沙杵菇菌种制作技术规程

1沙杵菇菌种制作技术规程本文件规定了沙杵菇母种、原种和栽培种生产有关的定义、制作技术流程要点等。本文件适用于沙杵菇母种、原种、栽培种菌种制作要求。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T12728食用菌术语NY/T528食用菌菌种生产技术规程NY/T1731食用菌菌种良好作业规范NY/T1742食用菌菌种通用技术要求3术语和定义GB/T12728界定的术语和定义适用于本文件。3.1沙杵菇又名沙棒槌菇、沙锤子菇，属于伞菌纲、伞菌亚目、伞菌科、鬼伞属，为毛头鬼伞的一个变种，因其形似沙槌而得名。3.2菌种spawn生长在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。3.3母种stockculture经分离、纯化、杂交、诱变等各种方法选育得到的具有结实性的沙杵菇菌丝纯培养物及其继代培养物，也称试管种。3.4原种preculturespawn由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称一级种。23.5栽培种spawn由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常用耐高温高压的聚丙烯塑料瓶（袋）为容器，本级菌种直接用于生产，一般不再扩繁使用。4生产要求4.1技术人员沙杵菇菌种生产应当配备相应的技术人员，技术人员与所生产的菌种级别相适应。生产母种主要技术人员需有五年以上原种生产或栽培种生产实践经验；生产原种主要技术人员需有三年以上栽培种生产实践经验；生产栽培种技术人员需有三年以上的菌种生产实践。4.2场地选择4.2.1基本要求选择地势高燥，通风良好，排水畅通，交通便利。4.2.2环境卫生要求要求200m之内无禽畜养殖场（圈）、无垃圾场、无污水和其它污染源，远离沙杵菇种植区，尤其是远离沙杵菇栽培废弃物晾晒场。4.3基础设施4.3.1厂房设置和要求应配有原材料库、配料分装室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室贮存室菌种检验室等。4.3.1.1原材料库防雨、防潮、防虫、防鼠、防火、防杂菌污染等。4.3.1.2配料室、分装室要求水电方便，通风良好、空间充足、水泥地面。4.3.1.3灭菌室要求水电安全方便，通风良好，空间充足，散热畅通。如果使用煤加热，要求灭菌设施的出料门与加热灶有隔断设施。4.3.1.4通风室通风室设在冷却室与接种室的相临处，要求有无菌通风设备，制冷设备，室内墙面与地面顶棚可选择不易产生灰尘的水泥、塑料扣板等建筑材料。通风室产生的恒温无菌风通往冷却室、接种室，用于冷却与排除有毒气体。34.3.1.5冷却室及接种室沙杵菇菌种的冷却室与接种室可设为一体，要洁净、防尘、可密闭，可通风（防倒风）、能取暖、可消毒。要设缓冲间，防尘换气性能良好。内壁和屋顶光滑，经常清洗和消毒，做到空气洁净。内设超净化工作台、紫外线灭菌灯、耐腐蚀剂的防火设备。沙杵菇的母种与原种室可以与栽培种接种室共用。4.3.1.6培养室沙杵菇菌种培养室内壁和屋顶光滑，水电方便，利于控温和清理卫生、消毒，无散射光。要有通风设备，可人工调控室内温度。4.3.1.7菌种检验室水电方便，利于装备相应的检验设备和仪器。4.4菌种厂的设备设施4.4.1基本设备磅秤、天平、高压灭菌锅、洁净工作台、接种箱、调温设备、培养架、恒温箱、冰箱、显微镜等。4.4.2基本设施配料、分装、灭菌、冷却、接种、培养等各环节的设施规模要配套。冷却室、接种室，培养室和贮存室都要有调温设施。4.5生产技术要求4.5.1容器4.5.1.1母种选用培养皿或18mm×180mm或20mm×200mm试管，棉塞要使用梳棉，不使用脱脂棉,常用带有砂芯或者不带砂芯的硅胶塞。4.5.1.2原种和栽培种用耐125℃高温的无色或近无色的玻璃菌种瓶或者聚丙烯塑料菌种瓶。菌种瓶口要小，一般17mm~34mm，用带砂芯的硅胶塞做盖，盖上放一小块棉花，上覆口罩（三层无纺布或带熔喷布制成的口罩）,并用皮筯扎紧。4.5.2培养原料4.5.2.1化学试剂类所用葡萄糖、琼脂、石膏粉、石灰粉。4.5.2.2天然材料类天然材料如麦麩、玉米秸、玉米芯、沙蒿粉、羊粪、新鲜马铃薯(不能有芽变色），要求无虫、无霉变。44.5.3培养基配方4.5.3.1母种培养基马玲薯200g(煮汁)、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000m。4.5.3.2原种和栽培种玉米秸丝35%，玉米芯35%，羊粪28.5%，石膏粉1.5%，含水量50%～55%。4.5.4分装母种培养基的分装量应掌握在试管长度的1/4，灭菌后摆放成斜面顶端距试管口不超试管长度的五分之一。原种和栽培种培养基不超玻璃菌种瓶或者聚丙烯塑料菌种瓶的最大刻度线，分装至瓶肩处为宜。不论哪种培养方式，管口或瓶口必须干净，均需留有一定的空间，避免在菌种运输或者培养的过程中造成污染。4.5.5灭菌4.5.5.1母种培养基将制作好的母种培养基放入加有水的高压灭菌锅中，按操作规程将冷汽排尽，灭菌温度控制在121℃~122℃20分钟，自然冷却到50℃左右时，取出试管，摆放斜面。4.5.5.2原种和栽培种培养基培养基可采用高压灭菌或常压灭菌，在高压121℃下灭菌2h，常压灭菌需在3h之内升温至100℃,恒温保持10h～12h，自然冷却后。4.6消毒将试管培养基、原种、栽培种用常压或高压灭菌冷却后的培养基，从容器中取出后，放入接种室内，由于在取出过程中培养基暴露在空气中，必须进行空气消毒，消毒方法可以用紫外线灯或1%的过氧乙酸喷雾消毒。消毒时间为紫外线杀菌种灯15min，过氧乙酸4小时，通入无菌风，待室内空气无味后就可以进行接种工作。4.7接种4.7.1母种在菌丝团与菌蕾上剥取约1mm组织接入装有PDA培养基的试管中培养。4.7.2原种和栽培种取出制作好的沙杵菇母种，在超净化工作台内，取一块母种，迅速放入原种培养基内，盖上原种瓶盖。按同样步骤取出原种，进行栽培种接种。4.8培养5母种、原种、栽培种对培养温度有严格的要求，母种培养在25℃环境下，原种和栽培种一般控制在21℃~23℃,太低培养时间过长，太高容易退化或老化。5检验5.1母种感官检验标准见表1。表1沙杵菇母种感官检验标准指标标准容器洁净、无破损棉塞或其它盖体干燥、松紧适中、能达到透气和过滤作用培养基装入量为试管总容积的1/4，培养皿高的1/4～1/3菌种外观菌丝总生长量长满斜面或平板菌丝体颜色浓白，菌落中心微黄菌丝体形态粗壮，气生菌丝多菌丝体表面生长均匀、舒展、平整菌丝体分泌物无菌落边缘整齐杂菌菌落无斜面或平板背面外观培养基湿润、无积水、颜色均匀、无暗斑、无色素5.2原种感官检验见表2。表2沙杵菇原种感官检验标准指标标准容器洁净、无破损棉塞或其它盖体干燥、松紧适中、能达到透气和过滤作用培养基上表面距容器距离5.0cm～5.5cm菌种外观菌丝生长总量长满培养基菌丝体颜色浓白、色泽一致菌丝体形态生长健壮，均匀、整齐培养基及菌丝体紧贴瓶壁、湿润不干缩菌丝体分泌物无杂菌菌落无子实体原基无5.3栽培种感官检验标准见表3。表3沙杵菇母种感官检验标准指标标准容器洁净、无破损棉塞或其它盖体干燥、松紧适中、能达到透气和过滤作用6培养基上表面距容器距离5.0cm～5.5cm菌种外观菌丝总生长量长满培养基菌丝体颜色浓白、色泽一致菌丝体形态生长均匀、粗壮