HLA配型与脐血移植

HLA配型与脐血移植—移植供受体HLA配型的研究进展

MHC（主要组织相容性复合体）

TCR（T细胞受体）

Ig（免疫球蛋白）背景免疫遗传学包括三大部分

其中MHC是国际免疫学研究中最活跃的部分

1958年法国医生J.Dausset第一个发现了人类白细胞抗原（HLA）。40年来关于MHC（主要组织相容性复合体）的研究非常活跃，多次召开国际会议，每次都有新的进展。2001年又有一次国际盛会将在美国西雅图召开—第十三届国际组织相容性专题讨论会。

MHC与移植是每次会议讨论的重点。

通过大样本的临床病例分析，最终证明，HLA配型是移植存活，尤其是长期活存的关键因素。

一、脐血移植中GVHD发生与HLA相关性的研究1988年法国巴黎Gluckman等进行了第一例脐血移植后，许多国家相继进行了脐血移植。

分析了381例脐血移植中HLA匹配程度与GVHD的相关性。

供受体HLA匹配与GVHD相关性（N=381）

HLA匹配程度移植成功率（%）GVHDII—IV度GVHDIII—IV度

完全匹配1个抗原不匹配2个抗原不匹配3个抗原以上不匹配

10082786927(83)*49(98)*49—9(37)*22(63)*22—*骨髓移植后GVHD发生率二、HLA配型技术

血清-细胞学配型60年代基因配型80年代氨基酸残基配型90年代三维结构配型近几年

（二）基因分型技术早期的方法：限制性片段长度多态性（RFLP），1980年Botstein等研究，现已被PCR/RFLP方法取代。序列特异引物（SSP：sequencespecificprimers），1990年Fugger等用于HLA-DP分型单链构象多态性（SSCP：singlestrandconformationpolymorphism）序列特异性寡核苷酸探针（SSOP：sequencespecificoligonucleotideprobes）PCR直接序列测定（PCR/sequencing）研究对象

HLA-I类分型HLA-II类分型

测序HLA三维结构GVHDABDRB1DQB1患者0401差2个aa供体0404三维结构差别不大II度病例一HLA-DRB1*0401与*0404β1抗原结合区空间结构的比较HLA-DRB1*0401a1HLA-DRB1*0404a1图1病例二研究对象

HLA-I类分型HLA-II类分型

测序HLA三维结构GVHDABDRB1DQB1患者0401

供体0408三维结构差别大IV度差1个氨基酸HLA-DRB1*0401与*0408β1抗原结合区空间结构比较HLA-DRB1*0401a1HLA-DRB1*0408a1图2病例三研究对象

HLA-I类分型测序HLA三维结构GVHDAB患者2，_52，38....供体..，68..，......A*02011A*6801IV度DRDQ三维结构差别大HLA-A*6801的测序图

抗原结合区的结构存在明显不同抗原结合区HLAA*02011结构HLAA*6801结构图3HLA-A*02011/3301α1非抗原结合区三维结构比较HLA-A*02011a1HLA-A*3301a1图4病例五研究对象

HLA-I类分型测序HLA三维结构GVHDAB患者11,3358,60....供体..,....,13....B*40011B*1301IV度DRDQ移植后患者的B60

B13三维结构差别大病例六研究对象

HLA-I类分型测序HLA三维结构GVHDAB患者2,117,621,157

供体..,....,....,..6

0301106011IV度DRDQ三维结构差别大HLA-DQB1*03011的β1功能HLA-DQB1*06011的β1功能区HLA-DQB1*03011/06011β1非抗原结合区三维结构比较图6（四）氨基酸残基配型策略的提出与应用

1992年Takimoto等提出了HLA残基配型。免疫学基础研究证明，受者细胞真正识别的抗原决定簇是8~11个氨基酸的肽片段。将I类抗原中关键残基归为10个组。10ResiduemodelQ114A10A19A25A26A31A32A33A36A43A66A74R114A1A3A11A29A36K127A2A9A23A24A28A68A69T69-S77B8B14B16B39B64B65B78T41B12B13B21B40B41B44B45B47B49B50B60B61F67B5B8B35B51B53B57B78S70B17B57B58B63N80A11B7B8B14B15B16B18B22B35B39B40B41B42B45B46B48B50B54B55B56B60B61B64B65B67B70B71B72B75B76B78B79R83A9A23A24A25A32B5B12B13B17B21B27B37B38B44B47B49B51B52B53B57B58B59A71-D74B5B7B22B27B42B46B54血清型与氨基酸残基配型的对应关系

1996年Takimoto等研究了HLA分子结构中朝向T细胞受体方向的残基，发现62，65，163位三个残基朝向TCR。回顾性研究87~95年44891份病例，发现：

三残基模型与血清型的对应关系E62A9A23A24G62A2B17B57B58L62A29A43Q62A1A3A11A30A31A32A36A74R62A10A19A25A26A28A33A34A66A69B5B7B8B12B13B14B15B16B18B21B22B27B35B37B38B39B40B41B42B44B45B46B47B48B49B50B51B52B53B54B55B56B59B60B61B62B63B64B65B67B70B71B72B75B76G65A9A23A24Q65B5B7B8B12B13B14B15B16B18B21B22B27B35B37B38B39B40B41B42B44B45B46B47B48B49B50B51B52B53B54B55B56B59B60B61B62B64B65B67B70B71B72B75B76R65A1A2A3A10A11A19A25A26A28A29A30A31A32A33A34A36A43A66A68A69A74B17B57B58B63E163B7A66B13B27B40B47B48B60B61L163B5B12B15B17B21B35B44B45B46B49B50B51B52B53B56B57B58B62B63B70B71B72B75B76R163A1A10A11A25A26A43T163A2A3A9A19A23A24A28A29A30A31A32A33A34A36A68A69A74B8B14B16B18B22B37B38B39B41B42B54B55B59B64B65B67三残基匹配存活率

>A、B、DR不匹配者三残基不匹配存活率

<

A、B、DR位点匹配者1996年Terasaki等提出了HLA氨基酸残基配型标准（HLA-aminoacidresiduematehing简称ResM标准）。将HLA-I类分成10个组、Ⅱ类分成7个组。实践证明采用此标准可大幅度提高移植者相配机率，显著降低移植后的致敏性和免疫反应性。

HLA-I类抗原氨基酸残基配型标准ResM分组抗原特异性A1(R114)A1,A3,A29,A36A2(K127)A2,A23,A24,A68,A69A10/A19(Q114)A25,A26,A34,A66,A19(A31,A32,A33,A74),A43B5/B8(F67)B5(B51),B35,B53,B78,B8,B57B7(A71-D74)B7,B22(B54,B55,B56),B27,B42,B46,B67B8(T69-S77)B8,B14(B64,B65),B16(B39),B78B12(T41)B12(B44,B45),B13,B21(B49,B50),B40(B60,B61),B41,B47B17/63(S70)B17(B57,B58),B63,B59Bw4(R83)A9(A23,A24),A25,A32,B5(B51,B52),B12,B13,B17(B57,B58),B21(B49),B27,B37,B38,B47,B53,B59,B63,B77Bw6(N80)A11,B7,B8,B18,B14(B64,B65),B15(B62,B75,B76,B78),B16(B39),B22(B54,B55,B56),B35,B40(B60,B61,B48,B4005),B41,B42,B45,B46,B50,B67,B70,B71,B72HLA-II类DR抗原氨基酸残基配型标准

ResM分组抗原特异性DQ1DR1(DR10),DR2(DR15,DR16),DR6(DR13,DR14)DQ2DR3(DR17,DR18),DR7DQ3DR4,DR5(DR11,DR12),DR9,DR14DQ4DR8,DR18DRB3DR3(DR17,DR18),DR5(DR11,DR12),DR6(DR13,DR14)DRB4DR4,DR7,DR9DRB5DR1(DR10),DR2(DR15,DR16)三、HLA准确配型应注意的几个技术环节造血干细胞移植中，不断遇到的麻烦是不同实验室对同一个或几个被检测样品HLA分型结果不一致的问题，困绕着临床移植工作的顺利进行，引起医生和病人家属极大关注，这说明HLA配型并非易事。要想得到准确结果，应注意以下几个技术问题：1、

抗血清和基因分型试剂盒的质量2、兔补体和引物的质量3、基因重组和纯合子4、抗原交叉反应和阶梯分型5、基因图的构建一、血清型分型疑难抗原分析（1）Trayposition7A7D10F11B11C11DReaction888884SpecificityBBBBBB1313155713273747404027086178101血清学抗原指定：B13，B40或纯合子B13。HLA：B7/40增补板，分析有困难。本室合成的B40引物：未见阳性带（经过两次证实），确定B13纯合子。

M+---疑难抗原分析（2）Trayposition5F6A7A7D10F10E11B11C11DReaction818881888SpecificityBBBBBBBBB727088101+/-614438-/+27131315571327374727?404027086178101血清学抗原指定：B13，B61（40）。HLA-B27抗原（—）。HLAB7/40SupplementTray：B27有反应。本室合成的B40引物：未见阳性带。HLA-I类基因分型：B13，B27。M---疑难抗原分析（3）Trayposition7C7D7F9A10C10B11A12E12D12CReaction8886884888SpecificityBBBBBBBBBB15571315576276+/-72215670751508354448-/+72185135536246751508235537515081511461508