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农业部2122号公告—1—2014转基因动物及其产品成分检测猪内标准基因定性PCR方法I农业部2122号公告—1—20141农业部2122号公告—1—2014本标准规定了猪(Susscrofa)内标准基因Linc_CAB的定性PCR检测方法。本标准适用于转基因动物及其产品中猪成分的定性PCRGB/T6682分析实验室用水规格猪Susscrofa哺乳纲(Mammalia)、偶蹄目(Artiodactyla)、猪科(Suidee)、猪属(Sus)、猪种(Susscrof钙结合蛋白基因旁序列(calciumbindingprotein39linking-sequence)。根据猪Linc_CAB基因序列设计特异性引物，对试样进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期的5.310mol/L氢氧化钠溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠(NaOH),溶解后再加水定容至5.4500mmol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0):称取18.6g乙二铵四乙酸二钠(EDTA-Na₂),加5.51mol/L三羟甲基氨基甲烷一盐酸溶液(pH8.0):称取121.1g三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶解于800mL水中，用盐酸(HCl)调pH至8.0,加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条件25.10Tris-饱和酚5.11氯仿/异戊醇(24:1):将氯仿和异戊醇按照24:1的比例配制。体积混合Linc_CAB-F:5'-GCCCATCATAAAAGLinc_CAB-R:5'-CAAGGCCAGGACAT5.20石蜡油37.3.1将消化后的血样裂解液或组织裂解液加入等体积的Tris-饱和酚(5.10),缓慢颠倒混匀107.3.2加入0.5倍体积的Tris-饱和酚和0.5倍体积的氯仿/异戊醇(24:1),缓慢颠倒混匀10min,终浓度水10XPCR缓冲液4终浓度dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)总体积7.4.2

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