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文档简介

1/1EV71感染并发神经源性肺水肿与免疫功能奕化的相关性研究青岛大学硕士学位论文EV71感染并发神经源性肺水肿与免疫功能奕化的相关性研究姓名:

王亚秋申请学位级别:

硕士专业:

免疫学指导教师:

王静20110525摘要结果:

脑炎并发肺水肿组患儿血清�.�含量为�.��.��/�,较其它两义。

外周血���赴��吭谌�橹�浯嬖谙灾�圆钜������,����,其水肿组及单纯脑炎组患儿血清��骄��糠直鹞�����.��疞和����.��疞,两组差异无统计学意义��.���氲ゴ渴肿鉋�∥薏⒎⒅⒆�����.�����.��疞及单纯手足口病无并发症组的����.��疞,差别具有显著性硕士研究生王亚秋�庖哐������������������������籸�����,��������籸�����,���������������������������.�琁��������������.���������珻���������.��.��.��,�����.��瓵�������瑂���������������.��������������������������.��甈�.��甋�������.�����.����������������������.���������������:

����������������������������������������������篩�������������������籶����引言引言手足口病���琭��甿������琀��是儿童常见的急性传染病之一,��年�轮�月大范围流行于山东地区的手足口在澳大利亚、南非及欧洲亦有相继的报道。

由��引起的��已在世界范围内引起�余次暴发与流行。

近�年来,手足口病流行在东南哑呈上升趋势。

��年�例死亡,��年�驴J脊灿����⒉。

�渲兴劳�例;新加坡在��年、��年、��年、��年和��年均有不同程度的流行,并在��年秋季发生了大规模流行。

我国台湾地区分别在��年、��年及��年间爆发大流行。

近几年来,我国广东、福建、上海、重庆等地区均有局部流行的报道。

��年武汉病毒研究所从��患者中分离出��病毒,��年深圳市卫生防疫站也从在��年的流行中出现了首例死亡病例,��岁男童死于肺水肿、肺出血。

����病毒感染之后可以引起散发的病例也可以引起许多疾病的爆发,主要包括手足口病、疱疹性咽峡炎及无菌性脑炎等。

到目前为止,��病毒的传播主要通过粪.口途径,且隐性感染者居多。

��感染通常属于自限性,但一旦迁延即可发展为重症感染,包括中枢神经系统受累、肺水肿等致死性并发症,几乎每次流行都能引起死亡病例【��】。

��年台湾官方也报道,由��引起的手足口病患儿致死的原因主要是肺水肿【�俊5ǖ侥壳拔V梗珽��喙厥肿鉏�病并发肺水肿的发病机制尚不明了,因此是目前国内外学者研究的热点。

病毒的直接侵犯是被学术界所公认的,通过对台湾��年死亡患儿的组织免疫组化试验显示仅在中枢神经系统的神经元、突触及炎性区域包括大脑皮层、脑干、脊髓肠病毒抗原和核酸着色阳性。

病毒感染后激发免疫炎症反应是存在较多争议的一种机制,病毒感染后激发机体免疫反应,释放多种细胞因子,形成风暴引起全身炎症反应,导致多脏器功材料与方法第一章材料与方法�可调式微量移液器�鶪������人肿瘤坏死因子.��棵噶觳馐约梁�上海森雄科技实业有限公���血清免疫球蛋白的检测取患���苎��,用��抗凝后取血浆备用。

取己准备好的血浆,加入相应的试剂,使用同立��生化分析仪分别检测免疫���,注入含肝素钠抗凝剂的玻璃管中,�轻摇混匀,取干燥玻璃�淋巴细胞分离液,将稀释好的全血用移液器缓慢加入有淋巴细胞分离液的试管中�Q刈殴鼙诩樱�俣纫B,使用水平离心机���痬�离心�����的���喝芙猓�⒓疵縀����分����标记羊��抗鼠��淖急福杭尤���稀释使用。

��.��检测程序单个核细胞悬液�肛�尤敕肿昂玫牡谝豢固骞苤校���湿盒��⒓湿盒�����次,弃上清。

��.��结果检查及判断本实验采用双抗体夹心��瓻��法。

用抗人细胞因子单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的人细胞因子与单抗结合,加入生物素化的抗人细胞因子抗体,形参照试剂盒说明检测细胞因子,具体步骤如下:

��.��样品准备�将反应板充分混匀后置�℃��洗板:

用洗涤液将反应板充分洗涤��次,向滤纸上印干。

��靠准用副昕固骞ぷ饕���实验前�材科与方法�取出所需数量的板条,其余密封放回��。

�建立标准曲线:

设标准孔�祝�靠字懈骷尤胙�废鸵�����孔加�每孔中加入第一抗体工作液��将反应板充分混匀后置�℃���靠准尤氲孜锕ぷ饕������姘荡从�.��终止液混匀。

��.��结果计算与判断�所有�值都应减除空白值后再行计算。

�/�之�值在�根据样品�值在该曲线图上查出相应人�.�含量。

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�建立标准曲线:

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�将反应板充分混匀后置�℃���靠准用副昕固骞ぷ饕���。

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�终止液混匀。

��.��结果计算与判断�/�之�值在�根据样品�值在该曲线图上查出相应人��丫含量。

��.��样品准备��.��样品检测材料与方法�洗板:

用洗涤液将反应板充分洗涤��次,向滤纸上印干。

�每孔中加入第一抗体工作液��将反应板充分混匀后置�℃��洗板:

用洗涤液将反应板充分洗涤��次,向滤纸上印干。

�����处测吸光值��】欤�奔涔�た赡艿贾卤镜灼ǜ�。

��.��结果计算与判断�所有�值都应减除空白值后再行计算。

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����鼓�,标本要求无溶血,��实验结果的统计学分析�煅榻�斜冉希�绶讲畈黄氩捎肕��甒����蚄�������煅椋琍�.�视为有统计学意义。

青岛大学硕士学位论文第二章������癐三组之间差别无统计学意义,其他两组相对无并发症组无明显的升高。

见表��,��������仅�.��.��:

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跆脑炎并发肺水肿组叩�.�,��.�,叩�.�口��瘛В��赥�∥/图��三组患几血清细胞因子含量����患儿外周血���癵��细胞含量义。

外周血���赴��吭谌�橹�浯嬖谙灾�圆钜������,����,其���������甌\./��������患儿血清免疫球蛋白含量在三组之间的差异有明显差异,但脑炎并发肺水肿组患儿血清��掀渌�阶橛猩�叩那魇啤QG錓�含量在三组之间无明显变化。

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组忠儿血清免疫球蛋白含量��馡���.矿、�������患儿血清补体�、�含量的检测�疞,明显低于单纯脑炎纯脑炎组与无并发症组相比较,差别无统计学意义。

脑炎并发肺水肿组患儿血清�含量与其他两组相比差别具有显著性。

见表��,图����������资∥零�������������例��感染的手足口病患儿,按照是否并发肺水肿及脑干脑炎进行分组,循环衰竭,伴有或不伴有手足口病或急性疱疹性咽峡炎,病情进展迅速,病死率高,儿��把L瞧骄��糠直鹞������/������.�两组的��把L撬������;肺水肿组患儿血小板含量明显高于无并发症组结果表��部分病例血常规项目列表���������姓名红细胞����/������由冰倩徐方鑫于立吴杨明奥干双������������������������������������������������������������������������������������������王家豪陈明顺王雨晴于华鹏焦宴治陶吉睿于丰硕修文斌崔佳俊刘列����������������������������������青岛大学硕士学位论文����������年龄�/��/��/�����由冰倩徐方鑫于立吴杨明奥王双���������������������������������������������������脑脊液常规�姓名����无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无色无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无无��无无无无无�������������������������������������������������������������青岛人学硕十学位论文�瘛!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!猒�!!猒一������������������一一��感染的手足口病患儿娄另�百西页并发肺水肿组��������������������⋯�.��.�印�������������甿��疞����单纯脑炎组讨论自��年美国首次报道��病毒后,在澳大利亚、南非及欧洲亦有相继的报道,�世纪�年代中期,世界各地相继暴发以中枢神经系统症状为主要临床特征的大流行也分离到了����】。

��年,��在马来西亚沙捞越州爆发,导致�并发症,�名儿章死亡,并相继在��及��年间又爆发大流行,,该疫情的病例总数估计有��颉���闑��诠沤��ⅲ�人死亡。

��年后,在南部的基孔肯雅和印度的一些西部地区暴发大的流行。

印度最大的手足口病暴发是在��以��和���V鳌緇�。

鉴于目前缺乏有效的手足口病疫苗及行之有效的治疗手段,明确手足口病并发肺水肿的发病机制对于预防和治疗手足口病具有重要意义。

有研究认为免疫反应在��引发的肺水肿中承担着重要角色,尤其是细胞免疫应答。

���等的研究结果显示合并有脑炎的忠儿体内存在可变化的细胞免疫应答。

针对体液免疫应答在��相关手足口病合并肺水肿中的作用尚存在较大争议,有有直接的实验数据证明,而且对于参与体液免疫的补体分子在病程中的变化的研究报道甚少;并且与免疫应答相关的细胞因子在疾病进程中变化的研究争论较多,因此本实验通过设立不同对照组的方法,对�例手足口病例分别从免疫球蛋白及补体、免疫细胞及细胞因子等方面进行免疫功能的研究,旨在为临床治疗及疫苗的开发应用提供实验依据。

�青岛大学硕十学位论文本实验对�例手足口病患儿的血清免疫球蛋白检测结果显示,脑炎合并肿水肿感染后引发的肺水肿进展中并没有大量的免疫球蛋白被释放。

补体是由肝细胞产生的可以参与体液免疫应答的大分子物质,在体内补体可以通过不同途径被激活后直接参与免疫反应及其调节,协助清除机体循环免疫复合物。

在一些病毒或细菌感染的病例中,常出现总补体甚至是�、�含量下降【�】。

本研究的结果显示脑炎合并肺水肿组患儿血清�、�含量明显下降,与其它两组比较差异具有统计学意义。

讨论提示在肺水肿的发病过程中,存在补体消耗。

总之,目前对于��病毒感染引发的手足口病暴发流行尚无特异有效的预防疫苗和抗病毒药物,尤其是针对��感染引发的严重并发症如神经源性肺水肿,其发病机制并没有彻底明确,临床治疗中只能针对症状给予相应的处理,无法做到早预防、早治疗,导致病死率极高。

因此,进一步的研究仍需加强对��相关手足口病并发症机制的研究。

本实验研究认为细胞免疫以及某些特定细胞因子在��感染后引发的手足口病合并肺水肿的进程中起了重要作用,但体液免疫应答可能并没有参与其中,并且该过程中却伴随着补体量的消耗。

由于受所检测标本数量、实验指标量以及取样时间的限制,手足口病并发神经源性肺水肿更加深入的发病机制有待进一步研究明确。

青岛大学硕上学位论文�⒛匝撞⒎⒎嗡�鬃榛级�G錓�����吖等炎性细胞因子异常过度释放,可能是引起��病毒感染所致手足口病并发神经源性肺水肿病程进展的重要因素�⒛匝撞⒎⒎嗡�鬃榛糐��周血������等淋巴细胞明显减少,使得患儿体内细胞免疫功能降低,进而影响到机体对��病毒的清除而使病情向纵深参考文献��甁,�����瓾,��瓾.������������.������������������瓽,����������������.����������������:

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����.近年来,我国部分地区出现手足口病的大流行,其中以��年爆发于山东东部地区以及河南部分地区的手足口病最为严重。

通常情况下,�%的手足口病病例为自限性疾病。

肠道病毒����感染是引起��手足口病���琭��猰������琀��的主要病原体,自��年美国首次报道后,在澳大利亚、南非及欧洲亦有相继的报道。

我国的台湾地区分别在��、��及��年间爆发大流行。

��感染通常属于自限性,多发生于婴幼儿,可引起手、足、口腔等部位的疱疹,但是一旦迁延即可进展为无菌性脑炎及脑干脑炎。

并发脑干脑炎后的显著特征是高��年,在美国加利福尼亚州��首次被从患有中枢神经系统疾病的婴儿粪行。

�世纪�年代中期,世界各地相继暴发以中枢神经系统症状为主要临床特征印度最大的手足口病暴发在�。

在中国安徽阜阳��年爆发大流行�,蒙���的传染源及传播途径��该病毒主要是通过飞沫传播,也可能通过直接接触进行传播。

该疾病存在密切计�暌阅诳烧嫉椒⒉∽苁���ィ�������谛录悠碌氖肿��罅餍兄校��例患�诜⒉〉淖畛跫柑�、疱疹液,脑脊液,眼拭子和组织。

除脑脊液标本外,其它标本在运往实验室的过程中需要病毒运送介质,并将其保存在��。

��病毒的直接分离可对疑似患者标本进行肠道病毒分离,它是诊断肠道病毒的金标准【�】。

另议在采集标本时,最好同时采集咽拭子和另外一种类型的标本,以提高标本的阳性��血清学检测血清学检测可用于回顾性诊断,所用配对血清标本取自急性期和恢复期,一般��组织标本的免疫组化技术检测���技术�����技术可克服上述检测方法中费时、费力,无法满足病毒流行期间及时处�一般的由病毒性脑膜炎导致的发烧,头痛,脖子僵硬,或背部疼痛等类似症状通常到目前为止,��感染导致肺水肿的发病机制尚不明确,病毒的直接侵犯是被学术界所公认的,通过对台湾��年死亡患儿的组织免疫组化试验,使用单克隆鼠抗��抗体检测,仅在中枢神经系统的神经元、突触及炎性区域包括大脑皮层、脑干、脊髓肠病毒抗原和核酸着色阳性【�】。

电镜下脊髓显示包含散在小核糖核酸病毒样颗粒及病毒包含体的高空泡状神经元,提示有病毒直接侵犯。

神经源性肺水肿是目前研究的热点,研究认为,脑干脑炎造成视丘下部和延髓孤束核功能紊乱,机体的应激反应导致交感神经兴奋,血中儿茶酚胺�錾舷偎亍⑷ゼ咨錾舷偎氐�含量显著增高,进而全身血管收缩,血流动力学急剧变化,动脉血压急剧增高,体循环内大量血液进入肺循环内,一方面肺毛细血管床有效滤过压急剧增高,大量体液潴留在肺组织间隙,从而形成肺水肿;另一方面血流冲击造成血管内皮细胞损伤,司时体内血管活性物质�缱橹�泛突杭る牡�大量释放,使血管通透性增加,大铬议的一种机制,病毒感染后激发机体免疫反应,释放多种细胞因子,形成风暴引起全身炎症反应,导致多脏器功能衰竭。

在脑干脑炎患儿中,发生神经系统细胞因子��吖�椭卵滓蜃酉灾��撸�R篒��、肿瘤坏死因子.旺����������������贜�组的水平与正常对照组相比显著增高。

鉴于上述的研究结果,认为��感染引起的神经性肺水肿可能与炎症性细胞因子的大量释放有关,有必要对��感染患儿进行相关细胞因子的检测。

研究认的结果,认为血液动力学因素与肺水肿无关,与细胞免疫息息相关,相关的活性淋要作用。

有学者发现一些先天免疫球蛋白缺乏症患者在感染肠道病毒后也可发展为致命的并发症,因此认为体液免疫并没有参与相关的免疫应答反应,但是目前并没有研究明确发现��感染患儿体内无体液免疫的发生。

��大多为自限性疾病,目前治疗尚缺乏特异、高效的抗病毒药物。

治疗主要是对症处理,针对发烧使用退热药�缙巳认⑼�;针对皮肤的疮痛给予止痛处理�缏�适�醇�。

对于年龄较小的患儿,因为发生口腔溃疡而比较痛苦,应给予适当的干预,如冷饮喂养通常比较容易接受,同时母亲应给予更多的关照。

另外比较症状较轻时很少需要住院治疗,除非患儿发生神经系统的并发症。

类似的患儿一引,�����口服吸收好、副作用小,其机制可能为通过阻止病毒与宿主细胞受体的结合而抑制病毒复制。

研究认为预防手足口病的有效方法之一就是研制相应有效的疫苗,但目前尚无�青岛大学硕十学位论文��晃廴镜娜沼闷芳笆尘叩染��荆�级�啾慵芭判刮镉�%漂白粉澄清液浸泡,衣物置阳光下暴晒,室内保持通风换气;加强物品消毒,用碘酒或者氧化剂都可以杀灭病毒,比如�消毒液�;另外还可通过紫外线照射、高温晒蒸煮来杀灭病毒。

加强饮水和食物的消毒。

��和其他一些肠道病毒耐酸,对胃酸有极强的抵抗力,所以当水源被污染后就比较容易出现大的肠道传染病流行;患病儿童接触,减少被感染机会;��医院加强预诊,设立专门诊室,严防交叉感染;中枢神经系统损害及脑脊液改变【�】。

金奇编.医学分子病毒学��北京:

科学出版社,��:

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