DB11∕T 1648-2019 樱桃砧木组培快繁技术规程

樱桃砧木组培快繁技术规程2019-06-18发布2019-10-01实施II前言 12规范性引用文件 3术语和定义 4容器、工具的清洗与灭菌 25培养基的配制 26外植体的选取及清洗 2 28初代培养 39继代增殖培养 310壮苗培养 3 412移栽过渡 4附录A(资料性附录） 5附录B(资料性附录） 6本标准按照GB/T112009给出的规则起草。本标准由北京市园林绿化局提出并归口。本标准由北京市园林绿化局组织实施。本标准起草单位:北京市海淀区植物组织培养技术实验室、北京市植物组织培养工程技术研究中心、北京市林业果树科学研究院。本标准主要起草人：刘兰英、张军民、李春玲、杜建军、刘凤琴、张开春。樱桃砧木组培快繁技术规程2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T2306—20樱桃砧木组培快繁技术规程2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T2306—2013花卉种苗组培快繁技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。本标准规定了櫻桃砧木组培快繁过程中容器、工具的清洗与灭菌，培养基的配制，外植体的选取及清洗，接种，初代培养，继代増殖培养，壮苗培养，生根培养，移栽过渡等技术要求。本标准适用于海櫻系列、蓝丁系列和吉塞拉系列櫻桃砧木苗的组织培养快速繁殖。消毒后的外植体接种在无菌培养基中进行培养，获得初级无菌植物材料的培养阶段。将消毒后的外植体在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。改写NY/T23062013，定义3.3。从自然生长的活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的起始材料。1将培养材料从老培养基中转接入新鲜培养基中继续培养的过程。3.5选择品种纯正、来源可靠、生长旺盛、无病虫害的优良植株作为外植体的母株。3.5选择品种纯正、来源可靠、生长旺盛、无病虫害的优良植株作为外植体的母株。组织培养过程中诱导植物器官或愈伤组织产生的簇状芽。组织培养过程中生长在培养容器中的无菌苗。櫻桃砧木组培快繁所选用的基本培养基是MS培养基，MS培养基的成分和含量参见附录A。不同培养阶段添加植物生长调节剂的培养基配方参见附录B。培养基的配制和灭菌应符合NY/T2306—2013第7章的要求。6外植体的选取及清洗3.66.2.1可于2〜3月从母株上选取健壮的一年生枝条，放在20°C〜25°C的房间内水培，每天换水，待枝条上叶芽萌发至2cm以上时，剪下作为外植体备用；也可于5〜9月选取母株上半木质化的新梢作为外植体备用，宜在植物表面露水干后采集新梢。6.2.2采集的外植体宜用塑料袋包装并做好品种标记，低温储运。6.3外植体清洗去除外植体叶片，根据节间长短剪取带1〜2个芽的2cm〜3cm茎段，用中性洗涤剂溶液将外植体表面洗净，流水冲洗10min〜30min，备用。提前30min打开超净工作台、操作间、缓冲间和更衣间等处的紫外灯进行消毒，同时打开电热灭菌器。关掉紫外灯后，超净工作台宜开启10min〜20min后使用。29.2.1在超净工作台台面上距外侧边缘10cm〜20cm处打开培养瓶瓶盖，从母瓶中取出要继代的瓶苗，去除基部褐化的组织和部分叶片。9.2.2把大的丛生芽团切割成单芽或含2〜4个芽的芽丛，转接到新配制的増殖培养基上。单芽高度为1cm左右；牙丛每个牙高可小于1cm。9.2.3每个培养瓶内转接芽的数量因培养容器大小的培养瓶中可转接8株/瓶或5丛/瓶左右。转接芽基部插入培养基0.5cm左右，分布均匀，及时盖紧瓶盖或封口并扎紧。9.2.4将植物品种代号、培养基代号、继代日期及人员信息标示到培养瓶上。9.3增殖培养将要继代的培养瓶表面用75%的酒精擦拭消毒。其它准备见本标准7.1条。3将继代转接好的瓶苗放入温度22C±2C的培养室培养，光照强度1500Lux〜250010h/d〜12h/d左右，培养周期为30d左右。培养过程中每周至少检查1次，发现污染应立即剔除；在下次继代前记录増殖倍数。对生根培养前高度小于2cm的瓶苗，可进行一次壮苗培养。其它操作见本标准第9章。接种人员穿戴好专用鞋、工作服、帽子和口罩进入接种室。将手、台面、接种工具用75%酒精擦拭，将接种工具插入电热灭菌器灭菌，灭菌后置于搁置架上冷却、备用。7.2.1将清洗后的外植体转移到无菌瓶中，倒入75%酒精直至没过外植体表面，轻摇瓶身30s〜60s后将酒精倒去，用无菌水冲洗外植体1〜2遍。束后，倒出并回收消毒液，外植体材料用无菌水清洗3〜4遍。7.2.3消毒后的外植体置于放有消毒滤纸的培养皿中，待吸干表面水分后，底端向下竖直插入到芽诱导培养基上，及时盖紧瓶盖或封口并扎紧。培养基配方参见附录B。7.2.4将植物品种代号、培养基代号、接种日期及接种人等信息标示到培养瓶上。将接种好外植体的培养瓶放入温度为25°C±2°C的培养室进行培养，光照强度1500Lux〜2500培养过程中每周要检查1〜2次，发现外植体褐化、污染、死亡时应立即剔除。将高度为20cm〜30cm的单芽转接到生根培养基上，直径7.5cm〜8cm、容积350ml〜370mL的培养瓶中可转接10株/瓶左右。其它操作见本标准第9章。宜选择温度、光照、湿度可调控的温室作为移栽过渡的场所。移栽前应对环境进行消毒，消毒方法参见附录C宜选择草炭和蛭石作为基质。在容器中先装入1/2草炭，上面再铺一层蛭石，用05g/L的多菌灵溶液将基质浇透后备用。12.2.1将长出3〜5条不定根的瓶苗从培养容器中取出，放入清水中洗去培养基，沥水后进行移栽。12.2.2移栽时在基质上打孔，孔距2cm左右，孔大小以可容纳组培苗根系为宜。将根系植入孔内，覆土至组培苗根颈处，稍压实，保持苗不倾斜。12.2.3栽好后插上牌子，写明品种和移栽日期。12..2移栽后2周内相对湿度宜控制在90%左右，移栽后3〜4周可逐渐降低相对湿度，4〜6周后相对湿度可保持在60%左右。12..3移栽后4周内光照强度宜为4000Lux〜7000Lux，之后可逐渐増大光照强度至自然光。4MS培养基成分MS培养基成分CH1A附录A(资料性附录）MS培养基成分和含量表A.1MS培养基成分和含量硫酸镁磷酸二氢钾乙二胺四乙酸二钠硫酸亚铁硫酸猛硫酸锌碘化钾钼酸钠硫酸铜甘氨酸MS培养基成分和含量见表A.156琼脂的强度为401g/cm2〜800g/cm2;壮苗培养基中加活性炭1.0g/L基本培养基(mg/L)(mg/L)糖琼脂注意事项芽诱导培养基0.50宜用不透气膜封瓶增殖培养基0.5〜1.00〜0.1口壮苗培养基0〜0.5宜用透气生根培养基00.5〜1.0(资料性附录）组培各阶段的培养基配方组培各阶段的培养基配方见表B.1.表B1组培各阶段的培养基配方(资料性附录）温室环境的消毒方法温室环境的消毒方法见表C1。表C1温