GB 7300.503-2023 饲料添加剂 第5部分：微生物 屎肠球菌（正式版）

第5部分：微生物屎肠球菌国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：——第1部分：氨基酸、氨基酸盐及其类似物甘氨酸(GB7300.102);-—第2部分：维生素及类维生素维生素D₃油(GB7300.202);甜菜碱(GB7300.203);甜菜碱盐酸盐(GB7300.204);——第3部分：矿物元素及其络(螯)合物碘化钾(GB——第3部分：矿物元素及其络(螯)合物亚硒酸钠(GB7300.302);——第4部分：酶制剂木聚糖酶(GB7300.401);——第4部分：酶制剂植酸酶(GB7300.402);—第4部分：酶制剂纤维素酶(GB7300.403);——第5部分：微生物酿酒酵母(GB7300.501);——第5部分：微生物植物乳杆菌(GB7300.502);——第5部分：微生物屎肠球菌(GB7300.503);——第5部分：微生物嗜酸乳杆菌(GB7300.504);——第6部分：非蛋白氮尿素(GB7300.601);——第10部分：调味和诱食物质谷氨酸钠(GB7300.1001);—第10部分：调味和诱食物质大蒜素(GB7300.1002)。Ⅱ饲料添加剂是指在饲料加工、制作、使用过程中添加的少量或者微量物质，包括营养性饲料添加剂和一般饲料添加剂。为便于使用，按照产品类型，GB7300《饲料添加剂》分为以下 ——多糖和寡糖；——其他。本文件的产品屎肠球菌属于第5大类微生物，因屎肠球菌是此大类第3个发布的产品标准，所以本文件以GB7300.503编号，作为GB7300的第503部分。1GB7300.503—2023饲料添加剂第5部分：微生物屎肠球菌1范围2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文本文件。GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T6435饲料中水分的测定GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定GB10648饲料标签GB13078饲料卫生标准GB/T13079饲料中总砷的测定GB/T13080—2018饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T13081饲料中汞的测定GB/T13082饲料中镉的测定GB/T13091饲料中沙门氏菌的测定GB/T13092饲料中霉菌总数测定方法GB/T13093饲料中细菌总数的测定GB/T17480饲料中黄曲霉毒素B₁的测定酶联免疫吸附法GB/T18869饲料中大肠菌群的测定GB/T28716饲料中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法GB/T30956饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法ISO20776-1:2006临床实验室测试和体外诊断测试系统传染性病原体及药敏设备性能评估的敏感性试验第1部分：抗菌药物的体外活性检测方法(Clinicallaboratorytestingandinvitrodiag-nostictestsystems—Susceptibilitytestingofinfectiousagentsandevaluationofperformanceofanti-microbialsusceptibilitytestdevices—Part1:Referencemethodfortestingtheinvitroactivityofanti-microbialagentsagainstrapidlygrowingaerobicbacteriainvolvedininfectiousdiseases)3术语和定义2GB7300.503—20233.1屎肠球菌Enterococcusfaecium4技术要求物质及微生物的限量要求。理化指标应符合表1的要求。指标屎肠球菌活菌计数*/(CFU/g)水分/%细度(2.0mm标准筛通过率)/%活菌数以每克产品中菌落形成单位(colonyformingunits,CFU)表示。仅适用于粉状产品。卫生指标应符合表2的要求。项目指标总砷/(mg/kg)铅/(mg/kg)汞/(mg/kg)≤0.1镉/(mg/kg)≤0.5黄曲霉毒素B₁“/(μg/kg)≤10.03GB7300.503—2023表2卫生指标(续)指标脱氧雪腐镰刀菌烯醇“/(mg/kg)玉米赤霉烯酮/(mg/kg)≤0.1大肠菌群/(MPN/g)霉菌总数/(CFU/g)沙门氏菌/25g不得检出表中所列限量，除特别注明外均以干物质含量88%为基础计算(大肠菌群、霉菌总数、沙门氏菌除外)此类指标仅适用于植物性载体生产的产品。屎肠球菌对氨苄青霉素的最低抑菌浓度(MIC)小于或等于2mg/L。5采样样品的采集应遵循随机性、代表性的原则，采样过程应遵循无菌采样要求，防止一切可能的外来5.2.3独立包装大于500g的产品一个无菌采样容器内作为一件样品。5.3.2应在运输过程中保持样品完整。6试验方法按附录A规定的方法测定。4GB7300.503—2023按GB/T6435规定的方法测定。按GB/T5917.1规定的方法测定。按GB/T13080—2018规定的方法测定。6.8汞(以Hg计)按GB/T13081规定的方法测定。按GB/T13082规定的方法测定。6.10黄曲霉毒素B₁按GB/T17480规定的方法测定。6.11脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素)按GB/T30956规定的方法测定。6.12玉米赤霉烯酮按GB/T28716规定的方法测定。按GB/T13091规定的方法测定。6.16氨苄青霉素MIC值按ISO20776-1:2006规定的方法测定。5GB7300.503—20237检验规则不应超过50t。型式检验项目为第4章规定的所有项目，在正常生产情况下，每半年至少进行1次型式检验。在有a)产品定型投产时；c)停产3个月以上，重新恢复生产时；d)出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时；e)管理部门提出检验要求时。7.4.2检验结果中有任何指标不符合本文件规定时，可自同批产品中重新加倍取样进行复检。复检结果即使有一项指标不符合本文件规定，则判定该批产品不合格。7.4.3除微生物指标外，各项目指标的极限数值判定按GB/T8170中全数值比较法执行。标签应符合GB10648的规定。6GB7300.503—2023(规范性)屎肠球菌菌种鉴别方法A.1形态鉴别A.1.1肠球菌选择性培养基(胆汁七叶苷叠氮钠琼脂)A.1.1.1成分胰蛋白胨17.0g牛肉浸粉3.0g酵母浸粉5.0g牛胆粉10.0g氯化钠5.0g柠檬酸钠1.0g七叶苷1.0g柠檬酸铁铵0.5g叠氮化钠0.25g琼脂13.5g蒸馏水1000mLpH7.1±0.2A.1.1.2制法将所有成分加入蒸馏水中，加热不断搅拌，煮沸使琼脂完全溶解，121℃高压灭菌15min。临用时加热使培养基熔化，冷却至45℃~50℃时使用。A.1.2菌落选择用接种针或接种环随机挑取5个菌落。A.1.4菌落形态在肠球菌选择性培养基(胆汁七叶苷叠氮钠琼脂)上菌落生长形态特征为：带有棕紫色环的黑色或A.2生理生化特征屎肠球菌生理生化特征见表A.1。7GB7300.503—2023表A.1屎肠球菌生理生化特征试验项目结果十十0.04%碲酸盐一0.02%叠氮化钠十碳水化合物十七叶苷十丙酮酸—L-阿拉伯糖十注：“十”表示为90%以上的菌株为阳性反应；“一”表示90%以上菌株为阴性反应。A.3分子生物学鉴定采用核酸序列分析法对菌株rRNA基因中16SrRNA全基因序列进行分析，与GenBank等国际核酸序列数据库中模式菌株ATCC19434的16SrRNA基因序列进行同源性比较，序列差异小于1%,则判定该菌株为屎肠球菌(Enterococcusfaecium)。8B.1试剂B.1.1.1成分吐温80pHB.1.2生理盐水B.1.2.1成分将氯化钠加入蒸馏水中，搅拌溶解，分装，