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第3章基因工程 第2节基因工程的基本操作程序[基础检查]1.(2024·普宁)下列关于基因工程的叙述中,正确的是()①基因工程打破了物种与物种之间的界限②基因治疗是基因工程技术的应用③载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞④所须要的工具酶有限制性内切核酸酶、DNA连接酶和运载体⑤常运用的运载体有大肠杆菌、质粒和动植物病毒等A.②③⑤B.①②③C.①②⑤ D.①③④解析:基因工程的优点是能定向地变更生物的性状,突破了物种之间的生理隔离界限,可用于基因治疗;载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞;运载体不是工具酶;常运用的运载体是质粒、噬菌体和动植物病毒等,大肠杆菌不能作为运载体。答案:B2.下列获得目的基因的方法中须要模板链的是 ()①从基因文库中获得目的基因②利用PCR扩增目的基因③逆转录④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成A.①② B.②③ C.③④ D.①③解析:PCR的原理是DNA半保留复制,即将双链DNA之间的氢键打开,变成单链DNA,作为反应的模板,②须要;逆转录则是以目的基因转录出的mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,先形成互补的单链DNA,再合成双链DNA,③须要;①④则均不须要模板。答案:B3.(2024·东莞)PCR是一项体外扩增DNA的技术,需在反应溶液中添加模板、原料、酶等物质,通过加热(90℃以上)使模板DNA解旋,冷却后在肯定温度(72℃左右)下利用DNA聚合酶合成子代脱氧核苷酸链,如此循环往复,可使特定DNA片段以指数形式扩增。与体内DNA复制相比,有关PCR技术叙述错误的是 ()A.以DNA分子的一条链作为模板B.添加的DNA聚合酶热稳定性较高C.反应溶液中无须额外添加解旋酶D.新合成的DNA分子会作为复制模板解析:PCR的原理是DNA复制,以DNA分子的两条链分别作为模板。答案:A4.(2024·佛山)实时荧光RT-PCR技术可快速检测新型冠状病毒的核酸,为疫情防控供应了有力保障。检测原理如下图所示,探针是含荧光基团并有特定序列的DNA单链。下列说法错误的是 ()病毒RNA单链DNA杂交DNADNA(发出荧光)A.逆转录和杂交DNA扩增所需的原料相同B.逆转录、扩增和分子杂交中碱基配对状况相同C.病毒RNA的遗传信息通过逆转录传递给单链DNAD.逆转录和杂交DNA扩增所需酶种类不同解析:逆转录和杂交DNA扩增的产物都是DNA,故所需的原料都是脱氧核苷酸;逆转录碱基配对原则是U—A、A—T、C—G、G—C,扩增和分子杂交中碱基配对原则是T—A、A—T、C—G、G—C;病毒RNA的遗传信息传递给单链DNA,该过程叫逆转录;逆转录须要逆转录酶,杂交DNA扩增所需酶是DNA聚合酶。答案:B5.将目的基因导入大肠杆菌细胞和小鼠受精卵,常用的方法分别是 ()A.显微注射,农杆菌转化法B.农杆菌转化法,花粉管通道法C.Ca2+转化法,显微注射D.基因枪法,显微注射解析:大肠杆菌作为受体细胞,一般用Ca2+处理,使其处于一种能汲取四周环境中DNA分子的生理状态;对于动物细胞来说,常用的方法是显微注射。答案:C6.下图为基因工程的部分过程示意图,甲~丁代表各不同阶段参加的成分。下列叙述正确的是 ()A.甲可以是细菌的质粒B.乙是某种激素分子C.丙可以是植物的RNA分子D.丁为抗体分子解析:甲、乙、丙、丁可分别表示质粒、限制酶、目的基因、DNA连接酶。答案:A7.(2024·广东)下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述,正确的是 ()A.表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA逆转录获得B.表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原(起)点C.借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来D.启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用解析:人肝细胞中胰岛素基因不表达,因而不存在胰岛素mRNA;复制原点是基因表达载体复制的起点,而胰岛素基因表达的起点是启动子;借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来;启动子与RNA聚合酶结合启动转录过程,终止密码子是翻译的终止信号。答案:C8.下列技术依据碱基互补配对原理的是()①检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译产生蛋白质④通过视察害虫吃棉叶是否死亡推断棉花是否被给予了抗虫特性A.①②③④ B.①②C.①②④ D.①②③解析:检测目的基因是否翻译产生蛋白质采纳抗原—抗体杂交,③不符合题意;通过用棉叶饲喂害虫推断棉花是否被给予了抗虫特性,属于个体水平的检测,④不符合题意。答案:B9.利用外源基因在受体细胞中表达,可生产人类所须要的产品。下列能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是 ()A.棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因B.大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNAC.山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列D.酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白解析:基因表达的产物是蛋白质,因此,只有在受体细胞中检测或提取到了相应蛋白质才能证明目的基因在受体细胞中完成了表达。答案:D10.(2024·佛山)新型冠状病毒由RNA与蛋白质等成分构成。在新冠肺炎疫情防控中,通过核酸检测可快速精确地发觉人群中的传染源,所用的检测原理或方法是 ()A.核酸易与一些碱性染料结合产生颜色反应,即可确定有新型冠状病毒B.用水解法处理采样,因变量是测定能否产生基本单位核糖核苷酸C.用同位素标记新型冠状病毒的RNA或蛋白质,能鉴别遗传物质D.用有特异性碱基序列的荧光探针进行检测,测定荧光产生的状况解析:碱性染料可以鉴别核酸,但不能精确推断是否为新型冠状病毒的核酸;即使测定出水解产物中含有核糖核苷酸,也只能说明其含有RNA,但不能确定是否为新型冠状病毒的RNA;用同位素标记新型冠状病毒的RNA或蛋白质,可以确定新型冠状病毒的遗传物质,但不能在人群中确定个体是否被新型冠状病毒感染;不同核酸的碱基排列依次不同,因此用有特异性碱基序列的荧光探针进行检测,利用碱基互补配对的原则测定荧光产生的状况,可以用于检测人群中的传染源。答案:D11.下图为某种质粒载体的简图,小箭头所指部位分别为限制酶EcoRⅠ、BamHⅠ的切割位点,AmpR为氨苄青霉素抗性基因,TetR为四环素抗性基因,P为启动子,T为终止子,ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的切割位点。请分析回答下列问题。(1)将含有目的基因的DNA片段与质粒分别用EcoRⅠ切割,产物用DNA连接酶进行连接后,其中由两个DNA片段连接形成的产物有、、三种。
(2)在上述试验中,为了防止目的基因和质粒用限制酶切割后产生的末端发生随意连接,应选用的限制酶是。
解析:(1)将含有目的基因的DNA片段与质粒分别用EcoRⅠ切割后,所产生的黏性末端相同,用DNA连接酶处理后,不同的片段随机结合,其中由两个DNA片段连接可形成三种不同的连接物,即目的基因—质粒连接物、质粒—质粒连接物、目的基因—目的基因连接物。(2)由图示和题干信息可知,同时运用EcoRⅠ和BamHⅠ可有效防止末端随意连接的发生。答案:(1)目的基因—质粒连接物质粒—质粒连接物目的基因—目的基因连接物(2)EcoRⅠ和BamHⅠ[拓展应用]12.农杆菌中含有一个大型的Ti质粒(如下图所示),在侵染植物细胞的过程中,其中的T-DNA片段可以转入植物的基因组。若想用基因工程技术通过农杆菌向某种植物中导入抗旱基因,下列分析错误的是 ()A.若用Ti质粒作为抗旱基因的载体,目的基因的插入位置应当在T-DNA片段内,且要保证复制原点和用于转移T-DNA的基因片段不被破坏B.将重组Ti质粒导入农杆菌中时,可以用Ca2+处理农杆菌C.转基因抗旱植物培育是否胜利,最简洁的检测方法是看该植物是否具有抗旱性状D.若能够在植物细胞中检测到抗旱基因,则说明该基因工程项目获得胜利解析:若用Ti质粒作为抗旱基因的载体,目的基因的插入位置应当在T-DNA片段内,且要保证复制原点和用于转移T-DNA的基因片段不被破坏,否则不会胜利,A项正确;将重组Ti质粒导入农杆菌中时,可以用Ca2+处理农杆菌,使农杆菌处于易于汲取四周DNA分子的状态,便于完成转化,B项正确;转基因抗旱植物培育是否胜利,最简洁的检测方法是看该植物是否具有抗旱性状,C项正确;能够在植物细胞中检测到抗旱基因,并能胜利表达出抗旱性状,则说明基因工程项目获得胜利,D项错误。答案:D13.PCR一般要经过30多次循环,从其次次循环起先,上一次循环的产物也作为模板参加反应,由引物Ⅰ延长而成的DNA单链作模板时将 ()A.仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延长B.与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延长C.同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链的延长D.无须与引物结合,在酶的作用下从头合成子链解析:当由引物Ⅰ延长而成的DNA单链作模板时,此单链引物端为5'端,因此与它互补的子链应从另一端起先合成,即与引物Ⅱ结合延长DNA子链。答案:B14.某线性DNA分子含有5000个碱基对(bp),先用限制酶a切割,再把得到的产物用限制酶b切割,得到的DNA片段大小如下表。限制酶a、b的识别序列和切割位点如下图所示。下列有关说法正确的是 ()酶a切割产物(bp)酶b再次切割产物(bp)2100,1400,1000,5001900,200,800,600,1000,500A.该DNA分子中,酶a与酶b分别识别了3个和2个序列B.酶a与酶b切出的黏性末端不能相互连接C.酶a与酶b切断的化学键不相同D.若酶a切割与该DNA序列相同的质粒,得到的切割产物为4种解析:酶a切完有4个不同的片段,识别了3个序列,而酶b只切了2100和1400两个片段,则识别了2个序列;酶a与酶b切出的黏性末端相同,用DNA连接酶可以将它们连接起来;限制酶切割的化学键都是磷酸二酯键;质粒是环状DNA分子,与线性DNA相同碱基序列的质粒含有3个酶a的切割位点,则其被酶a切割后可以得到3种切割产物。答案:A15.(2024·东莞)下图是用基因工程技术培育抗棉铃虫的转基因棉花过程,有关该过程叙述错误的是 ()A.抗虫基因的表达产物为蛋白质B.抗虫基因的插入引起的变异属于基因重组C.用Ca2+处理农杆菌利于重组DNA分子的导入D.通过Ti质粒上的抗性基因筛选试管苗解析:抗虫基因的表达包括转录和翻译两个过程,产物是蛋白质;抗虫基因被插入到受体细胞的染色体DNA中,该过程属于基因重组;用Ca2+处理农杆菌会使农杆菌处于简洁汲取外来DNA分子的状态,因此利于重组DNA分子的导入;通过Ti质粒上的抗性基因筛选含有目的基因的受体细胞,而试管苗的筛选须要用个体生物学鉴定的方法,即用虫食用棉花,视察其存活状况,来鉴定棉花幼苗是否具有抗虫特性。答案:D16.(2024·海南)为获得某转基因生物,下图为基因工程操作步骤示意图。请回答下列问题。(1)从基因文库中提取的目的基因通过技术进行扩增。与细胞内同类酶相比,该技术所利用的DNA聚合酶所具有的特点是。
(2)在过程①中,需酶将已切开的载体DNA与目的基因结合成基因表达载体。载体DNA上必须要有标记基因,标记基因的作用是
。过程②中若选用的受体细胞为大肠杆菌,一般需用Ca2+进行处理,其目的是
。
(3)若将病毒外壳蛋白基因导入酵母菌或哺乳动物细胞中,使之表达出病毒外壳蛋白,经纯化后而制得的疫苗可用于生产基因工程疫苗,接种基因工程疫苗比接种灭活减毒的病毒疫苗更平安,从疫苗的结构组成来看,其缘由是
。
解析:(1)通常运用PCR技术对目的基因进行扩增。在PCR技术中应用的关键酶是热稳定DNA聚合酶,其特点是耐高温。(2)DNA连接酶能将已切开的载体DNA与目的基因连接起来形成磷酸二酯键;标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来;由于未处理的大肠杆菌汲取四周环境中DNA分子的实力较弱,所以常用Ca2+处理大肠杆菌,使大肠杆菌处于简洁汲取四周环境中DNA分子的生理状态。(3)基因工程疫苗不含有遗传物质,但可以引发机体发生特异性免疫反应形成抗体和记忆细胞,由于其不增殖和感染人体,所以比灭活疫苗平安性更高。答案:(1)PCR耐高温(2)DNA连接鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来使大肠杆菌处于简洁汲取四周环境中DNA分子的生理状态(3)基因工程疫苗仅具有病毒外壳蛋白,不具有遗传物质,不会出现病毒增殖和感染探究实践课:DNA片段的扩增及电泳鉴定一、试验目的1.了解PCR和电泳鉴定的基本原理。2.尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。二、试验原理1.解旋。PCR利用了DNA的热变性原理,通过调整温度来限制DNA双链的解聚与结合。2.鉴定。(1)DNA分子具有可解离的基团,在肯定的pH下,这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下,这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动(即电泳)。(2)PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。(3)凝胶中的DNA分子通过染色,可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。三、试验材料PCR仪、微量离心管、微量移液器、一次性吸液枪头、电泳装置、4种脱氧核苷酸的等量混合液、2种引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、扩增缓冲液、无菌水、电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液、琼脂糖和核酸染料等。四、探究过程1.DNA片段的扩增。打算:用微量移液器依据PCR反应体系的配方或PCR试剂盒的说明书,在微量离心管中依次加入各组分离心:待全部的组分都加入后,盖严离心管的盖子。将微量离心管放入离心机里,离心约10s,使反应液集中在管的底部扩增:设置好PCR仪的循环程序,将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中进行反应2.电泳鉴定。配制琼脂糖溶液:依据待分别DNA片段的大小,用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液,一般配制质量分数为0.8%~1.2%的琼脂糖溶液,加热至琼脂糖熔化。稍冷却后,加入适量的核酸染料混匀制备琼脂糖凝胶:将温热的琼脂糖溶液快速倒入模具,并插入合适大小的梳子,以形成加样孔填充电泳槽:待凝胶溶液完全凝固,当心拔出梳子,取出凝胶放入电泳槽内,并将电泳缓冲液加入电泳槽中,电泳缓冲液没过凝胶1mm为宜加PCR产物:将扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液(内含指示剂)混合,再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。留一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物电泳:接通电源,依据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压,一般为1~5V/cm,待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时,停止电泳结果分析:取出凝胶置于紫外灯下视察和照相五、试验操作1.操作提示。(1)为避开外源DNA等因素的污染,PCR试验中运用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在运用前必需进行高压灭菌处理。(2)试验用到的酶和缓冲液应分装成小份,并在-20℃储存。运用前,将所需试剂从冰箱中拿出,放在冰块上缓慢溶化。(3)在向微量离心管中添加反应组分时,每吸取一种试剂后,移液器上的枪头都必需更换。(4)待凝胶溶液完全凝固(一般须要20~30min)才能拔出梳子,方向肯定要垂直向上,不要弄坏加样孔。(5)凝胶放入电泳槽后,将电泳缓冲液加入电泳槽时应确保加样孔内充溢电泳缓冲液且没有气泡,电泳缓冲液没过凝胶1mm为宜。(6)本试验部分试剂对人体有害,操作时肯定要穿好试验服、戴好口罩和手套。2.试验报告。试验时间某年某月某日。试验地点试验室。试验环境常温、常压等。试验结果试验记录试验结论PCR后,将扩增片段进行琼脂糖凝胶电泳鉴定,显示片段大约为××bp,与预期大小一样,表明DNA片段扩增胜利。试验反思胜利之处微量移液器运用规范,PCR反应体系配比合理。不足之处个别加样孔内有微量气泡,导致加样时有微量样品飘出,但不影响试验结果。3.试验拓展。你进行电泳鉴定的结果是几条条带?假如不止一条条带,请分析产生这个结果的可能缘由。提示:假如扩增结果不止一条条带,可能的缘由有引物设计不合理,它们与非目的序列有同源性或简洁聚合形成二聚体;退火温度过低;DNA聚合酶的质量不好等。试验评价1.PCR限制DNA的解聚与结合是利用了DNA的 ()A.特异性B.稳定性C.热变性 D.多样性解析:DNA分子在超过90℃的温度条件下变性,双链解开成单链;当温度缓慢降低时,又能重新结合形成双链。因此,PCR限制DNA的解聚与结合是利用了DNA的热变性。答案:C2.运用PCR仪的详细试验操作依次应为 ()①设计好PCR仪的循环程序②按配方打算好各组分③用微量移液器向微量离心管中依次加入各组分④进行PCR反应⑤离心,使反应液集中在离心管底部A.②③⑤④① B.①⑤③②④C.②③⑤①④ D.④②⑤③①解析:PCR反应的操作步骤一般分为打算(包括将配方所需各组分放于试验台上)→移液→混合→离心→反应。因PCR仪是一种能自动限制温度的仪器,设计好循环程序就可以进行反应了。答案:C3.下图表示PCR扩增的产物,则它是哪次循环的产物? ()A.第一次循环 B.其次次循环C.第三次循环 D.第四次循环解析:在PCR反应中以引物为标记,第一次循环时,以加入的DNA为模板,两条DNA链可分别由引物Ⅰ和引物Ⅱ与其结合,并在DNA聚合酶的作用下延长,所以,形成的每个子代DNA中只有一种引物。从其次次循环起先,第一次产生的DNA分子又可作为模板参加反应,形成的DNA分子中,只有两个仅一端含有引物,其他DNA分子两端都含有引物。答案:A4.下图为DNA变性和复性示意图,下列相关说法正确的是 ()A.向左的过程为加热(90~100℃)变性的过程B.向右的过程是DNA双链快速制冷复性C.变性与生物体内的解旋过程的实质相同D.图中左侧DNA片段共有4个游离的磷酸基团、4个3'端解析:向右的过程为加热(90~100℃)变性的过程,即高温变性,使DNA解旋,A项错误;向左的过程是DNA双链缓慢降温复性,B项错误;DNA体外的变性和体内的解旋,其实质是相同的,都是使氢键断裂,DNA双螺旋打开,只是体内解旋须要解旋酶,体外变性须要高温条件,C项正确;由于DNA双链是反向平行的,所以图中DNA双链片段共有2个游离的磷酸基团、2个3'端,D项错误。答案:C5.在PCR扩增DNA的试验中,依据设计,一分子DNA经30次循环后,应得到约230个DNA分子,但结果只有约210个DNA分子。出现该现象的缘由可能是 ()①循环次数不够②TaqDNA聚合酶活力不够或其活性受到抑制③引物不能与亲链结合④系统设计欠妥A.①②③ B.①②④C.①③④ D.②③④解析:①循环次数过少,会导致产物的量比预期的少;②TaqDNA聚合酶活力不够或其活性受到抑制,会导致扩增效率低,得到的产物比预期的少;③假如引物设计不合理,则无法进行扩增;④PCR仪的系统设置不妥,将达不到预期的效果。答案:B6.下列有关PCR试验操作的叙述,错误的是 ()A.在向微量离心管中添加各种试剂时,只须要一个枪头B.离心管的盖子肯定要盖严C.用手指轻弹离心管侧壁D.离心的目的是使反应液集中在离心管的底部解析:在向微量离心管中添加反应组分时,每吸取一种试剂后,移液器上的枪头都必需更换,以确保试验的精确性;离心管的盖子需盖严,目的是防止试验中外源DNA的污染;用手指轻弹离心管侧壁,目的是使反应液混合匀称;离心的目的是使反应液集中在离心管的底部,提高反应效果。答案:A7.若用XhoⅠ和SalⅠ两种限制性内切核酸酶分别处理同一DNA片段,酶切位点及酶切产物分别结果如图。下列叙述错误的是 ()A.图中两种酶识别的核苷酸序列不同B.图中酶切产物可用于构建重组DNAC.泳道①中是用SalⅠ处理得到的酶切产物D.图中被酶切的DNA片段是单链DNA解析:限制性内切核酸酶可以识别特定的脱氧核苷酸序列,不同的酶能识别不同的核苷酸序列;同种限制酶分别切割载体和目的基因,再用DNA连接酶进行连接,目的基因和运载体结合,构成重组DNA;SalⅠ将DNA片段切成4段,XhoⅠ将DNA片段切成3段,依据电泳结果可知泳道①为SalⅠ,泳道②为XhoⅠ;限制酶切割双链DNA。答案:D8.(2024·天津)下列有关电泳的叙述,错误的是 ()A.电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B.待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率C.进行电泳时,带电粒子会向着与其所带电荷相同的电极移动D.PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定解析:电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程;待测样品中各种分子的构象、大小及带电性质的差异等都会影响其在电泳中的迁移速率;由于同性相斥、异性相吸,带电粒子会向着与其所带电荷相反的电极移动;PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。答案:C9.(2024·辽宁)染色质是由肯定长度的核小体为基本单位构成的。将大鼠肝细胞中分别出的染色质用非特异性核酸酶水解后去除染色质蛋白,对得到的DNA片段进行凝胶电泳,结果如图所示。若先将染色质中的蛋白质去掉后用同样的非特异性核酸酶处理,则得到随机长度的DNA片段。据此分析,下列有关叙述错误的是 ()A.凝胶中的DNA分子通过染色,可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来B.染色质中的蛋白质可能对DNA具有爱护作用C.构成核小体的基本单位是脱氧核糖核苷酸D.在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶浓度、DNA分子的大小和构象等有关解析:凝胶中的DNA分子经染色后,对波长为300nm的紫外光汲取性强,可在波长为300nm的紫外灯下被检测出来;由图可知,染色质用核酸酶处理后,得到的是部分水解的染色质,但若先将染色质中的蛋白质去掉后用核酸酶处理,则得到随机长度的DNA片段,说明染色质中的蛋白质可能对DNA具有爱护作用;染色质是由肯定长度的核小体为基本单位构成的,核小体的组成成分是蛋白质和DNA,其基本单位是脱氧核糖核苷酸和氨基酸;在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶浓度、DNA分子的大小和构象等有关。答案:C10.现有一长度为3000碱基对(bp)的线性DNA分子,用限制性内切核酸酶酶切后,进行凝胶电泳,使降解产物分开。用酶H单独酶切,结果如图1。用酶B单独酶切,结果如图2。用酶H和酶B同时酶切,结果如图3。该DNA分子的结构及其酶切图谱是 ()A.B.C.D.解析:据图1、图2分析,该线性DNA分子上有一个酶H的切割位点
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