苜蓿镰刀菌根腐病抗性鉴定技术规程

1苜蓿镰刀菌根腐病抗性鉴定技术规程本文件规定了苜蓿抗镰刀菌根腐病的鉴定方法、调查及抗病性评价标准。本文件适用于评价不同苜蓿品种室内对镰刀菌根腐病的抗性水平。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB6141豆科主要栽培牧草种子质量等级DB15/T1776马铃薯枯萎病抗性鉴定技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1苜蓿镰刀菌根腐病AlfalfaFusariumRootRot苜蓿种植区普遍发生的由镰刀菌（Fusariumspp.）引起的土传性真菌病害，主要为害苜蓿根部，造成根部腐烂，导致根系吸收水分和养分的功能逐渐减弱直至植株死亡。3.2抗性评价Resistanceevaluation根据采用的技术标准判别植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。3.3病情级别Diseaselevel人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。3.4病情指数Diseaseindex（DI）通过对植物个体发病程度（病情级别）数值的计算获得的群体发病程度的数值化描述形式。3.5接种体Inoculum用于人工接种以引起病害发生的病原物的子实体结构。3.6优势菌株DominantPathogen对植物具有高感染力和生存能力，一定环境中占据主导地位并引起植物病害。4接种体制备4.1供试菌种2选取内蒙古苜蓿种植区发病株上分离获得的根腐病优势菌株—锐顶镰刀菌（Fusariumacuminatum）。4.2培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）：马铃薯200g，洗净去皮切碎，加水煮沸20min，纱布过滤，加入葡萄糖20g和琼脂15g，用水定容至1000mL，搅拌均匀，高压灭菌（121℃,20min）。麦麸培养基：将60g麦麸加入40mL蒸馏水，装入罐头瓶中，高压灭菌（121℃,30min）。4.3接种体繁殖参照DB15/T1776，将接种菌株转接于PDA平板培养基上，置于恒温培养箱25℃培养7d，自菌落边缘切取菌饼，接种于麦麸培养基上，置于恒温培养箱25℃培养7d。4.4接种悬浮液制备收集培养物用四层纱布过滤菌丝获得孢子悬浮母液，血球计数板配置接镜检配至所需接种浓度。5室内抗病性鉴定5.1鉴定室人工接种鉴定室具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。5.2鉴定设计鉴定材料顺序排列，重复3次，每一处理6钵（5株/钵）。5.3鉴定对照材料设高抗苜蓿品种为抗病对照材料，高感苜蓿品种为感病对照材料。5.4鉴定材料育苗5.4.1种子质量鉴定种子质量应符合GB6141，苜蓿一级种标准，不应带检疫性病虫。5.4.2种子消毒鉴定种子在3%NaClO表面消毒2min，75%乙醇溶液表面消毒30s，无菌水冲洗5遍，播种于育苗穴盘中。5.4.3育苗基质育苗基质为：170℃高温灭菌菜田土+营养基质=1:15.4.4育苗在人工气候培养箱育苗，温度设置为24℃~26℃,空气相对湿度30%～40%，苜蓿幼苗出土后，每3d浇无菌水一次。5.5接种35.5.1接种时期苜蓿幼苗3～4片复叶期接种。5.5.2接种体浓度5×106个/mL5.5.3接种方法采用蘸根接种法，将幼苗根系完全浸泡于孢子悬浮液中，30min后将幼苗重新移植于营养钵（高10cm，直径10cm）中。5.5.4接种后管理将植株置于24℃~26℃的鉴定室内，保持空气相对湿度30%～40%，每日光照10h～12h，2d浇水一次。6病情调查6.1调查时间苜蓿幼苗接种35d调查病情，按照镰刀菌根腐病病情分级标准进行调查。6.2病情级别划分病情级别划分见表1（引自蔡文涌等，2020）。表1苜蓿镰刀菌根腐病抗性室内鉴定病情级别的划分0123456.3调查方法按幼苗病情级别划分调查接种株发病情况，记载单株病情级别，计算病情指数（DI）。病情指数按公式（1）计算：DI=×100…………………（1）式中：DI—病情指数S—各病情级别代表数值4n—各病情级别病株数N—调查总株数S—最高病情级别代表值注：计算结果精确到小数点后两位。7抗病性评价7.1抗病性评价标准依据鉴定材料3次重复病情指数（DI）的平均值确定其抗性水平，划分标准见表2（引自潘龙其等，2016）。表2苜蓿镰刀菌根腐病抗性评定标准7.2鉴定有效性判别感病对照材料达到其相应感病程度（DI＞50），该批次根腐病抗性鉴定视为有