DB54T-青稞中恩镰孢毒素检测技术规范

Q/LB.□XXXXX-XXXX目次TOC\o"1-1"\h\t"标准文件_一级条标题,2,标准文件_附录一级条标题,2,"1范围 12规范性引用文件 13方法提要 14试剂和材料 15仪器和设备 26试样制备与保存 27测定步骤 28回收率和精密度 3附录A（资料性）标准品基本信息 5附录B（资料性）参考质谱条件 6附录C（资料性）标准物质多反应监测色谱图 7前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会提出并归口。本文件起草单位：本文件主要起草人：青稞中恩镰孢毒素检测技术规范范围本文件规定了青稞中恩镰孢毒素残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法的方法提要、试剂和材料、仪器和设备、试样制备与保存、测定步骤、回收率和精密度。本文件适用于青稞中恩镰孢毒素A、恩镰孢毒素A1、恩镰孢毒素B、恩镰孢毒素B1残留量的测定和确证。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法方法提要试样中的恩镰孢毒素A、恩镰孢毒素A1、恩镰孢毒素B、恩镰孢毒素B1通过乙腈-水-甲酸提取，经QuEChERS提取包净化后，采用液相色谱-质谱/质谱仪检测，外标法定量。试剂和材料所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水应符合GB/T6682规定的一级水要求。乙腈、甲酸、甲醇：色谱纯乙腈-水-甲酸溶液：量取19.9mL水和0.1mL甲酸（5.2），加入80mL乙腈，混合均匀。甲酸-水溶液：量取99.5mL水和0.5mL甲酸（5.2），混合均匀。标准品：恩镰孢毒素A纯度≧98.0%、恩镰孢毒素A1纯度≧98.0%、恩镰孢毒素B纯度≧98.0%；恩镰孢毒素B1纯度≧98.0%)标准品也可使用经国家认定的有证标准物质。)。标准品信息参见附录A)标准品也可使用经国家认定的有证标准物质。标准溶液配置标准储备溶液：分别称取一定量的恩镰孢毒素A、恩镰孢毒素A1、恩镰孢毒素B、恩镰孢毒素B1标准品（5.6），用乙腈溶解，配成0.5mg/mL的标准储备液，于-18℃以下避光保存。标准工作溶液：浓度分别为：恩镰孢毒素A1.0μg/mL，恩镰孢毒素A11.0μg/mL，恩镰孢毒素B1.0μg/mL，恩镰孢毒素B11.0μg/mL，于-18℃以下避光保存，保存时间不超过6个月。基质标准工作溶液：移取不同体积的标准工作溶液，用空白样品提取液配成不同浓度的基质标准工作溶液。现用现配。QuEChERS提取包：含有无水硫酸镁4.0g、氯化钠1.0g、柠檬酸钠1.0g、柠檬酸二钠盐0.5g。仪器和设备液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。电子天平：感量0.1mg和0.01g。粉碎机。涡旋振荡器。氮吹仪。高速离心机：10000r/min。离心管：5mL和50mL。试样制备与保存取青稞样品500g，用粉碎机粉碎并通过2.0mm圆孔筛，混匀，装入洁净容器内，密闭并标明标记。试样于4℃以下保存。测定步骤提取与净化称取2g试样（精确至±0.01g）于50mL离心管中，加入20mL乙腈-水-甲酸溶液（5.4），以2500r/min震荡混匀5min。加入QuEChERS提取包（5.11），以2500r/min震荡混匀2min，10000r/min离心5min。取2mL上清液于5mL离心管中，于45℃氮吹至干，加入1mL乙腈-水-甲酸溶液（5.5）溶解，过0.22μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。测定条件液相色谱条件液相色谱条件如下：a)色谱柱：C18柱，柱长100mm，内径2.1mm，粒径2.6μm，或性能相当者。b)流速：0.4mL/minc)柱温：40℃d)进样量：2μLe)流动相：A：甲酸-水（含0.5%甲酸）；流动相B：色谱纯甲醇。梯度洗脱条件见表1。梯度洗脱条件时间，min流动相A，%流动相B，%0.070300.0170305.050506.050507.0703010.07030质谱参考条件质谱参考条件如下：a)离子源：电喷雾离子源；b)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式：多反应监测（MRM）；d)其他参考质谱条件参见附录B。定性测定在相同试验条件下，试样溶液中待测物的保留时间与基质匹配混合标准系列溶液中对应待测物的保留时间偏差应在±2.5%之内，且试样溶液中待测物的定性例子相对丰度与浓度接近的混合级配匹配标准系列溶液中对应待测物的定性例子的相对丰度相比较，若偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度>50>20~50>10~20≦10最大允许偏差±20±25±30±50定量测定根据样液中被测化合物含量情况，选定与样液浓度相近的基质标准工作溶液，样品溶液与基质标准工作溶液中恩镰孢毒素A、恩镰孢毒素A1、恩镰孢毒素B、恩镰孢毒素B1的响应值均应在仪器测定的线性范围内，超过线性范围的稀释后再进样。对基质标准工作溶液和样液等体积参差进样测定，外标法定量。在上述色谱条件和质谱条件下，恩镰孢毒素A、恩镰孢毒素A1、恩镰孢毒素B、恩镰孢毒素B1的参考保留时间及标准品多反应监测（MRM）色谱图参加图C.1、图C.2、图C.3和图C.4。空白试验除不称取试样外，均按上述测定步骤同时开展。结果计算和表述采用外标法定量，用色谱处理器或按式（1）计算被测物的含量。计算结果应扣除空白值。Xi=Ci×式中：Xi—试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；ci—从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每升（μg/L）;V—样液最终定容体积，单位为毫升（mL）;f—稀释因子；mi—最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。试样中测定的恩镰孢毒素乘以换算系数2.5，即得恩镰孢毒素的含量。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。回收率和精密度回收率样品的添加浓度及回收率的实验数据见表3。样品添加浓度及回收率实验数据化合物添加浓度，μg/kg回收率，%恩镰孢毒素A574.1-82.41078.4-81.25075.3-79.2恩镰孢毒素A1585.1-90.31080.3-86.95078.6-80.8恩镰孢毒素B576.1-78.61086.6-91.45087.5-89.3恩镰孢毒素B1583.3-86.71084.9-92.15082.4-86.4精密度在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过这两个测定值算术平均值的15%。

（资料性）

标准品基本信息标准品基本信息中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量恩镰孢毒素AEnniatinA2503-13-1C36H63N3O9681.9恩镰孢毒素A1EnniatinA14530-21-6C35H61N3O9667.8恩镰孢毒素BEnniatinB917-13-5C33H57N3O9639.8恩镰孢毒素B1EnniatinB119914-20-6C34H59N3O9653.8

（资料性）

参考质谱条件气帘气压力（CUR）：30psi（氮气）。电喷雾电压（IS）：5500V。离子源温度（TEM）：600℃。离子源气体1（GAS1）：55psi（氮气）。离子源气体2（GAS2）：60psi（氮气）。其他质谱参数：见表B.1。主要参考质谱参数化合物母离子m/z子离子m/z驻留时间minDPCXPCE/eV恩镰孢毒素A682.60210.3*101001040228.3101001040恩镰孢毒素A1668.60210.4*10841038228.110841038恩镰孢毒素B640.60196.1*10901038214.010901038恩镰孢毒素B1654.50196.1*10881040210.310881040注：表中带*的离子为定量离子。对于不同的质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。

（资料性）

标准物质多反应监测色谱图恩镰孢毒素A的多反应监测（MRM）色谱图见C.1。恩镰孢毒素A的多反应监测（MRM）色谱图（5