端粒在皮肤光老化中的作用课件

南京医科大学第一附属医院皮肤科-端粒在皮肤光老化中的作用

-改善皮肤光老化的临床与基础端粒在皮肤光老化中的作用1.研究背景光老化：在内源性老化的基础上加之环境因素（主要为紫外线辐射）的损害而发生的外源性老化，临床上表现为提前出现更加严重的老化表现。

PH端粒与光老化端粒在皮肤光老化中的作用

空白组1UVA组8-MOP+UVA组空白组UVA8-MOP+UVA8-MOP+UVA

照光三个月的小鼠皮肤

光老化皮肤的动物模型观察光损伤作用端粒在皮肤光老化中的作用照光7d后各组细胞超微结构8-MOP+UVA组细胞出现了明显的细胞衰老改变:胞浆中可见较多空泡，细胞核中可见较多絮状物,核仁不清晰，局部出现核膜内褶,核内染色质凝集且分布不均。线粒体肿胀、粗面内质网扩张,脱颗粒，可见较多次级溶酶体。

8000×

8-MOP+UVA组

15000×8000×

UVA组

15000×8000×

8-MOP组

15000×8000×

对照组

15000×端粒在皮肤光老化中的作用端粒结构特点--光损伤易感性：光老化中紫外线引起的基因的氧化应激损伤，大部分情况下发生在鸟嘌呤残基；端粒的重复序列TTAGGG二分之一是鸟嘌呤残基且3’末端也富含鸟嘌呤。-TTAGGG-结构2.端粒与光老化端粒在皮肤光老化中的作用NB-UVB和PUVA：临床上光疗法（治银屑病、白癜风）的主要副作用之一是皮肤易出现光老化外观光老化模型：已联合利用8-MOP+UVA建立小鼠皮肤光老化模型，在此基础上利用人皮肤成纤维细胞经相同处理建立体外光老化模型内源性老化中的端粒缩短机制1.是否参与紫外线辐射引起的光老化？2.光老化进程中光损伤是如何加快端粒缩短的？端粒在皮肤光老化中的作用研究内容——实验流程对照组8-MOP组

or8-MOP+UVAUVA组MTT法检测细胞活性绘制细胞生长抑制曲线流式细胞术检测细胞周期分布透射电镜观察细胞超微结构细胞化学酶法检测β-半乳糖苷酶

处理后24h，48h,72h,7d分光光度法检测细胞内氧化应激损伤水平：MDA,SOD及T-AOC免疫荧光检测细胞内氧化光产物8-oxo-dGReal-TimePCR检测端粒的相对长度：T/SWesternBlot检测细胞老化相关蛋白P53,P21WAF-1及

P16INK-4a

药物组端粒在皮肤光老化中的作用

1.各组细胞照光处理后各时间段细胞半乳糖苷酶阳性率

对照组8-MOP组UVA组8-MOP+UVA组照光后24h、48h、72h及7d后8-MOP+UVA联合处理组SA-β-Gal阳性细胞比例较对照组均明显增高（*P<0.01），且随时间积累而逐渐增高（r=0.988)。结论：

8-MOP+UVA联合作用可使皮肤FB出现光老化生物学特性改变SA-β-Gal电镜端粒在皮肤光老化中的作用2.照光后2h各组细胞光产物8-oxo-dG8-羟基脱氧鸟嘌呤

对照组

UVA组***8-MOP+UVA组8-oxo-dG阳性细胞核比例明显高于对照组（**P<0.01

）；UVA组8-oxo-dG阳性细胞核比例也明显高于对照组（*P<0.05

）；而8-MOP处理组较对照组无明显统计学差异（P>0.05

）

端粒在皮肤光老化中的作用3.Real-TimePCR检测各组细胞端粒相对长度比较8-MOP+UVA联合处理组端粒相对长度明显短于对照组（2.57±0.05vs6.63±0.12，P<0.01）UVA照射组（4.59±0.07vs6.63±0.12,）8-MOP+UVA联合处理组（2.57±0.05vs4.59±0.07）端粒相对长度经t检验比较均短于对照组（P<0.05）

，后者端粒长度更短。而8-MOP处理组（6.62±0.09）与对照组之间无统计学差异（P>0.05）

***端粒在皮肤光老化中的作用4.WB检测各组细胞老化相关蛋白表达水平各组老化相关蛋白表达水平比较8-MOP+UVA联合处理组P53,P21WAF-1及P16INK-4a蛋白表达水平明显高于对照组（P值均<0.01），而UVA辐射组相关蛋白水平也有明显增高（P值均<0.05），8-MOP+UVA联合处理组及UVA照射组两组间经t检验比较，前者相应蛋白表达水平均高于后者（P值均<0.05）。端粒在皮肤光老化中的作用讨论在UVA照射下，外源性光敏剂8-MOP使细胞的基因氧化应激损伤显著加重，产生大量氧化光产物8-oxo-dG；oxodeoxyguanosine

8-MOP+UVA联合作用后，细胞端粒结构上由于较多氧化光产物的产生，使其端粒缩加速，提前到达临界长度；

8-MOP+UVA联合作用后由于端粒缩短加速，提前激活P53老化检查点，并依次激活下游信号蛋白-细胞周期激酶抑制剂P21WAF-1

及P16INK-4a蛋白，相应蛋白表达水平明显增高；

综上所述：

8-MOP+UVA联合作用可导致基因的氧化应激损伤，端粒受损严重，缩短加速，并激活老化相关蛋白表达。端粒在皮肤光老化中的作用3.药物-端粒-光老化细胞周期生物钟端粒在皮肤光老化中的作用1.

GS-Rg1有效降低老化特征酶β-半乳糖苷酶表达各组细胞照光后相应时间点SA-β-Gal及8-oxo-dG表达水平

GS-Rg1各浓度干预组基因氧化产物8-oxo-dG及SA-β-Gal阳性率均明显低于光老化模型组（P<0.05）且与药物剂量负相关（r值依次为0.968,0.943）。

***端粒在皮肤光老化中的作用3.

GS-Rg1显著减缓端粒缩短各组细胞于照光后第7日端粒长度比较GS-Rg1各浓度干预组端粒相对长度（2.57±0.05）明显长于8-MOP+UVA联合处理组（6.63±0.12，P<0.01），且各浓度组之间端粒相对长度与GS-Rg1浓度有明显的正相关，表现出一定的剂量依赖性（P<0.05）；高剂量组GS-Rg1干预组端粒长度接近对照组水平，两者无明显统计学差异（P>0.05）

***端粒在皮肤光老化中的作用4.

GS-Rg1显著降低老化相关蛋白的表达水平

β-Actin

P53P21WAF-1P16INK-4a照光后第7日老化相关蛋白表达水平GS-Rg1各浓度干预组老化相关蛋白P53,P21WAF-1及P16INK-4a的表达水平明显低于8-MOP+UVA组（P值均<0.01），且各浓度组之间蛋白表达水平与GS-Rg1药物浓度有明显的负相关(r1=0.981，r2=0.916，r3=0.914)。端粒在皮肤光老化中的作用GS-Rg1预处理的人真皮成纤维细胞显示出较强的氧化应激耐受性，细胞内基因氧化产物8-oxo-dG产生明显减少；

GS-Rg1预处理的细胞端粒结构中相应碱基损伤较光老化模型组明显减弱，端粒结构稳定性加强，端粒缩短减缓；

GS-Rg1预处理的细胞由于端粒缩短减缓，其对老化检查点的激活受抑制，老化相关蛋白表达水平明显降低；

综上所述：GS-Rg1预处理可阻止基因损伤后对细胞老化P53检查点的激活，抑制其后细胞周期激酶抑制剂P21WAF-1

及

P16INK-4a的表达，减弱两者对细胞周期激酶CDK的抑制作用，使得CDK得以和核因子Rb蛋白结合，Rb蛋白磷酸后促进细胞生长周期相关基因进行转录，使得细胞恢复分裂活性。讨论端粒在皮肤光老化中的作用1、黄芩苷对UVA辐射后β-半乳糖苷酶阳性细胞比率的影响

黄芩苷对端粒缩短及光老化的影响端粒在皮肤光老化中的作用2.黄芩苷对UVA辐射后细胞端粒长度的影响端粒在皮肤光老化中的作用3.黄芩苷对UVA辐射后细胞p53、p16和c-mycmRNA水平的影响p53p16c-myc端粒在皮肤光老化中的作用4.黄芩苷对UVA辐射后细胞p16和c-myc蛋白水平的影响端粒在皮肤光老化中的作用结论人参皂苷-Rg1可有效缓解细胞内氧化应激损伤，减少基因中光产物形成，减轻端粒损伤从而抑制端粒缩短，阻止端粒临界长度激活P53老化检查点，阻止细胞周期受抑的信号转导，降低老化相关蛋白表达水平，从而发挥显著的抗光老化作用黄芩苷可有效保护人成纤维细胞免于氧化损伤和延缓光老化进程。其抗光老化机制包括延缓端粒缩短、调节老化相关基因包括p66、p53、p16、c-myc、MMP-1和TIMP-1表达有关，但黄芩苷对细胞端粒酶活性没有影响。端粒在皮肤光老化中的作用光疗临床改善光老化——“Traditonal激光磨削”(临床图片)点阵激光（临床图片）强脉冲激光治疗光老化及保健嫩肤（临床图片）端粒在皮肤光老化中的作用

空白2UVA+IPL组8-MOP/UVA+IPLIPL对小鼠光老化皮肤的改善作用

空白组1

UVA组8-MOP/UVA组LuoD,CaoY,WuD,XuY,ChenB,XueZ/ImpactofintensepulselightirradiationonBALB/cmouseskin-invivostudyoncollagens,matrixmetalloproteinasesandvascularendothelialgrowthfactor.LasersMedSci;2007Dec15.

空白组1UVA组