T-CVMA 166-2024 小反刍兽疫病毒磁微粒化学发光抗体检测方法

T/CVMA166—2024小反刍兽疫病毒磁微粒化学发光抗体检测方法Magneticparticlechemiluminescencemethodfordetectionofantibodyagainstpestedespetitsruminantsvirus2024-5-23发布2024-5-23实施中国兽医协会发布I12规范性引用文件NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范小反刍兽疫pestedespetits激发液excitationflu24符号和缩略语MES溶液：4-吗啉乙磺酸溶液（4-MorpholineethanesulfonicaMEST溶液：4-吗啉乙磺酸吐温溶液（4-MorpholineEthylsulfonicAcidTweenPBST：磷酸盐吐温溶液（PhosphaNHS溶液：N-羟基丁二酰亚胺溶液（N-hydroxysuccinimidesolution）孵育一段时间洗涤后，加入激发液A和激发液B；在碱性条件下，吖啶酯分子的发射光强度达到最大，通过测量的发光值结果和既定的判定方法判定待测样品7.32℃~8℃冰箱，-20℃冰箱。38.1.1进行静脉无菌采血，不少于2mL。采集静脉血时，每只羊8.1.2将血液室温（15℃~25℃)静置于斜面2h～4h，待血液自然凝固后，然后置高速冷冻离心机8.2.1血清样品若在一周内检测，可置2℃~8℃条件下保存。若超过一周检测，应置于-20℃以下冷8.2.2运输时注意冷藏，采集的血清样品可用冰袋或保温桶加冰密封等方式运输，运45A.1小反刍兽疫病毒重组N蛋白的制备和纯化的滤液，通过Superdex200凝胶柱分子筛进行精细纯化，A.2磁珠微球溶液的制备温（15℃~25℃)透析4h。EDC溶液，摇匀后固定在混匀器上室温（15℃~25℃)反应30min。反A.2.4抗原偶联。将上述磁珠用800液至总体积1mL，摇匀后固定在混匀器上室温（15℃~25℃)反应4h。反应结束后6取500μL小反刍兽疫病毒单克隆抗体（浓度2mg/mL（15℃~25℃)透析4h。取出透析后的抗体溶液，加入洁净玻璃瓶中，再将吖啶酯溶液（浓度5.0mmoL溶液中，避光，室温反应2h。反应后入10%（m/V）赖氨酸封闭，室温反应1h。B.1.5保存加入0.02%Proclin-300混匀后经0.22μm滤器过滤，无菌分装，于2℃~8℃保存。7C.1.1采血室温（15℃~25℃)待血液凝固后，37℃静置2h后，然后2℃~8℃静置1h，将析出的血清转移到离心瓶中，以2,000r/min离心5min，收集上清。将制备的血清混合均匀后，0.22μm滤膜过滤除菌，将血清与冻干保护剂按8量分装，1mL/瓶，冷冻真空干燥，置-70℃用小反刍兽疫病毒活疫苗于每头小反刍兽疫病毒抗体阴性羊的颈部皮下注射，每头免疫1头份。重复免疫四次，每次免疫间隔1个月，最后免疫一次后，无菌采血，用商品化的小反刍兽疫病毒抗体检测室温（15℃~25℃)待血液凝固后，37℃静置2h后，然后2℃~8℃静置1h，将析出的血清转移量分装，1mL/瓶，冷冻真空干燥，置-70℃下保存，标记8称取十二水合磷酸氢二钠72.5g、磷酸二氢钾5g、氯化钠200g、氯化钾5g，加入700mL双蒸水加热搅拌溶解，再加入12.5mL的吐温-20，而后加双蒸水定容至1,000用蒸馏水或去离子水25倍稀释。1份25倍浓缩洗涤液加24份蒸馏水。例如：40mL2量取200mL纯化水，加入37%浓盐酸溶液8.33mL，加入3化水定容至1,000mL。定量分装，2℃~8℃保存。2.5mL，搅拌均匀加纯化水定容至1,000mL。定量分装，2℃~8℃保存。纯化水搅拌溶解，再加纯化水定容至1,000mL，经0.22μm过滤，置2℃~8℃保存。过滤，置2℃~8℃保存。称取10mg的NHS，溶于1mLMES溶液中，临用配制10min内使用。称取10mg的EDC溶于1mLMES溶液中，临用配制10min内使用。），量取800mLPBS（0.01moL/L拌均匀，PBS定容至1,000mL，经0.22μm过滤，置2℃~8℃保存。PBS定容至1,000mL。9扫描配套的试剂盒、对照品、激发液A和激发液B的二维码，将批号和检测方法疫分析仪(Helix-T120或H