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抗虫和耐除草剂玉米Bt11及其衍生品种中华人民共和国农业部发布I农业部2122号公告—14—2014本标准代替农业部869号公告—3—2007《转基因植物及其产品成分检测抗虫和耐除草剂玉米Bt11及其衍生品种定性PCR方法》。本标准与农业部869号公告——修改了定性PCR方法的引物序列(见5.12～5.13,2007年版的5.12);——修改了定性PCR方法的反应体系(见表1,2007年版的表1); ——农业部869号公告—3—2007。1农业部2122号公告—14—2014抗虫和耐除草剂玉米Bt11及其衍生品种定性PCR方法本标准规定了转基因抗虫和耐除草剂玉米Bt11转化体特异性定性PCR检测方法。本标准适用于转基因抗虫和耐除草剂玉米Bt11及其衍生品种，以及制品中Bt11转化体成分的定性PCR检测。GB/T6682分析实验室用水规格农业部1485号公告—4—2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化农业部1861号公告—3——2012转基因植物及其产品成分检测玉米内标准基因定性PCR方法农业部2031号公告—19—-2013转基因植物及其产品成分检测抽样NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求zSSIIb基因zSSIbgene4原理2zSSIIb-F:5'-CTCCCAATCCTTTGAzSSIIb-R:5'-TCGATTTCTCTCTTGGBt11-F:5'-GCCTCGTGATACGCCTBtl1-R:5'-CAAAAATCCAAGAAT37.5.1.2.1每个试样PCR反应设置3次平行。终浓度水10×PCR缓冲液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)总体积“—”表示体积不确定。如果PCR缓冲液中含有氯化镁，则不加氯化镁溶液。根据TagDNA聚合酶的浓度确定其体积，并相应调整水的体积，使反应体系总体积达到25.0μL。基因组DNA,或采用Bt11转化体特异性序列与非转基因玉米基因组相比的拷贝数分数为0.1%~4农业部2122号公告—14—2014增片段是否为目的DNA片段，按照7.8和7.9的规定执行。将回收的PCR产物克隆测序，与转基因抗虫和耐除草剂玉米Bt11转化体特异性序列(参见附录A)进行比对，确定PCR扩增的DNA片段是否为目的DNA片段。期片段大小一致，而阴性对照中仅扩增出玉米内标准基因片段，空白对照8.2.1玉米内标准基因和Bt本标准方法的检出限为1g/kg。51GCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAG

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