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文档简介
农业部2031号公告—8-2013大豆内标准基因定性PCR方法2013-12-04发布2013-12-04实施I本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。1农业部2031号公告—19—2013转基因植物及其产品检测抽样25.12Lectin基因普通PCR引物:lec-1672F:5'-GGGTGAGGATAGGGlec-1881R:5'-GCGATCGAGTAGTGlec-1215F:5'-GCCCTCTACTClec-1332R:5'-GCCCATCTGCAAlec-1269P:5'-AGCTTCGCCGCTTCCTT5.17定性PCR反应试剂盒。6.3荧光定量PCR仪。按NY/T672和农业部2031号公告—19—2013的规定执行。37.5.1.1.1试样PCR反应终浓度水10×PCR缓冲液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)总体积以大豆基因组DNA质量分数为0.1%~1.0%的植物DNA作为阳性对照;以不含大豆基因组47.5.2.1.1每个试样PCR反应设置3次平行。7.5.2.2对照PCR反应以大豆基因组DNA质量分数为0.1%~1.0%的植物DNA作为阳性对照;以不含大豆基因组水10×PCR缓冲液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)总体积“—”表示体积不确定。如果PCR缓冲液中含有氯化镁,则不加氯化镁溶液,根据TaqDNA聚合酶的浓度确定其体积,并相应调整水的体积,使反应体系总体积达到25.0μL。5农业部2031号公告—8—20138.2实时荧光PCR方法8.2.3.1Lectin内标准基因出现典型扩增曲线,且Ct值小于或等于36,表明样品中检测出大豆成分,8.2.3.3Lectin内标准基因出现典型扩增曲线,但Ct值在36~40之间,应进行重复实验。如重复实验结果符合8.2.3.1或8.2.3.2的情况,依照8.2.3.1或8.2.3.2进行判断;如重复实验内标准基因出本标准的普通PCR方法和实时荧光PCR方法的检出限均为0.5g/kg。6农业部2031号公告—8—2013A.1Lectin基因普通PCR扩增产物核苷酸序列(AccessionNo.K00821)1GGGTGAGGATAGGGTTCTCTGCTGCCACGGGACTCG61TGCTTTCTTGGTCTTTTGCTTCCAATTTGC121ATCTTACAAGCTTTGTGTTGCATGAGGCCATCTA181GTAATAAGACGACTCTCACA.2Lectin基因实时荧光PCR扩增产物核苷酸序列(AccessionN
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