%～90%，温度为24℃～26℃的温室中，打5DB5115/T127-20245组培苗移裁后，应立即浇透水，30min～60min800倍～1000倍多菌灵或百菌清。然后根据天气情况，每天浇水2次～4次。光照及温湿度环境宜按照表1的要求执行。表1移栽环境条件要求栽植后时间温度光照空气湿度1d～14d20℃～32℃遮光度为75%的遮阳网75%14d～28d20℃～32℃全光照自然湿度10.6 出圃标准根据植株