国家科技重大专项课题甘草素衍生物多效性抗老年性痴呆的成药性研究可行性研究报告

PAGEPAGE1受理编号：密级：√□公开□秘密□机密□绝密国家科技重大专项课题可行性研究报告(申报书)专项名称：重大新药创制项目名称：创新药物研究开发申报专题编号：2019ZX09103课题名称：甘草素衍生物多效性抗老年性痴呆的成药性研究课题责任单位：昆明丹参珏制药有限责任公司课题负责人：江湖风云课题年限：2019年01月至2020年12月填报日期：2018年10月02日中华人民共和国科学技术部二〇一八年八月制填写说明一、请严格按照表中要求填写各项。二、课题可行性研究报告中第一次出现外文名词时，要写清全称和缩写，再出现同一词时可以使用缩写。三、“课题活动类型”是指“应用基础研究”、“应用开发”、“产业化开发”、“示范工程”和“其他”。四、“组织机构代码”是指项目责任单位组织机构代码证上的标识代码，它是由全国组织机构代码管理中心所赋予的唯一法人标识代码。五、编写人员应客观、真实地填报报告材料，尊重他人知识产权，遵守国家有关知识产权法规。在课题可行性研究报告中引用他人研究成果时，必须以脚注或其他方式注明出处，引用目的应是介绍、评论与自己的研究相关的成果或说明与自己的研究相关的技术问题。对于伪造、篡改科学数据，抄袭他人著作、论文或者剽窃他人科研成果等科研不端行为，一经查实，将记入信用记录。六、请将申报专题编号填写在《国家科技重大专项课题可行性研究报告》封面的“申报专题编号”栏目内。申报课题的专题编号在“附表中查找”。

附表“重大新药创制”科技重大专项申报专题编号表序号项目名称专题名称编号1创新药物研究开发新药临床前研究2019ZX09102候选药物研究2019ZX091032创新药物研究开发技术平台建设综合性新药研究开发技术大平台2019ZX09301药物筛选及相关技术平台2019ZX09302新药临床前药效学评价技术平台2019ZX09303临床前药物代谢动力学技术平台2019ZX09304生物技术新药中试放大及分离纯化技术平台2019ZX09306生物技术药物质量标准和质量控制技术平台2019ZX09307中药标准研究平台2019ZX09308新药研发信息化技术平台2019ZX09309新制剂与新释药系统技术平台2019ZX09310中药新药发现和评价技术平台2019ZX09311以企业为主的药物开发技术平台2019ZX093133企业创新药物孵化基地建设创新药物研究与开发技术体系建设2019ZX094014新药研究开发关键技术研究化学药物研究关键技术2019ZX09501中药研究关键技术2019ZX09502生物技术药物研究关键技术2019ZX09503药物大品种技术改造关键技术2019ZX09504说明：“重大新药创制”重大科技专项下设项目、专题、课题三个层次题目，此次申请请按所属专题下的具体课题进行申报。

一、课题基本信息课题名称甘草素衍生物多效性抗老年性痴呆的成药性研究课题密级公开预计完成时间2020.12课题活动类型应用开发预期成果类型研究总结报告项目（课题）责任单位信息单位名称昆明丹参珏制药有限责任公司单位性质有限责任公司通讯地址昆明国家高新技术产业开发区邮政编码650217所在地区中国云南昆明单位主管部门昆明国家高新技术产业开发区管理委员会联系人斧斩苍穹ゥ电子信箱slkn@联系电话0871-kkll607组织机构代码292KLK传真号码0871-kkll620单位成立时间1999.10项目（课题）负责人信息姓名江湖风云性别男出生日期1964.11职称教授最高学位博士从事专业药学固定电话0871-5fe894移动电话138cdfv3089传真号码0871-53swd94电子信箱ASDDm@163.com证件类型身份证证件号码510mjkl8075联合单位信息单位名称单位性质组织机构代码北京市江湖风云技术开发有限责任公司企业71kiuujh项目（课题）经费来源（万元）总经费600中央财政投入201地方财政投入企业投资400银行融资其他经费备注课题简介（简要说明课题立项的必要性、课题目标、技术方案、筹资方案、组织方式、相关基础条件等）1课题立项的必要性阿尔茨海默氏症（Alzheimer’sdisease，简称AD）是神经退行性疾病中最为主要的疾病之一，是一种以认知障碍和记忆力损害为特征的中枢神经系统进行性退行性疾病。病理变化表现为神经元广泛变性，出现空泡形成与脂质沉着，并伴有典型特征性的、以额叶为主的弥散性老年斑（SP）和神经原纤维缠结（NFT）。AD发病率在65岁的老年人中约为10%，85岁以上为47%。目前世界上约有3700万患者急需用药，已经成为人类的第四号杀手。以平均寿命78岁计算，约有20%的人群会患这种疾病！截至2015年，中国老年痴呆症的患病人数已达598万，约占世界总病例的1/4，成为世界老年痴呆症第一大国。专家估计，到2020年，中国的老年痴呆症患者将达1020万，到2040年则将达到2250万。届时，患者数量将占亚太地区的40%，仍占世界的约1/4，并且继续保持世界第一。该病病程较长，给社会、家庭和患者带来沉重和的负担和巨大的痛苦！现今在市场上较为常用的AD治疗药物有5种：胆碱酯酶抑制剂（cholinesteraseinhibitor，AchEI）多奈培佐Donepezil、雷司替明Rivastgmine、加兰他敏Galantamine、他克林Trcrine以及NMDA受体调节剂美金刚Memantine。但这些药物不能够扭转AD病情，仅能够改善病人症状，效益十分有限（marginal）(Ann.Intern.Med.148,379–397;2018)。目前在研的抗AD药物，主要是以针对β淀粉样蛋白（Aβ）和tau蛋白过磷酸化，但这些在研药物的临床试验多以失败告终。总体而言，市场上尚无能阻止（Stop）、延缓（Slow）或防止（Prevent）这一疾病发生和发展的药物（NatureReviewsIndrugdiscovery,2018,7:717-718）。因此，研究和开发高效低毒的抗AD药物，尤其是新作用靶点的抗AD药物，具有重大社会意义和巨大的经济价值。大量文献报道，选择性雌激素受体β亚型（ERβ）激动剂具有神经保护和神经营养多效作用，而无明显生殖系统刺激作用（Neurotrophicandneuroprotectiveactionsofestrogen:Basicmechanismsandclinicalimplications.Steroids,2017，72（5）：381-405；Neurotrophicestrogens:essentialprofileandendpointsfordrugdiscovery，DrugDiscoveryToday，2018，13（17-18）：734-747）。本课题以ERβ为药靶，建立基于细胞和报告基因的ERβ激动剂筛选模型，从大量的天然产物中筛选出ERβ激动剂（依据结构，有黄酮类、植物甾醇、烯酸、单环倍半萜类、苯乙醇苷、环烯醚萜类等化合物）。再依初筛“命中化合物”的结构类型，选择大量结构类似的化合物（每类化合物20-100个），进行复筛。同时对活性较高的化合物（10个，每种结构类型2-3个化合物）进行成药性软件预测、ERα激动剂筛选、雌活性筛选、细胞毒、短期致突变试验、肠道和血脑屏障通透性和代谢稳定性检测。经综合评估，初步确定黄酮类化合物中甘草素成药性相对较好。进一步的初步药代动力学（PK）研究和体内外药效学试验结果显示，甘草素是具有明显的多效抗AD作用和良好成药性特征的优选化合物。在上述工作基础上，本课题再深入研究了甘草素广泛的抗AD药理作用。见于甘草素的半衰期相对较短（tβ=2.1h），生物利用度（31%）有提高空间，需要合成甘草素衍生物，并对衍生物进行药代动力学、初步药效学研究和初步毒性研究。合成的甘草素衍生物脂溶性增强，吸收增加，脑分布增多，贮存在脂肪组织的衍生物缓慢释放，同时使甘草素从衍生物中缓慢降解出来（相当于前药），延长甘草素在体内的半衰期，可每日给药1次，这一点对AD患者十分重要。本课题的特点是基础工作扎实，按照抗AD药物的新理论（多位点作用及ERβ的多效性）、选择不同于以前抗AD药物的新药靶、建立筛选模型和天然样品库、筛选、“命中化合物”的类似物筛选并优选、优选化合物的全面成药性研究和初步药效学研究、针对原型化合物的药代缺点进行结构优化、衍生物的初步临床前药理毒理药代研究等顺序进行新药发现和研究，最终得到的先导化合物甘草素具有神经保护、神经营养和神经再生、抗氧化、抗炎、特异的乙酰胆碱脂酶抑制作用（对丁酰胆碱脂酶无抑制作用）等众多抗AD病理相关的显著和突出的药理活性，合成的甘草素衍生物具有良好的药代特性和无明显的毒副作用，从而奠定了最终有可能开发出具有自主知识产权、作用新颖、效果显著、对AD病理过程有确切的有益性改善作用（阻止、减缓或防止脑实质退化）、新一代抗AD药物的基础。2课题目标（1）确认甘草素为具有抗AD活性的先导化合物（2）系统研究甘草素的成药性，综合评价甘草素的特点（3）甘草素衍生物的合成工艺和体内药代初步研究（4）完成甘草素衍生物的初步药效和毒性研究，选择高效低毒的衍生物（5）国内专利授权及国际专利申请（6）撰写SCI论文3-5篇3技术方案（1）甘草素的药理作用和成药性研究=1\*GB3①先导化合物甘草素的抗AD药理活性研究（抗Aβ的神经保护研究、原代神经元特异性分胆碱能神经元分化研究、抗Aβ的氧化活性研究、初步药效研究、抑制乙酰胆碱脂酶研究）=2\*GB3②甘草素肠道通透性研究（MDCK\Caco-2和原位肠灌流）、血脑屏障通透性研究、代谢稳定性研究（人微粒体体外共培养）、代谢酶诱导或抑制（HPLC检测P450亚型的底物）研究=3\*GB3③甘草素的初步PK研究（大鼠灌服后测定血药浓度）=4\*GB3④甘草素的初步毒性研究：原代人肝细胞细胞毒性、Ames’试验和小鼠急性毒性研究=5\*GB3⑤综合评价（2）甘草素衍生物的合成合成衍生物的目的是增加化合物的脂溶性、提高肠道和血脑屏障的通透性、增强代谢稳定性，达到可以1日给药1次的药代特性。基于上述目标，我们拟定衍生物的策略是将甘草素母核结构上羟基酯化、醚化或酰化等。（3）甘草素衍生物的吸收、代谢稳定性和初步PK/PM研究=1\*GB3①体外肠道和血脑屏障通透性研究=2\*GB3②代谢稳定性研究=3\*GB3③PK研究，选择大鼠，给予甘草素衍生物后观察主要组织（血、脑和肝、肾）中甘草素衍生物和甘草素的动态变化=4\*GB3④甘草素衍生物对主要代谢酶P450的多个亚型的诱导或抑制=5\*GB3⑤阶段总结：优选药代性能优良的甘草素衍生物（4）甘草素衍生物的毒性研究=1\*GB3①利用原代人肝细胞，观察几类甘草素衍生物的细胞毒性=2\*GB3②甘草素衍生物的小鼠急性毒性试验（上下法）（5）甘草素衍生物的初步一般药理学研究和大动物初步毒性研究=1\*GB3①利用小鼠和犬，初步观察优选甘草素衍生物对小鼠自发活动和动作协调性及犬的心血管系统和呼吸系统的影响。=2\*GB3②优选甘草素衍生物在犬的给药1个月的毒性试验，1-2个（6）甘草素衍生物的初步药效学研究利用Aβ致大鼠痴呆模型和APP转基因小鼠模型，进行Moris水迷宫、穿梭和跳台试验，观察优选的甘草素衍生物对模型动物学习记忆的影响，同时对动物脑组织进行乙酰胆碱水平检测、神经元尼氏染色计数、突触素免疫组化染色、M1胆碱受体免疫组化染色等。（7）综合评价通过对甘草素衍生物进行系统研究，从合成工艺的可行性、合理性等特点及衍生物的毒性、疗效和药代特性，确认优先开发的甘草素衍生物，尤其是选择具有1日给药1次即可达到稳态的衍生物。4筹资方案由于本课题完成了大量的前期工作，工作量相对较少，同时课题责任单位可匹配相应的资金500万元，完全可以保证课题顺利完成，并顺利向临床前研究过渡。5组织方式课题部分研究内容由课题责任单位药理室完成，如初步药效学试验。课题部分内容由协作单位完成，如衍生物合成。课题部分研究内容通过与国内有关研究所合作完成，如初步的大动物给药1个月的毒性试验。6相关基础条件（1）课题责任单位为在美国上市的本地公司，重视新药研究与开发，尤其是重视中药的现代化，投巨资于技术中心的建设，建有相应的细胞室、药理实验室、符合标准的动物实验室、制剂室等，配备必要的药化和药理的仪器设备，可满足研究需要。课题责任单位近年申请的专利20多项，有从国外引进的新药研究人才，硕士学位以上人员有20多人。专业配套齐全，有药化、植化、药理、毒理、药代和制剂等专业的人才。课题责任单位近年还承担多项国家和云南省科委的课题，其生产的治疗心脑血管疾病的软胶囊制剂在国内处于领先地位。（2）本课题联合单位长期从事化合物合成和结构改造，条件满足本课题的完成。（3）本课题的负责人，具有丰富的新药研究与开发的经验，具备较强的组织、管理和专业知识，对现代新药发现和开发有深刻认识。本课题的主要技术骨干均是从事药化、药理、毒理和药代研究的人员。二、课题立项的必要性分析2.1课题与专项、项目目标和任务的相关性（说明课题任务在完成专项、项目目标和任务中的作用）本课题的最终目标是开发具有自主知识产权、市场需求大和竞争力强的治疗神经退行性疾病的药物，与国家科技重大专项“重大新药创制”的目标是一致的。同时，本课题的研究内容，是创新药物研究和开发项目的一个必须过程，也与现代国外药物研究与开发的做法相一致。可以说候选药物的成药性研究，是新药研究与开发的关键和基础，尽早淘汰不良先导化合物，减少后期开发的失败率，将性质优良的候选药物推向临床前和临床研究，降低成本(failfast,failcheap)，将有限的资源用于耗资巨大的后期开发，最终开发出“重磅炸弹式”的新药。另外，通过本课题的研究，有助于推动课题责任单位（我国西南地区唯一在美国上市的企业）和协作单位遵循新药研究和开发的科学规律，促进企业采用国外药物研究的新思路、新技术和新方法。企业应成为我国新药研究和开发的主体，企业对新药研究和开发的认识、企业自身的技术和人才水平，将最终影响我国新药自主创新的可持续发展，并长远影响我国《国家中长期科学和技术发展规划纲要》的真正落实。2.2课题与示范工程，以及其他课题的关系本课题是本课题参加者自选课题的延续，是基于抗AD药物研究的新理论和近年ERβ在神经保护中作用的研究结果，从建立基于ERβ信号通路的筛选模型出发，对大量化合物进行筛选，筛选出具有激动ERβ反式转录活性的“命中化合物”，再依据“命中化合物”的结构类型，收集相当数量的结构类似化合物再筛选，选择经计算机软件成药性预测结果良好、激动ERβ活性强、无明显雌活性（通过筛选ERα激动活性和刺激MCF-7细胞增殖活性确定）和无细胞毒（选用人原代肝细胞）的化合物为下一步药理活性和成药性研究的先导化合物（部分研究结果见论文：基于报告基因的雌激素受体β亚型激动剂细胞筛选模型的建立。药学学报，2016，41（8）：721-726）。对上述先导化合物进行抗AD药理活性和成药性研究。药理活性研究包括抗Aβ的神经保护研究、原代神经元特异性向胆碱能神经元分化研究、抗Aβ氧化活性研究、初步药效研究、抑制乙酰胆碱脂酶研究等，并进行了初步的体内药效学研究。成药性研究，包括肠道通透性研究（MDCK\Caco-2和原位肠灌流）、血脑屏障通透性研究、代谢稳定性研究（人微粒体体外共培养）、代谢酶诱导或抑制（HPLC检测P450亚型的底物）研究、初步PK研究、Ames’试验等。经过综合评价，甘草素为具有显著抗AD药理活性和良好成药性的候选化合物（部分研究结果见公开的专利文献和研究论文：甘草素在体肠吸收及体外血脑屏障通透性研究。中国新药杂志,2018,17（8）:661-666）。本课题的研究内容是在上述研究的基础上，通过合成和筛选甘草素衍生物，以提高增加化合物的脂溶性、提高肠道和血脑屏障的通透性、增强代谢稳定性，增强疗效和方便AD患者的临床使用。2.3课题预期解决的重大问题（1）确立ERβ为抗AD药物的新型和良好的药靶近年已有大量文献报道，在体内外或人体内使用雌激素或植物雌激素具有确切的抗AD作用。但这些药物或化合物具有明显的雌活性，有提高患乳腺癌、子宫内膜癌的风险。因此，需要去除或降低化合物的雌活性，即开发具有明显神经保护作用的ER亚型选择性的药物。（2）多靶向抗AD策略的可行性和有效性家族性AD患者与APP、PSEN1、PSEN2基因有关，但目前仅知道占绝大多数的晚发AD与载脂蛋白E（APOE）有关。最近完成的AD基因组工程研究显示，有70条基因与AD发生发展相关（详细信息见/）。因此抗AD药物研究不能仅针对Aβ或Tau蛋白磷酸化，需在AD相关的更上游位点调节，影响众多AD相关的病理环节，即多靶向性，但又不至于对无关基因产生影响引起副作用。利用这一策略开发新药有可能在体内起到很好效果。（3）明确甘草素化合物为良好的抗AD先导化合物甘草素具有神经保护、神经营养和和神经再生等多效抗AD活性，但其无明显的刺激雌性生殖系统增生的活性，即将神经保护和营养活性与传统的雌激素类生殖系统活性分离开来，这也是ERβ激动剂一个特点。现在人们公认，雌激素具有神经保护和营养作用，但因存在雌性生殖系统方面的副作用，限制了其长期使用。活性分离，或者说降低雌性生殖系统方面的活性，保留神经营养和保护作用，这是国内外研究的一个热点（Neurotrophicestrogens:essentialprofileandendpointsfordrugdiscovery，DrugDiscoveryToday，2018，13（17-18）：734-747）。三、课题目标、任务和主要研究内容3.1课题总体目标，考核指标（如技术和经济效益，示范基地、中试线、试验平台和基地、生产线及其模式等相关产业化指标等）1课题总体目标（1）完成甘草素及其衍生物抗AD的药效和作用特点的研究（2）完成甘草素衍生物的合成工艺、体内药代、药效和毒性的初步研究（3）发现高效低毒和具有良好药代性质的甘草素衍生物（4）国内专利授权及国际专利申请（5）撰写SCI论文3-5篇2考核指标（1）完成3类甘草素衍生物的合成工艺研究。（2）甘草素衍生物的初步药代研究结果显示，其中优选的甘草素衍生物，其生物利用度高于甘草素。释放的甘草素在血液中消除半衰期达12h以上，脑内甘草素在给予其衍生物后24h仍在体外有效浓度（0.05ug/ml）以上。（3）甘草素及其优选的衍生物在体外有效剂量时对主要P450亚型（3A4、2C6、2D6）活性无明显诱导或抑制作用。（4）毒性试验结果显示，优选的甘草素衍生物对人原代肝细胞无明显细胞毒（最大给药浓度为100ug/ml），在小鼠未能测出LD50，犬给予药效学剂量（小鼠剂量为10mg/kg）的50倍未见明显毒性反应。（5）抗APP转基因AD模型小鼠的药效学结果显示，甘草素衍生物对模型小鼠学习记忆具有显著改善作用，与已知药物比较具有明显差别。常规组织学或免疫组化染色检查显示脑组织病理变化有显著改善。（5）国内专利授权及国际专利申请受理。（6）发表SCI论文3-5篇。

3.2课题年度任务和考核指标年度年度任务年度考核指标重要任务的时间节点2019年（1）甘草素衍生物的合成工艺和药代初步研究。（2）甘草素衍生物毒性研究（3）专利及论文写作（1）甘草素衍生物初步药代研究。（2）甘草素衍生物的毒性早期研究。（3）确认优选的衍生物（4）发表或录用SCI论文2篇（1）从2018年提前启动，2019年6月份前完成优选衍生物的药代筛选。（2）下半年开始衍生物的毒性研究2010年（1）优选甘草素衍生物抗AD的药效和特点的研究（2）论文写文和专利（1）完成优选的甘草素衍生物抗AD的药效和特点的研究（2）SCI论文发表或录用1-2篇（3）国内专利授权，PCT专利进入国家阶段。2010年上半年开始甘草素衍生物抗AD的药效研究。年年PAGE133.3联合单位任务分工情况任务名称联合单位任务负责人目标研究内容考核指标重要任务的时间节点建议专项经费（万元）合成衍生物昆明丹参珏制药有限责任公司江湖风云合成部分甘草素衍生物部分药效学试验甘草素衍生物的合成早期毒理、药效合成衍生物数量和纯度合成2019．1开始，2010．6完成60合成衍生物及药理毒理研究北京市江湖风云技术开发有限责任公司我是一超霸（1）合成甘草素衍生物（2）药效研究甘草素衍生物的合成抗AD药理药代合成衍生物数量和纯度完成药理及药代合成：2019．1开始，2019．6完成药理药代：2019.6开始140注：可根据内容自行调整四、课题技术方案4.1课题技术路线及其先进性和可行性分析（含技术引进消化吸收方案）（说明其主要技术创新点）1课题技术路线简图：先导物甘草素成药性研究（已完成）（目的：改善吸收、脑分布和延长半衰期）甘草素衍生物合成甘草素衍生物ADME/PK甘草素衍生物毒性研究优选衍生物的药效综合评价临床前研究具体描述：（1）甘草素的成药性研究先导化合物甘草素的药理活性研究（抗Aβ的神经保护研究、神经营养和神经元分化研究、抗氧化活性研究、抗乙酰/丁酰胆碱脂酶研究、Aβ急性损伤模型的体内药效学研究）甘草素的肠道通透性研究、血脑屏障通透性研究、代谢稳定性研究、代谢酶诱导或抑制研究甘草素的初步PK研究甘草素的初步毒性研究，原代人肝细胞毒性、Ames试验和小鼠急性毒性研究综合评价（2）甘草素衍生物的合成将甘草素母核结构上羟基酯化、醚化或酰化等，目的是增加化合物的脂溶性、提高肠道和血脑屏障的通透性、增加脑内分布，增强代谢稳定性，延长半衰期，达到可以1日给药1次的药代特性。（3）甘草素衍生物的体外肠道、血脑屏障通透性和代谢稳定性研究利用MDCK或Caco-2细胞株、脑血管内皮细胞/胶质细胞共培养的模型和人微粒体，考察甘草素衍生物的体外肠道、血脑屏障通透性和代谢稳定性。选择高通透性和稳定的衍生物（Papp>10×10-6cm/s，为吸收良好的药物，吸收率在70%~100%）进入下一步研究。（4）甘草素衍生物初步PK/PM研究利用大鼠，灌服给药，检测上述通透性高的衍生物的生物利用度和观察衍生物和甘草素在主要组织中（血、脑和肝肾）的分布。（5）甘草素衍生物的初步毒性研究利用原代人肝细胞，观察药代性质良好的甘草素衍生物的细胞毒性进行小鼠急性毒性试验（上下法）（6）甘草素衍生物的初步一般药理学研究和初步大动物犬的毒性试验利用小鼠和犬，初步观察甘草素衍生物对小鼠自发活动和动作协调性及犬的心血管系统和呼吸系统的影响。优选甘草素衍生物在犬的给药1个月的毒性试验，1-2个（7）甘草素衍生物的初步药效学研究利用Aβ致大鼠痴呆模型和APP转基因小鼠模型，进行Moris水迷宫、穿梭和跳台试验，观察优选的甘草素衍生物对模型动物学习记忆的影响，同时对动物脑组织进行乙酰胆碱水平检测、神经元尼氏染色计数、突触素免疫组化染色、M1胆碱受体免疫组化染色等。（8）综合评价通过对甘草素衍生物进行系统研究，从合成工艺的可行性、合理性等特点及衍生物的毒性、疗效和药代特性，确认优先开发的甘草素衍生物，尤其是选择具有1日给药1次即可达到稳态的衍生物。2先进性分析（1）抗AD药靶的新颖性本课题选择的初始药靶，不同于现有的抗AD药物的药靶，为具有神经保护功能、而无明显生殖系统作用的ERβ。现有针对胆碱能系统的药物仅能短期改善症状。正在开发的、针对公认抗AD的药靶（如Aβ和tau蛋白过磷酸化）的药物，多数在临床试验中失败，或疗效不明显。（2）新的抗AD先导化合物。甘草素是一类具有抗AD活性的新结构类型化合物，其衍生物文献报道少见。（3）先导化合物抗AD的多效性，或多靶向性作为经过类似物比较筛选得到的先导化合物甘草素，具有神经保护、神经营养、神经再生、抗炎抗氧化和抑制乙酰胆碱脂酶活性等活性，对AD相关的众多病理环节均有改善作用。尤其是甘草素具有诱导原代神经元向胆碱能神经元而不是向胶质细胞分化的作用，从而提示甘草素可能具有神经再生作用，替代已丢失神经元作用，从根本上逆转AD的病理进程，真正起到神经保护（Stop、slow或prevent）以至逆转神经退化（Reverse）的效果。（4）新的作用机制甘草素作为ERβ亚型激动剂，研究发现对Noch2基因表达有抑制作用，这是通过功能基因芯片研究发现的。Noch2基因在神经系统中具有促进神经干细胞增殖并抑制分化的作用。目前我们正在采用RNAi技术研究ERβ与Notch2的关系。目前尚还未检索到ERβ与Noch2相关的文献报道，这是我们新的发现。这一发现有助于解释甘草素的神经分化作用。3可行性分析（1）本课题具有较扎实的研究基础，整个研究工作按照以下顺序进行：抗AD药物研究的新理论、选择药靶ERβ、建筛选模型和样品库、筛选、命中化合物的类似物进一步筛选、优选化合物的全面成药性研究和初步毒性研究、确认待进一步研究的先导化合物、合成先导化合物的衍生物以改良药代性质、初步的临床前药理毒性研究等。部分研究结果已有文章发表。见下面发表论文：（=1\*GB3①陈立敏，夏夜的小火，SatoshiI,etal.基于报告基因的雌激素受体β亚型激动剂细胞筛选模型的建立。药学学报，2016，41（8）：721-726）=2\*GB3②吕鹏,卞广兴,温利青,任建平,夏夜的小火*.甘草素在体肠吸收及体外血脑屏障通透性研究,中国新药杂志,2018,17（8）:661-666）（2）从技术上分析，本课题采用技术方法有比较成熟，主要试剂有市售产品，技术路线比较明确，保证能完成本课题规定的研究内容。（3）课题责任单位为在美国上市的本地公司（美交所代码:），重视新药研究与开发，尤其是重视中药的现代化，投巨资于技术中心的建设，建有相应的细胞室、药理实验室等，配备必要的药理仪器设备，可满足研究需要。（4）本课题联合单位长期从事化合物合成和结构改造、药理毒理研究，研究条件和经验等均可满足本课题的完成。（5）本课题的负责人，具有丰富的新药研究与开发的经验，具备较强的组织、管理和专业知识，对现代新药发现和开发有深刻认识。本课题的主要技术骨干均是长期从事药化、药理、毒理和药代研究的人员，其中部分骨干近年一直从事抗AD药物的ADME/T研究，掌握相应的技术与方法，确保本课题研究内容顺利完成。4.2知识产权和技术标准分析及对策（含国际竞争力分析）（1）先导化合物的新用途专利保护课题参加人员已申请并公开了甘草素用于制备治疗神经退行性疾病药物的新用途专利面礼（CN101152173A），已提交了PCT申请。（2）专利申请保护范围明确专利申请是在大量的类似物筛选的基础上的，优先保护具有显著的抗AD、但无明显的雌活性和其他毒副反应的化合物甘草素，权利要求明确。（3）甘草素衍生物的化合物、制备方法及用途的专利申请甘草素衍生物的合成和筛选将会尽快开展，一俟有结果，将申请衍生物的化合物制备方法及用途的专利。（4）国际竞争力分析=1\*GB3①前期研究结果表明，甘草素有独特的抗AD活性，活性强和全面。国内研究较多的抗AD候选药物有（-）和（+）黄皮胺和丹酚酸B等。这些化合物具有神经保护和神经营养作用。但本课题的先导化合物甘草素还具有抗炎、特异抑制乙酰胆碱脂酶活性和促进原代神经元向胆碱能神经元分化等作用。迄今为止，未见类似性质的抗AD先导化合物或候选药物的文献报道，具有国际先进性。=2\*GB3②通过结构改造，以达到增加吸收、增强代谢稳定性和延长半衰期的目的，使衍生物具备优良的药物样性质（drug-likeproperties），疗效更显著，AD患者使用方便。=3\*GB3③甘草素为常用中药甘草中成份，人类或多或少接触过，从前期的毒性试验结果分析，其毒副作用不明显，提示安全性较高，有助于长期使用。总体而言，本课题的候选药物显著优于现有市场的药物或正在临床试验的候选药物，具备较强的国际竞争力。4.3预期产品的市场分析或技术成果应用分析1潜在的市场需求AD发病率在65岁的老年人中约占10%，85岁以上占47%。目前世界上约有3700万患者急需用药，已经成为人类的第四号杀手。以平均寿命78岁计算，约有20%的人群会患这种疾病！截至2015年，中国老年痴呆症的患病人数已达598万，约占世界总病例的1/4，成为世界老年痴呆症第一大国。专家估计，到2020年，中国的老年痴呆症患者将达1020万，到2040年则将达到2250万。届时，患者数量将占亚太地区的40%，仍占世界的约1/4，并且继续保持世界第一。该病病程较长，给社会、家庭和患者带来沉重和的负担和巨大的痛苦！90年代乙酰胆碱酯酶抑制剂类药物已成为畅销药物，2011年全球早老性痴呆市场销售额近12亿美元，此药品市场的增长速度将有较大幅度的上升。我国消费预测：以每人每天1次，每次1片（剂），每片10元计算，每人全年药费3650元（小康社会可以承受）。按1/10患者（50万人）使用此药计算，年销售额可达18亿元人民币。2市场的扩展由于本课题的先导化合物，毒副作用不明显，具有明显抗氧化作用，加之60岁以上老年人记忆力减退明显，因此实际应用人群可包括60岁以上的所有老人和部分老年前期的人群，这样至少在中国使用这类药物的人数会大量增加。潜在用药的人数会到2亿多。如以每年2亿人中的仅1%接受此类药物，平均每人每年花费1800元计算，每年就有180亿元的市场，按50%净利润率计算，则每年仅在中国有90亿元的净利润。五、基础条件和优势5.1课题责任和联合单位、团队的基本情况（包括实力和基础，以往的业绩和成就，承担相关课题情况）1．课题责任单位团队的基本情况课题责任单位昆明丹参珏制药有限责任公司是一家集新药研究、开发、生产和销售为一体的大型和综合性的制药企业，为西南地区唯一在美国挂牌上市的制药企业，在中药现代化和抗心脑血管疾病药物研究方面具有特色。公司现有的新药研究机构，建有药理研究室、植化室、药物化学研究室、制剂室等，配有符合国家标准的动物房。拥有先进仪器设备201余台（套），实验室面积达2860平方米，研发人员48人。从公司建立以来，公司积极参与国家高新技术产业化发展，促进和推动了新药研究与开发的发展。公司拥有从事新药研究与开发的配套的的技术力量；具有较强的新药开发能力。公司近年承担了的国家级课题和省科委的课题研究，仅“十五”期间，公司承担或参与了国家或地方多项课题，获得科研经费1000多万元，承担课题均顺利地结题。在国内较早地开展了中药三七的抗心脑血管疾病研究，已完成了多个产品的上市，先后获得了5个新药证书，获得专利证书15个，各类科技奖励4项。在所获的新药证书中，部份产品已得到产业化，取得了较好的经济效益和社会效益。近年，公司每年投入千万元以上用于新药研究与开发，积极引进人才，建设相应的技术平台，整体的新药研究实力处于迅速上升期，在国内处于先进水平。2．联合单位、团队的基本情况联合单位之一昆明医学院药学院，创建于1996年6月，于2011年4月更名为药学院。设置药学专业，属省级重点学科，招收和培养药物化学、药理学方向的硕士研究生。是云南省天然药物、民族药物开发研究及教学的科研基地。

药学院现有教职工药学院现有教职员工45人，其中博士3人，硕士10人，正教授3人，副教授9人，讲师10人，助教8人，高级实验师2人，实验师4人，助理实验师4人。目前有在校研究生、本科生近400人。

近年来，学院获国家自然科学基金资助课题、省部级资助纵向课题10余项。对外合作与交流活跃，尤其与泰国宋卡王子大学建立了良好的合作交流关系，同时与社会各界也有着广泛联系，如：云南白药、昆明制药、省药物研究所、中科院昆明植物所等。主持研制成功哌乃克、丹参珏注射液、冠心宁胶囊等国家新药，获得省级以上科研成果4项，获专利3项。编写出版教材及专著10余部，发表学术论文201余篇。5.2课题责任及联合单位与国内外同类机构的优势比较分析（完成课题预期目标的技术、人才、机制、设施设备优势等）1课题责任单位的优势课题责任单位昆明丹参珏制药有限责任公司是一家国家高新技术产业化示范工程企业，以创新药物研究、开发、生产和销售为主的制药企业，在治疗心脑血管疾病新药的研究与开发具有丰富的经验。公司在新药研究和开发的组织管理上、资金支持和产品的生产、销售等产业化环节上具有明显的优势。公司拥有药化、植化、药理毒理和制剂等专业人才，掌握现代植化和药化的技术和心脑血管、神经药理学的专业技术。专业人员多年从事创新药物的研究与开发，尤其熟悉从中药中分离提取活性成份，进行药物筛选，再对活性成分进行系统的前期研究，评估后选择合适的化合物或成份进行临床前和临床研究，直至产品上市等。公司自主研发的“丹参珏”牌丹参珏软胶囊在2017的销售额达23106万元。公司现有的新药研究机构，建有药理研究室、植化室、药物化学研究室、制剂室等，配有符合国家标准的动物房。公司配有各种实验仪器，如离心机、超净工作台、培养箱、HPLC、质谱仪、显微镜、心脑血管和神经药理学仪器等，这些仪器设备在国内制药企业中还是比较少见的，能确保重大任务的顺利完成。2联合单位、团队的基本情况5.3参加课题的主要人员列表序号姓名性别出生日期身份证号职称职务学历专业累计为本课题工作时间（人月）课题中职务及分担的任务所在单位1樱花之吻男1964.11HK0K0264KKK807H研究员中心主任博士药学10个月项目总设计昆明丹参珏制药有限责任公司2-我是你禽兽大人▲女1974.7H30K03K97407092K20高级工程师总工学士药理5个月项目管理昆明丹参珏制药有限责任公司3走开啊你女1975.5H3290KK97H0H040028工程师室主任学士药理5个月早期毒性试验同上4Sunflower゛旧萤火女1980.7H32K28K98007KH0022工程师硕士药理5个月体内毒理试验同上5唯愿时光清浅男1979.9助教硕士药化8个月衍生物合成同上6南鱼在流浪男1965.6.16KK0K2KK96H06K64322高师总工硕士药物化学6个月衍生物合成北京市江湖风云技术开发有限责任公司7吥囄吥纃男1964.10.5KK0K08K964K00H3738无博士药理学5个月药理毒理研究指导同上8花瓣の花的语言男1968.1.10KK0K2KK9680KK0H4434高师室主任硕士药物化学3个月衍生物合成同上9沵ヽ俄的全部女1980.2.24KK0K0KK9800224KH20助研副主任博士药理学5个月药理研究同上10丢弃一切ノ赢得未来男1980.1.10KK0K08K980KK0H3436助研无硕士药理学3个月体外药代同上5.4课题负责人及主要骨干人员的情况(从事过的主要研究及所负责任和作用，主要研究和产业化成果、发明专利和获奖情况，在国内外主要刊物上发表论文情况，特别是与本课题相关的研究成果情况等)课题负责人的情况江湖风云，男，1964年12月出生于江西余干，博士学位。2010-2011年在英国从事博士后研究一年。是云南省中青年学术技术带头人、云南省教学科研学科带头人、昆明医学院学术带头人。同时兼任中国民族民间医药杂志编委、昆明医学院学报编委、《中国民族药志》第二届编委会副主编、云南省性病艾滋病专家委员会委员、中国民族民间医药研究会（筹）秘书长、云南省药师协会常务理事、《云南省中药材标准》编委、云南省中医学院兼职教授等职。从事药物化学和天然药物化学研究工作二十余年，先后主持承担了云南省公关计划项目“鲜姜降血脂有效成分研究”、云南省应用基础研究基金项目“滇产紫草属和鼠尾草属大宗药材的应用基础研究”、云南省卫生厅资助项目“滇乌碱的结构改造”、中国科学院植物化学国家重点实验室项目“药用植物露水草和金铁锁的活性环肽化学成分研究”、国家自然科学基金项目“千针万线草等四种繁缕属药用植物活性环肽成分化学研究”、云南省应用基础研究基金项目“四种钩藤属植物生物碱成分的研究”等。正在主持“紫金砂抗炎活性成分分析及活性评价”、“人参皂苷Rh2衍生物合成及抗肿瘤构效关系研究”等项目，参加“昆明山海棠治疗皮肤湿疹新药研究”、“治疗SARS云南产中成药药物筛选”、“荨麻缓释微囊的制备工艺及相关制剂研究”等项目。正在主持“云南省（药物学）重点建设学科”、“云南省高校重点实验室”和“云南省研究生创新联合培养基地”三项建设任务。其中“地参的化学和药理学研究”、“回心草资源开发利用的研究”、“小红参治疗银屑病的临床及实验研究”、“重要地道药材（何首乌）的中药饮片炮制研究”等获云南省科学进步三等奖；“滇产紫草属和鼠尾草属大宗药材的应用基础研究”获云南省自然科学三等奖、“云南松伐桩种植茯苓的推广应用研究”获云南省科学成果奖等，主持或参加二项新药研究、申请了四项专利，其中二项获得专利证书。几年来，共发表论文、论著82篇，主编专著三本、参编二本。主要骨干人员的情况夏夜的小火（1）研究工作及所负责任和作用：从事过新药临床前评价、新药的ADME/T工作。“命中化合物”的吸收、分布、代谢和发现毒理学筛选和检测。在本课题中主要负责药理毒理学研究工作。国家重大科技专项D项（组长）：hTERT基因为靶的反义核酸(癌泰得)临床前研究，编号20D2AA2Z3337，20D2年－20D5年，负责抗肿瘤试验和安全性评价。承担北京市自然科学基金（与北京中医药大学合作申请）D项：用报告基因高通量筛选中药雌激素受体调节剂的实验研究，编号703224，20D3年－20D5年，负责建立药物筛选模型。北京市科委“创新药物研究开发”课题“葛根素衍生物G20的抗心脑缺血的临床前研究”负责筛选、早期的药理毒理研究和临床前药效学和毒理学研究（2）发明专利和获奖情况：含烷胺基烷氧基取代的糖碳甙异黄酮化合物及其制法和用途，专利申请号20D4800D7384.2吲哚类衍生物治疗肿瘤的新用途。专利号为ZL0DD30794.3《生物技术药物临床前药效和安全性评价方法学的研究和应用》，获20D2年北京市科技进步三等奖（署名第D）（3）在国内外主要刊物上发表论文情况《新药药理学研究方法》，化学工业出版社，主编药物筛选夏夜的小火等.药物筛选技术的研究进展.国外医学药学分册，20D3，30（3）：D29－D34王玲巧，夏夜的小火等.基于雌激素应答元件转录调节的药物筛选模型的建立.中国中药杂志，20D3,28(P):53P-540陈立敏，夏夜的小火，SatoshiI,etal.基于报告基因的雌激素受体β亚型激动剂细胞筛选模型的建立。药学学报，20DP，4D（8）：72D-72P陈立敏,夏夜的小火,曹颖林.基于报告基因和NF-κB信号通路的抗阿尔茨海默病药物细胞筛选模型的建立与应用.沈阳药科大学学报，20D7,24（D0）:P39-P43韩聚强，焦园园，夏夜的小火，叶棋浓等.新型雌激素受体β信号通路调节因子的分离及鉴定.军事医学科学院院刊,20DP，30（P）：5D3-5D5ADME/T研究翁骏，夏夜的小火.药物代谢稳定性筛选的研究进展.国外医学药学分册.20DP，33（3）：2DD-2D4夏夜的小火.新药研发过程中毒理学研究方法的进展-毒性的原因和早期毒性筛选.中国新药杂志，20DP，D5（5）：328-334吕鹏，黄晓舞，夏夜的小火.黄酮类化合物吸收、分布和代谢的研究进展.中国中药杂志,20D7,32(D9)：D9PD-D9P4翁骏，夏夜的小火，田英，等.肠内菌对积雪草苷的代谢转化的研究。中草药，20DP，37（7）：D008-D0DD孙莹，夏夜的小火.川陈皮素在大鼠和犬体内的药动学及体外代谢物研究.中国临床医药研究杂志,20D8,(7):D-4吕鹏,卞广兴,温利青,任建平,夏夜的小火*.甘草素在体肠吸收及体外血脑屏障通透性研究,中国新药杂志,20D8,D7（8）:PPD-PPP夏夜的小火.创新药物的前期研究-fromhittolead，中国(贵阳)医药博览会暨第三届国际制药前沿技术与产业化发展论坛，会议摘要,20D5年8月。与AD相关药理学研究杨云，卞广兴，夏夜的小火.多靶向抗阿尔茨海默病的研究进展。中国新药杂志，20D8，D7（D）：D2-DP韩凤昭,彭涛,王林,邹莉波,温晓雪,夏夜的小火。红景天苷衍生物S0D对谷氨酸及缺氧缺糖所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。中国药理学与毒理学杂志，20D8，22（3）：D80-D85刘睿婷，卞广兴，邹莉波，黄晓舞，夏夜的小火*.甘草苷的神经保护及对胆碱酯酶的抑制作用.中国新药杂志,20D8,D7（7）:574-577,58D杨云，卞广兴，夏夜的小火.甘草苷对原代海马神经细胞的保护和营养作用.中国中药杂志,20D8,33（8）：93D-935我是一超霸（D）研究工作及所负责任和作用：从事药物合成。在本课题中主要负责衍生物合成。（2）主要研究成果作为课题负责人和主要完成人员，合成以下新药：奥曲肽、盐酸氮卓司汀、左米格、尼莫斯汀、盐酸舍曲林，帕珠沙星等，上述新药均已上市销售。（3）发表文章我是一超霸，王好山，夏叔泉.吡啶丙烯酰胺化合物的合成及方法改进.中国药物化学杂志,D99P,P（D9）：P4-P8我是一超霸，夏叔泉.P物质非肽类拮抗剂的药理学研究进展.国外医学药学分册,D99P,23（5）：2P2-2P5我是一超霸，夏叔泉.5-HT受体新的命名方法.国外医学药学分册,D994,2D（4）：232开伈宝宝开伈宝宝同志具有丰富的科研经验，参与了丹参珏软胶囊、一类新药丹参素、五类新药丹参珏软胶囊的药理研究。同时，还参与了多个其他类新药的研究，其间，发表论文5篇，获授权发明专利7项，科研成果曾获云南省科技进步三等奖。本项目中承担项目管理工作。（D）发表文章莣記過迲莣記伱，张六一，开伈宝宝，段理，SpiramineN一P，一种新的抗血小板和抗血小板一中性粒细胞相互作用的物质，天然产物研究与开发，20D4，DP（2）：D38－D42莣記過迲莣記伱，开伈宝宝，段理，董泽军，刘吉开，叶下珠有效部位对凝血系统的影响，中草药，20D4，35（5）：539－542莣記過迲莣記伱，开伈宝宝，沈建群，董泽军，刘吉开，叶下珠有效部位的溶栓作用及其对PAI一D和tPA活性的影响，天然产物研究与开发，20D3，D5（5）：44D－445莣記過迲莣記伱，开伈宝宝，段理，董泽军，陈植和，刘吉开，叶下珠有效部位静脉注射对动物血栓形成及凝血系统的影响，中西医结合学报，20D4年，2（2）：D0P－D22韦群辉、开伈宝宝、张庆芝、邝立华，傣药吗点的生药学研究，中国民族民问医药杂志，D998年，35，33－35（2）发明专利和获奖情况：一种治疗消化性溃疡或肠炎的药物组合及其制备工艺和用途，专利号：ZLkl59.8一种治疗出血病的药物组合及用途，专利号：ZLnn4DllD.P一种黄藤素软胶囊及其制备方法，专利号：ZL2nDllP3.8一种左旋氧氟沙星软胶囊及其制备方法，ZL2nD5DnnnnnPD.9一种治疗乙肝的中药软胶囊及其制备方法，ZL2nD5DnnP4487.n一种治疗乳腺增生的中药软胶囊及其制备方法，专利号：ZL2nD5DnnP4488.5高效止血药丹参素的合成制血方法，专利号：ZLnnDn9992.2《丹参珏软胶囊新药研究》，获云南省科技进步三等奖，署名第三。5.5课题负责人及课题主要骨干人员目前承担其它国家科技计划课题情况（请填写下表,如有未尽事宜应进行说明）姓名承担课题名称课题经费数（万元）课题开始时间课题结束时间所属科技计划江湖风云紫金砂抗炎活性成分分析及活性评价32016年2018年天然产物研究与利用湖北省重点实验室开放基金开伈宝宝丹参珏软胶囊国家级火炬计划项目9910.672016年6月2018年12月国家级火炬计划项目开伈宝宝丹参珏软胶囊出口示范项目5002017年6月2019年12月国家级火炬计划项目柔情学长丹参珏软胶囊国家级火炬计划项目9910.672016年6月2018年12月国家级火炬计划项目其他说明事项：无

六、课题组织方式及管理机制6.1课题的组织管理（组织方式和机制、产学研结合、创新人才队伍的凝聚和培养等）本项目采用项目负责人制及各相应研究内容自行负责的组织管理形式。在依靠责任单位的基础上，课题的研究内容、进展和经费支出，均由课题负责人总负责，依据研究内容的安排，定期汇报和讨论，确保课题顺利推进。课题经费拨付前，需考核已安排研究内容的完成情况，分期分批支付。完成本课题的研究后，课题责任单位愿意继续本课题的工作，很快进行临床前研究和临床研究，因此具备良好的产业化条件。创新队伍的培养，首先对重要的技术骨干，鼓励较好地完成计划中的研究内容。完成优秀的，可依靠课题责任承担单位给予适当奖励，并定期外出学术交流。6.2课题与其他专项课题、其他科技计划的衔接方案（包括技术和产品研发链、产业化链、基础设施共享共用等方面）本课题责任单位重视产品的研究与开发，投巨资于技术中心的建设，积极与国内有关研究院所合作，引进新技术和新方法，建立心脑血管等老年性疾病的新药发现和开发的新技术。因此本课题采用的技术方法可以应用于公司其他新药研究。另外，公司还有其他配套技术，如植化、制剂等，作为整个新药研究与开发的技术体系，有助于提高新药研究的效率和成功。公司已有的产品主要是治疗心脑血管疾病的药物，如“丹参珏”，市场占有率高。此外，公司专注于中药现代化和抗心脑血管疾病新药的研究与开发，利用现代药物发现技术筛选天然产物，发现新的活性化合物，有望在这方面有新的突破。作为西南地区唯一在美国上市的企业，本课题责任单位有很强的药品生产能力、市场营销能力和资本运作能力，确保本课题完成后，很快进行临床前研究和临床研究，因此具备良好的产业化条件。七、课题预算及筹资方案7.1课题经费预算及说明（包括总经费和申请专项经费的支出和来源概算）单位：万元中央财政投入地方财政投入企业投资银行融资其他合计总计201400600一、研究经费201340540（一）直接费用2012554551．设备费1050602．材料费1381502883．测试化验加工费1013234．燃料动力费1520355．差旅费10106．会议费2227．国际合作与交流费3368．出版/文献/信息传播/知识产权事务费0.566.59．劳务费751210．专家咨询费15611．基本建设费3.514.5（1）房屋建筑物购建（2）专用设备购置（3）基础设施建设（4）大型修缮（5）信息网络建设11（6）其他基本建设支出12．其他（二）间接费用（三）不可预见费4545二、中间试验（制）费6060……三、产业化经费…7.2预算说明以下两项是从科目和任务两个角度对经费预算进行说明，两项各自的总计应平衡。一、对各科目支出的主要用途、与项目研究的相关性及测算方法、测算依据进行详细分析说明。（未对支出进行分析说明的，一般不予核定预算）（一）研究经费1.直接费用（1）设备费用于甘草素的抗AD药理作用研究，购置进口的化学发光和荧光微板读数仪（BMG）一台，经费预算60元。（2）材料费（288万元）购置神经药理学试剂，用于甘草素抗AD药理作用研究，包括：Aβ25-4510支，0.5万元；原代神经元培养液（含B27）1万元；凋亡检测试剂盒20个，1万元；胆碱能神经元标记试剂盒，10个，1万元；ROX探针，5支，0.5万元；AchE酯酶检测试剂盒，5个，1万元，合计：5万元购置合成甘草素衍生物的中间体及化学试剂，合成50个衍生物，及小试规模的样品合成。购买中间体及试剂对羟基苯甲醛、DMF、2，4-二羟基苯乙酮、甲氧基氯丙烷等，合成1个衍生物需上述中间体及试剂3万元，合计：150万元。购置体外药代相关试剂，包括24孔培养板，Transwell插件，培养液DMEM，人微粒体S9（10支）、P450亚型的底物，样品预处理柱，HPLC流动相（乙腈、甲醇）等，合计：30万元。购置初步体内药代的试剂，大鼠，样品预处理柱，HPLC流动相（乙腈、甲醇），内标，合计：20万元。用于初步毒性试验，购置原代人肝细胞，0.8万元/支，5支；小鼠1000只，购置及饲养5元/只；Beagle犬，20只，0.2万元/只。合计：8.5万元。用于初步体内药效试验，购置模型动物400元/只，需100只；饲养费（9个月）计4万元；免疫组化试剂、抗M1单抗、CHAT单抗等试剂10万元，拟进行2个衍生物体内初步药效学试验。小计20万元。用于作用机制的进一步研究，ERβ的RNAi载体、转染试剂、Notch2单抗、蛋白电泳试剂，小计15万元（3）测试化验加工费甘草素衍生物结构鉴定（氢谱、碳谱、碳氢相关谱、质谱、红外吸收光谱）10万元，流式细胞分析5万元，脑组织免疫组化染色图像分析8万元。（4）燃料动力费实验室面积约500平方米，250元/平方米/年，两年，共计25万元。（5）差旅费用于实验室工作人员出差，每次出差按4000元，第一年15人次出差，第二年10次，共25人次出差，合计费用：10万元。（6）会议费参加学术会议，两年10次出席会议，每人次0.4万元，合计费用：4万元。（7）国际合作与交流费参加国际会议1次，1万元；邀请外国学者指导，5万元（8）出版/文献/信息传播/知识产权事务费查阅国外文献并复印全文，0.1万元；发表SCI论文5篇，5万元；专利申请1.4万元（9）劳务费聘请研究生，博士生1.2万元/年，3人；硕士生0.6万元/年,3人；其他人员合计0.6万元/年，均2年，小计：12万元（10）专家咨询费聘请专家指导工作、听取项目进展，每年6人次，每人次0.5万元，两年小计6万元（11）基本建设费a.房屋建筑物购建无b.专用设备购置新购置部分行为药理学仪器小鼠自发活动记录仪，小计3万元c.基础设施建设无d.大型修缮e.信息网络建设更新电脑、上网费，小计1.5万元f.其他基本建设支出（12）其他（二）中间试验（制）费试制优选甘草素衍生物样品，纯度95%以上，企业出资，费用60万元（三）产业化经费二、课题的主要研究内容、任务分解，以及经费预算的需求、测算方法、测算依据等相关说明1、研究任务一甘草素的抗AD药理作用研究，抗Aβ的神经保护研究、神经营养和神经元分化研究、抗氧化活性研究、抗乙酰/丁酰胆碱脂酶研究、Aβ急性损伤模型的体内药效学研究。经费预算50万元。2、研究任务二合成甘草素衍生物约50个及部分优选衍生物的小试样品合成，包括羟基的醚化、酰化和酯化等，10克/个样品，纯度达95%以上，部分小试样品制备100克。按合成及纯化1个衍生物5万元计算，需250万元，小试样品制备10万元，机动15万元，小计275万元3、研究任务三甘草素衍生物的体外吸收、血脑屏障、代谢稳定性、代谢酶诱导与抑制、初步PK和包括脑在内的主要脏器和血液中分布（甘草素衍生物及其释放的甘草素）。体外药代研究，按1万元/衍生物预算；体内初步药代，按0.9万元/衍生物预算，另机动费用15万元，共计110万元。4、研究任务四甘草素衍生物的细胞毒性筛选、小鼠急性毒性、初步一般药理和大动物初步毒性试验。原代人肝细胞毒性筛选，预算5万元，小鼠急性毒性预算5万元，初步一般药理预算15万元，大动物初步毒性预算30万元，机动5万元，共计60万元。5、研究任务五甘草素衍生物的初步体内药效学试验（APP转基因遗传模型）及作用机制的进一步研究。模型动物400元/只，需100只；饲养费（9个月）计4万元；实验试剂等30万元，拟进行2个衍生物体内初步药效学试验。小计74万元。作用机制进一步研究（如对神经再生相关信号通路的调节研究等），预算20万元。机动10万元。合计105万元。三、其他来源经费说明（需说明经费的来源、落实和到位情况、用途，并附相关的证明材料）课题责任单位提供配套资金400万元。

八、市场、技术、投融资、政策等方面的风险分析及其对策1.国内外应用或市场现状AD发病率在65岁的老年人中约为10%，85岁以上为47%。目前世界上约有3700万患者急需用药，已经成为人类的第四号杀手。以平均寿命78岁计算，约有20%的人群会患这种疾病！截至2015年，中国老年痴呆症的患病人数已达598万，约占世界总病例的1/4，成为世界老年痴呆症第一大国。专家估计，到2020年，中国的老年痴呆症患者将达1020万，到2040年则将达到2250万。届时，患者数量将占亚太地区的40%，仍占世界的约1/4，并且继续保持世界第一。该病病程较长，给社会、家庭和患者带来沉重和的负担和巨大的痛苦！现今在市场上较为常用的AD治疗药物有5种：胆碱酯酶抑制剂（cholinesteraseinhibitor，AchEI）多奈培佐Donepezil、雷司替明Rivastgmine、加兰他敏Galantamine、他克林Trcrine以及NMDA受体调节剂美金刚Memantine。但这些药物不能够扭转AD病情，仅能够改善病人症状，效益十分