GB∕T 39670-2020 宠物饲料中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

B46中华人民共和国国家标准宠物饲料中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法L-2020-12-14发布2021-07-01实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会ⅠGB／T39670—2020本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国南京海关、中华人民共和国淮安海关、江苏海企长城股份有限公司、淮阴师范学院。1GB／T39670—2020宠物饲料中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法本标准规定了宠物饲料中硝基呋喃类代谢物(3-氨基-2-唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲、氨基脲）残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于以动物源性成分为主要原料制成的宠物饲料中硝基呋喃类代谢物(3-氨基-2-唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲、氨基脲）残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3缩略语下列缩略语适用于本文件。AOZ:3-氨基-2-唑酮(3-amino-2-oxalidinone)SEM：氨基脲(semicarbazide)试样经三氯乙酸沉淀蛋白质，游离出硝基呋喃类代谢物，在避光条件下用邻硝基苯甲醛衍生化、乙酸乙酯提取后，用液相色谱-串联质谱仪检测，同位素内标法定量。5试剂或材料除非另有规定外，仅使用分析纯试剂。5.1水：GB/T6682,一级。5.6二甲基亚砜。2GB／T39670—20205.9邻硝基苯甲醛。(5.6)中。现用现配。(5.4),用水定容至1000mL。静置分层后，弃去乙腈层。5.16标准品：AOZ(CAS:80-65-9)、AMOZ(CAS:43056-63-9)、AHD·HCl(CAS:2827-56-7)、SEM·5.18标准储备溶液：分别准确称取适量硝基呋喃类代谢物标准品(5.16),用甲醇(5.5)溶解定容，配制510mL存，有效期为7天。5.21同位素内标储备溶液：分别准确称取适量硝基呋喃类代谢物同位素内标(5.17),用甲醇(5.5)溶解下避光保存，有效期为3个月。5光保存，有效期为7天。6仪器设备6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。6.3水浴恒温振荡器：37℃±1℃。6.4离心机：转速不低于8000r/min。6.5涡旋混匀器。6.6氮吹仪。3GB／T39670—2020径筛，混匀装于密封容器，备用。于密封容器，备用。-18℃8试验步骤54mL558mL8.3标准曲线的制备50mL8.4.1液相色谱参考条件流动相：A：乙腈(5.2),B：乙酸铵缓冲溶液(5.13),梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序时间/minA/%B/%5504GB／T39670—20208.4.2质谱参考条件电离方式：电喷雾电离，正离子模式(ESI+);检测方式：多反应监测(MRM);电喷雾电(IS)压：5500V;离子源温度(TEM):500℃;碰撞室出口电压(CXP):6V。多反应监测(MRM)离子对、驻留时间、去簇电压和碰撞能量见表2。表2硝基呋喃代谢物及内标的多反应监测（MRM）离子对、驻留时间、去簇电压及碰撞能量的参考值被测物名称≈)驻留时间/ms去簇电压(DP)/V碰撞能量(CE)/VAOZ236.0>104.1AMOZAHDSEM209.0>192.2D4-AOZ240.1>134.1D5-AMOZ252.0>134.1212.0>168.1a为定量离子。8.4.3标准系列溶液和试样溶液测定在仪器的最佳条件下，分别取标准系列溶液(8.3)和试样溶液(8.2)上机测定。硝基呋喃类代谢物标准溶液的定量离子色谱图参见附录A。之内。根据表2选择的定性离子对，比较试样谱图中硝基呋喃类代谢物定性离子的相对离子丰度与浓度接近的标准系列溶液中对应的定性离子的相对离子丰度，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的硝基呋喃类代谢物。5GB／T39670—2020表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差%>50>20~50>10~20≤10%±20±25±30±50以硝基呋喃类代谢物的浓度为横坐标，硝基呋喃类代谢物和内标峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线的相关系数应不低于0.99。试样溶液与标准溶液中硝基呋喃类代谢物的响应值均应在仪器检测的线性范围内，如超出范围，应重新试验或将试样溶液和标准系列溶液做相应稀释后重新测定。9试验数据处理计算：式中：A—试样溶液中硝基呋喃类代谢物的峰面积；′sAis—试样溶液中硝基呋喃类代谢物同位素内标的峰面积；As—标准溶液中硝基呋喃类代谢物的峰面积；′测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。10精密度6GB／T39670—2020附录A（资料性附录）硝基呋喃类代谢物标准溶