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文档简介
维生素B12的测定
维生素测定方法化学分析法比色法分光光度法(紫外和荧光)层析法色谱法微生物法维生素B12的测定参与制造骨髓红细胞,防止恶性贫血,防止大脑神经受到破坏。自然界中的维生素B12都是微生物合成的,高等动植物不能制造维生素B12。需要一种肠道分泌物(内源因子)帮助才能被吸收的唯一的一种维生素。当人体肠胃异常,缺乏这种内源因子,即使膳食中来源充足也会患恶性贫血。维生素B12的测定又称钴胺素,是含钴的B族维生素之一。在pH小于3或大于8的强酸或碱性溶液中极易分解,遇强光或紫外线易被破坏。在紫外区278nm、361nm与550nm波长处有最大吸收。在361nm波长处的吸收峰干扰因素少,通常以361nm作为测定波长。维生素B12的测定维生素B12的测定方法:
微生物法、比色法、紫外分光光度法、离子交换层析法、原子吸收分光光度法和高效液相色谱法。紫外分光光度法是较常见的方法。维生素B12的测定一、测定原理
维生素B12在紫外区278nm(纳米)、361nm与550nm波长处有最大吸收,在361nm波长处的吸收峰干扰因素少,通常以361nm作为测定波长,测定待测溶液的吸光度,用吸光度计算含量。紫外分光光度法测定维生素B12含量722N型紫外-可见分光光度计,10mL容量瓶,5mL吸量管;0.1g/L维生素B12水溶液,维生素B12注射液(市售品)。二、试剂和材料:紫外分光光度法测定维生素B12含量三、操作步骤1、比色皿的校正将2只比色皿编号标记,装入蒸馏水,在361nm处比较2只比色皿的透光率。以透光率最大的比色皿为100%透光,测定另一只比色皿的透光率,换算成吸光度,作为它的校正值A0。测定溶液时,以那只透光率最大的比色皿作空白,另一只比色皿装待测溶液,测定吸光度。紫外分光光度法测定维生素B12含量2、测定吸光度准确吸取0.50mL维生素B12注射液于10mL容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度线,摇匀,得到样品稀释液。打开722N型紫外-可见分光光度计,预热30min。将样品稀释液置于1cm石英比色皿中,以蒸馏水作为空白,在361nm波长条件下测定吸光度。计算维生素B12标示量的百分含量。紫外分光光度法测定维生素B12含量四、结果计算紫外分光光度法测定维生素B12含量五、注意事项称取样品的质量应使样品稀释液中维生素B12的浓度小于0.03mg/mL。维生素B12在pH小于3或大于8时极易分解,在溶液的pH为4.5-5时最为稳定,测定时
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