SNP标记法鉴定油莎豆种质资源、品种和纯度技术规程

1SNP标记法鉴定油莎豆种质资源、品种和纯度技术规程GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样GB/T3543.4农作物种子检验规程3.1SNP标记singlenucleotide3.2种质资源和品种鉴定中优先选用的一套SNP引物，其3.3品种在DNA分子标记基因分型方面一致的程度，用供检样品中本品种2从样品中随机抽取10粒块茎发苗。分单株剪取0.1g幼苗叶片用液氮研磨成粉末。将研磨粉末转入2mL离心管，加入0.7mLCTAB提取缓冲液充分混匀。在55℃~65℃恒浴1h。加入0.7mL氯仿：异戊醇（24:1），上下轻摇5min。10000×g，室温下离心10min。取上清液，加入上清液三分之冷异丙醇，上下轻摇5min，-20℃冰箱放置30min。10000×g，4℃离心10min。注：以上为推荐用于种质资源和品种鉴定的DNA提取方法，其他能够达到PCR扩增质量要求的DNA提取方法都适用于4.2PCR扩增72℃延伸45s，30个循环，72℃10m4.3基因分型检测），4,4数据分析与判定——差异位点数≥3，判定为不同品种；对利用附录A中73组引物仍未检测到≥3个差异位点数的样品，必要时可增加筛选引物进34AACATGTCCCGGACTTTGCTAACTGCAGATGGGAGCATTAGAATCATTCCACAACTGGACTTTGACCAAATCCACAAAAGCTGAGTCCAATTGGGAGTTTGTTGAAATCAAGTGAGCAAGGCTACATCGTCCTCGTCGTAGATCAGTGAGAGAACTTTGCCTTACCATTAACATCTCGATCAGGGGTAGATGGTGAATTTAGATGCCGACCATACACAACATCATTGCAAGCAGAAACCGCTGAGAACTGGTACACAGAAAGAGCTCCCAGAAGCAAAAGGAAAACAGCCATCTGCAGACCCAATACCATTACGCAGAAGAAATGGGTCTAGCAGAAACCAATGGATGGATGAGGAAAGAACAAGCACAATCATCCGACCTCTAGTCCAGCGTTTATTATGCTCACTTCAATATGCGGTGAGGAT5AGATCATGGCAGAGTGGCTTTAACCGGACTAAAATAAGGGCAGGGAAGGAAAGAGTGAACATTTGTTCTTTACTCAGGCCTATGAACACTACGCATTGTGCAATTAGGGAGGAAGCCTGTCAAAGAGTCGGTGGTCTCTCTCTCAAATGTAAGCTTTTGACAAACCAGATATCCCTGACTCGTTCACATGCATGCAGAAGATGATGAGAGGAAATGCAGCTTTGCTATGATCATATTGTGATGGCAGCTGCAGGAGGAAACGTGATGACATTAACACCTCCAAGAGATCCACTTCAGTCGATAAAACAAGAGCATGGGGAATGTATCTGCACAA6AATCCAAATCTACTGCAGCGAAACTGTGATTCGATCTGTCACAATCCAAATCTACTGCAGCGAAAGAACTGTGATTCGATCTGTCACATGGGGAATGTATCTGCACAAAATAACCCATCCGAACCTAGCATTATTAGGGTTGTTGCTTGCTGGATACCACCATTGGAACCATACATCCTGAGGAATGGTTCTGACACTGAAGTGCCTCCAAACACTAAGCCAAATAGTGCTCGATCTGAAGGTTGAGAGACGTTTGAACAGTGGAGAGCGCCTTTTTATA7TCAATGTTATTTTCTGATATGTTCTCGGGCTAGTGAAACTTATGCAACGGTGGACCTAACTACATGATATATT[T/C]AGATAAGGGTTAAGCTAATTGAACCCCAAACTTTCCCCGGACTTGTACCCCGCAAAATTTCCATAATTCTCCAAAAAAGAAATTGTGCAAAGATCAATAATTTTATTTGAAATTAAGCATTTCGCTAAAAAAAAAA[A/T]ACAAATAATTTTTTTTTTTTGATTCATTGTGCTAATTATATATACTTCCAGAAAATAACACCACGAGTATCTAAACAGCTCGGAGGCTACACAGAAAAGCCGGCTAAATCTGTTTCCATGGAGAGATACAACA[G/A]ATCTTTAGCCAAGGTACTTACTTTCTTTTGTATAAACAACACTCGGATCATTGAAGTGAATCTACATAAATA8TCTATGTGCTGCAGTAAACTGAAATCTGGGACCCAGTCAAATACTCAATACAGACTGAGAATGTAACAA[T/C]TAGATCTGATTGTGTAAAATTGATCTGAGTTTGTACTATAGATGCTATGGACAGATATTCTATGGAAGCATCTGATCGTACGATATACTTGAAATTTAGAGAACGTGGTAACTCTGGGATAGCACATCAGCTTCC[A/G]TAATATTTAGTTCTCTAAGACCAAGGAGACTGTAGCCGGTAATGACTTTAGAGATTTTGCATTTTG8TCCAATTGAAGCCATCGCTGGTCGAGGCATTTACTATGCTATTCGCTGACCGGAAGGCTCTGCAAAGTG[T/C]GCCACTGGAGATGGAGATAACTCGGAAGATCGTTGTGAATTGAGGTTCATTTGTGCCTGAGCAGTTGTCATCCCTCCATATCCTCTGCAGCGCTGCACTGTGTAGGGCGAAATTTGAACTCATCTTGAGATCTGT[G/T]CTTGCTCAATCTTGAGATGATCTAACGGTTCACGCGCTACACAGTGCAGCGCTACAGAGGATGAG2TGAAATTTTAAGCTTCATCAGAAATTATTGTACCCCCTGGTCATGAGTCTAGCTAGCGTTCCTGCAAACATGT[T/G]AGCCAAAAAATGTTAACCCATGATCAATATATGCAGATCTAATTTTAGTTTTGCCGGTAAACGTAGAT2CTGTGAAGGAACTGCAGGATGAGAAGAATTAAGCAGCCAGATGGTATAAACGTACTGGCCAGACTTGAAACAG[C/T]GCTCACCCCATATGCAAATTAAACACCATTATTTGATATTGATTTTTCTGGACTTCTCATTCAAA5GTTCCACCTTATCTGCATTTGTCAGGTCATTGAATTTTTCCTCGAATGCTGAGGAAACGACTCGGGCTG[G/T]AAGAATTTTAGCAGGCTGAACATCTCGCCAAGGTTGTTCTGCAGGGGTGTCCCCGTCAATAAAACCCGC0GGCAGGGGATTAGGAAACTCGACGAATGGGTATTCGATTGGACTATTGGTATGAATGAGCAACACATT[G/GGA]GAAAGAAGAATATTCATACACTGCAAATCTAGAGTTCACACTTGATAGTTGATACAGATGTAAAA83TCCCCGCGGCTAGTTTGCAGCGCCAAGGTGCCCGTCCTTCACCATACACAACAAAGCAAGCTCCTTGCA[T/C]GACGTCCACCTCTAGGATCCCAGCAACGCACATCGTTGCTCCGCAAAGCAGTCCCTGCCACCTCGTCAAGTGATGCCAGTATAGGAACAGTATGTTCCATGAATACAAGTGATTCGTTTTGTTGTTATCTGCATTGTAA[C/A]GAAGGCGTTCTTAATTAGTAATTCTCGTATAAGAATATAATTACAAAAATTAAGATTTGTGAAAC3AGTGCGAGATGTACTCTTGCGTGCACTCCTCTGACATGCCACAGCAGGTGCACCCTCCACTTCTGATAT[A/G]GAGCTGAGTTTTGTCGACTCCTTCGCCTCCTTGCTCAAAAGAGAGGTCGGAAAGAGCCCGATGACTGAGAAGAGTTTAACGGTAGATTTACGCACCGCTGTTCAATGGTCAAGGTGCTGATTGAGCGGAGAGG[C/T]GGTGAGCTCACCGAGGCTCTTCAGAGAACCCCGACTGGAATTCTCAAGAAGCGCAGGGCACTATT1TCTTCAGGCAGCTGACACAGTCCCAAATCGACTACATGAATGACATCAGGAGCTGATCTACAACTACTG[T/C]TATGACACCAAGAGATTCAACGGCGCCATGAGTGCTACCTCCCTGCTTACTGATAAAGGCATGGT2CTTTATACCCTTTACAGCTTGTTCCTAATTAAATGAACTTTACCGATTCGATATCTATTCGTCTCTTAG[C/T]TGTCCCCAATTACAACCTTCCCTCTCCCCAATTTCTTTTATCTATATTATTTAAATGGAATAATTCAACAGCAACTATGCATGTGTGTTCTGTTCTCTTAATTAATTAATTAATGCTAATAATATAATATAATCTAC[T/C]CTAGCTAGCAAGCTGATGGAGCTGTTCAACCTTTTTGAACATAACAGCTAGGCCTAGGCCTAGGCATGGC6CAGAATTTTTTTCTTCTCATTTTGTTTTGGGAACATTTTCTTTTCCACCCTTTTAAAATTAAATGCACT[C/A]AAGTTCTCCTCTGAAACTTTCTAAAGCTGAAATTTCTTGACCAGATATAATTCAAACATAATAGC8CTAGTAACTTAATTAATCTTCAACATTTCAAGAAAACCGGGGAAAGCAAAATTTCACTGAATGATCCAATTGC[C/T]ATGCAAGTAACTAACACCTTCGAGCAACTGAGCCGCTTAACTTCGCTCGAGCTGAAGGGCTTAAT3GATTGGATTTCTGCAGGTAAACTGTTACAATCATCACCATCCGAGTCAGCTTTACCCATTTGCCTGGCC[G/A]GCAATGGACCGATATTAATGAATTTGCATCTGATTTGCTGAAAACCTTGACTTATGTTGAAAAGATGCGAAAGCGCTCCTACATGTTTTCCCTTTGACATTCGATTTCGGTCCCACCTTGCAAACCAAAGTCCACAACGCA[G/A]TCGCACCGTTGTACGAACCTCTGACCTCAACCACGAGCAGCAGCTCGCTCTCCTCCTCGACTCCGAGCTTGTGGCTATATATTTAATTAGGAGCTCCCCGGGAGCTTTGGCTGTCTGGAAAGAAAACCGCAGGC[A/G]TTTGAAATATCAACTTCTCTTCTTTTTCACTTGTATGGTGTTTAACTCCTGCTGAAGGCACAATGCTAG2CGAAAACACGCGGCAATTTCAAAATCGAGTTTGCTCGGCTAACCCCATCCAGAGCACATTCTTCTTCTTTCAG[C/G]CCATCATTCCTTGCTTCCTTAACTGCAGTTGCATTACGTAGACTTGTTGTCAAAGATTTTCCACGACAT91TCAGGATTCGAAAGCTCAGATCATGTCAAA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