临床病原学检测和标本的正确留取专家讲座

临床病原学检测与标本正确留取演讲者：崔焕敏临床病原学检测和标本的正确留取第1页痰液标本采集与运输痰液由气管、支气管和肺泡所分泌正常情况下分泌物甚少，呼吸道粘膜受刺激时，分泌物增多，但多为清楚、水样，无临床意义。病理情况下痰量增多，呈不透明并有性状改变临床病原学检测和标本的正确留取第2页采集目标普通可用于普通细菌、分枝杆菌、真菌和军团菌涂片或培养检测，经气管穿刺吸引物可用于厌氧菌检测。临床病原学检测和标本的正确留取第3页采集标本最正确时机应在使用抗菌药品之前。宜采集清晨第二口痰液。对于普通细菌性肺炎，痰标本送检天天1次，连续2～3天。不提议24小时内屡次采样送检，除非痰液外观性状出现改变。怀疑分枝杆菌感染者，应连续搜集3天清晨痰液送检。普通标准临床病原学检测和标本的正确留取第4页采集方法1、自然咳痰与雾化倒痰法：无痰或痰量极少者可用3%～5%氯化钠溶液5ml雾化吸入约5min后留取痰液。如有可能，应在护理人员直视下留取清晨第二口痰。嘱咐患者留取前摘去牙托，清洁口腔，如刷牙后重复用生理盐水漱口；深吸气后用力自气管深部咳出痰液，置无菌容器内。应尽可能预防唾液及鼻咽部分泌物混入样品，不应用纸巾包裹痰液。临床病原学检测和标本的正确留取第5页2、支气管镜法：鼻或口腔插入支气管镜。惯用采集方法有经支气管镜吸引、支气管肺泡灌洗、防污染毛刷采样或防污染支气管肺泡灌洗等。采集方法临床病原学检测和标本的正确留取第6页3、经人工气道吸引法：进行手卫生后将一次性吸痰管末端拆开，连接吸引器，调整吸引器置适宜负压（成人：40.0～53.3kpa;小儿：＜40.0kpa）。将一次性吸痰管外包装取出，戴手套持吸痰管试吸生理盐水，检验管道是否通畅。折叠一次性吸痰管末端，插入口腔或鼻腔或人工气道至适宜深度，放开吸痰管末端，轻柔、灵活、快速地左右旋转上提吸痰管吸痰。采集方法临床病原学检测和标本的正确留取第7页见吸痰管内有痰液吸出，即折叠一次性吸痰管退出，将一次性吸痰管与吸引器分离（使用人工呼吸机者，一次吸痰时间不超出15s，高浓度氧气1～2min）。将痰液注入无菌容器（试管）内，如痰液粘稠可用一次性针筒向吸痰管末端注入少许生理盐水，将痰液冲入无菌容器（试管）内。采集方法临床病原学检测和标本的正确留取第8页标本运输痰以深咳排出后，应装于有密封瓶盖无菌塑料容器中，以免感染自己或他人。标本应及时送检，室温≤3h。若不能及时处理，可选择运输培养基运输和保留标本，但不应≥48h。临床病原学检测和标本的正确留取第9页痰标本要求

白细胞（WBC）≥25/LPF。鳞状上皮细胞（SEC）＜10/LPF。如不符合上述指标，通知临床重新采样。临床病原学检测和标本的正确留取第10页血培养标本采集一、血培养指征：患者出现寒战，体温超出38℃或低体温（≤36℃)怀疑血流感染时，尤其存在以下情况时，应抽血做细菌和真菌培养：医院内肺炎；留置中心静脉导管超出72h；感染性心内膜炎；骨髓炎；有严重基础疾病、免疫缺点伴全身感染症状，临床医生怀疑有血流感染可能其它情况。白细胞过多（≥10000/μl），并有核左移现象。中性粒细胞过少（≤1000/μl）。临床病原学检测和标本的正确留取第11页二、采血时机：一旦怀疑有血流感染可能，应马上采血做血培养最好在抗菌药品治疗前或停用抗菌药品24h后，以寒战、发烧时采集为宜。血培养标本采集临床病原学检测和标本的正确留取第12页三、采血流程：消毒：1、培养瓶消毒程序：用酒精消毒培养瓶橡皮塞，待干燥后使用。2、皮肤消毒程序：用安尔碘消毒液从穿刺点向外划圈消毒，至消毒区域直达5cm以上，待消毒液挥发干燥后（常须30s以上）穿刺采血。血培养标本采集临床病原学检测和标本的正确留取第13页四、静脉穿刺和培养瓶接种：采取负压血培养瓶，将患者静脉直接吸入血培养瓶，降低污染步骤。先注于厌氧培养瓶，血培养标本采集临床病原学检测和标本的正确留取第14页五、采血部位采血部位通常为肘静脉。对疑为细菌性骨髓炎或伤寒病人，在病灶或髂前（后）上棘处消毒后抽取骨髓培养。疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。血培养标本采集临床病原学检测和标本的正确留取第15页六、采血量：以培养基与血液之比10:1为宜，以稀释血液中抗菌药品、抗体等杀菌物质。采血量过少会显著降低阳性率。成人每次每培养瓶采血8～10ml，婴幼儿每次每培养瓶采血2ml。血培养标本采集临床病原学检测和标本的正确留取第16页需要采集多少份血培养？每名患者应最少采集2份血培养，最好为3份（CLSI要求采集2～3份血培养）。在一名败血症患者早期诊疗时，绝不能只采集1份血培养（CLSI强调了此观点）。注意：1“份”是指一次静脉穿刺。血培养标本采集临床病原学检测和标本的正确留取第17页

运输要求■全部标本采集后都应马上送往试验室，最好在2h内。■假如不能及时送检，宜置于室温环境。切勿冷藏。■送检标本应正确粘贴条形码，注明采样时间和送检时间。■安全防护：放标本容器必须防漏，禁止将渗漏标本送往试验室。

血培养标本采集临床病原学检测和标本的正确留取第18页汇报要求：■紧急口头（电话）汇报：血培养出现阳性警报时，马上进行革兰氏染色、镜检，并在最短时间内将结果向临床主管医生进行紧急口头（电话）汇报。■最终止果（书面）汇报血培养标本采集临床病原学检测和标本的正确留取第19页穿刺腰椎取得，特殊情况可采取小脑延髓池或脑室穿刺采集后置无菌管马上送检，不能超出1h，同时应防止凝固和混入血液培养脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，应将标本置于25℃条件下保温送检，不可置冰箱保留做病毒检验脑脊液标本应放置冰块，可在4℃保留72小时。脑脊液采集和运输临床病原学检测和标本的正确留取第20页尿液采集和运输■正常人膀胱中尿液是无菌→外尿道排出时受外尿道中正常菌群污染→混有细菌。■采集时机：宜为抗菌药品使用之前清晨第一次尿液。临床病原学检测和标本的正确留取第21页采集方法采集消毒中段尿，在采集尿液前，须以肥皂和清水洗净尿道口，弃去前段尿，留取中段尿或无菌操作取中段尿于无菌容器中，马上送检，2h接种。取经尿道排出中段尿，细菌数不会超出103cfu/ml。泌尿系感染时，尿中细菌数高于104~5/ml。因而，以此为界作为诊疗泌尿系感染依据尿液采集和运输临床病原学检测和标本的正确留取第22页导尿1、直接导尿法：使用安尔碘消毒剂消毒会阴局部，用导尿管直接经尿道插入膀胱，先弃其前段尿液约15ml，再留取中段尿10～20ml于无菌容器内。2、留置导尿管法：医院内尿路感染中，临床最惯用此法。采集前先夹住导尿管，采集时则松管弃其前段尿液，使用安尔碘消毒剂消毒导尿管采样部位，使用无菌注射器斜刺入导尿管（从采样口或靠近尿道导尿管管壁）抽取10～20ml于无菌容器内。尿液采集和运输临床病原学检测和标本的正确留取第23页标本运输标本采集后应及时送检并接种，室温下保留时间不应超出2h（夏季保留时间应适当缩短或冷藏保留）。假如不能及时运输或接种，应4℃冷藏，但保留时间也不应超出8h.尿液采集和运输临床病原学检测和标本的正确留取第24页注意事项不应从集尿袋中采集尿液。尿液中不应加防腐剂或消毒剂。若尿液培养前患者曾使用抗菌药品，应重复屡次送检。屡次采集或24h尿不应用于尿液培养。除非进行流行病学调查，不应对长久留置导尿管患者常规进行尿液培养。培养结果应结合临床表现、菌落计数以及微生物种类等，进行综合判断。尿液采集和运输临床病原学检测和标本的正确留取第25页手术部位感染标本采集及运输

普通标准在抗菌药品使用前，且仅在有临床感染症状或伤口恶化或长久不能愈合时采集标本。皮肤或粘膜表面清洁：1、闭合伤口和穿刺物标本：消毒方法同血培养标本皮肤消毒；2、开放伤口：无菌生理盐水充分冲洗伤口部位。不能够用消毒剂。3、采集新鲜感染组织，防止采集浅表组织碎屑。4、若能够采集穿刺物或活检标本，应防止拭子标本。容器：含有少许生理盐水带螺纹口无菌塑料容器。临床病原学检测和标本的正确留取第26页采集方法：封闭性脓肿：1注射器穿刺抽取浓度。2若无法抽到脓液，应先皮下注射少许无菌生理盐水，再次穿刺抽吸脓液；若脓液过多，应先切开引流，在基底部或脓肿壁采集标本。脓液量以大于1ml为宜。3排除注射器内部及针头气体用无菌橡皮塞封闭针头送检；或直接打入血培养瓶中。疑为厌氧菌，应快速将脓液打入厌氧血培养瓶中手术部位感染标本采集及运输临床病原学检测和标本的正确留取第27页组织和活标本：1、采集足够大组织，体积以1mm3为宜，防止在坏死区域采集。2、将小块组织放在运输培养基内；较大放在无菌容器中，并加入少许无菌生理盐水。3、开放伤口：（1）无菌生理盐水彻底冲洗浅表部位，去除表面渗出物和碎屑。（2）用拭子深入伤口基底部或伤口-正常组织边缘采集两个标本，分别用于培养和革兰氏染色。手术部位感染标本采集及运输临床病原学检测和标本的正确留取第28页

标本标识：填写患者信息、标本类型（深部组织、表浅组织、脓肿和穿刺物等）、标本起源（腹腔、腿和上臂等），统计标本采集日期和时间及是否在使用抗菌药品前采集，选择检验项目（需氧培养或厌氧培养）

标本送检：为了更加好分离病原菌，标本应在采集后30min内送到试验室。送检时应保持标本湿润。在送检前或运输过程中，禁止将标本放于冰箱。手术部位感染标本采集及运输临床病原学检测和标本的正确留取第29页正常人粪便中含有大量细菌（大肠埃希菌、产气肠杆菌、肠球菌和各种厌氧菌）。标本采集和运输用药前自然排便，采集脓血、粘液部分2-3g；外观无异常应不一样部位取材；婴幼儿患者，可用直肠拭子法采集标本。标本采集后应尽快送检，有条件提倡使用运输培养基。许多主要病原微生物如志贺菌在PH改变、温度↓时不能存活，应马上送检。粪便

临床病原学检测和标本的正确留取第30页正常内生殖器应是无菌。外生殖器及接触体表部分可有各种细菌。常见细菌有：葡萄球菌、链球菌、类白喉棒状杆菌、大肠埃希菌、变形杆菌、双歧杆菌及耻垢分枝杆菌等。

生殖道标本

临床病原学检测和标本的正确留取第31页标本采集及送检分泌物：用无菌生理盐水清洗尿道口，无菌棉签采取脓液标本，置无菌试管中。怀疑梅毒患者：从外生殖器硬下疳处先以无菌生理盐水清理创面，再从溃疡底部挤出少许组织液，用清洁玻片直接蘸取，加盖玻片后送检。女性生殖道标本采集：用长无菌棉签采集阴道后穹隆分泌物。生殖道标本

临床病原学检测和标本的正确留取第32页全部盛装标本容器均进行无菌处理，并到达无菌要求。采取不易碎且坚硬材料；容器口大小要求便于患者留取标本；容器盖要求为外置螺旋盖，且不渗漏液体。血液、骨髓标本专用培养基应有相关科室提供。微生物标本容器要求

临床病原学检测和标本的正确留取第33页泌尿生殖系统、眼、耳分泌物及咽刷拭子：管为无菌塑料，拭子杆为塑料或金属，拭子头为人造纤维。组织、痰、尿液、粪便、脑脊液、穿刺液、引流液及其它无菌体液：采取广口、无菌带螺口盖密闭塑料盒。微生物标本容器要求

临床病原学检测和标本的正确留取第34页结核分枝杆菌培养标本：采取无菌带螺口盖塑料离心管没有有好质量标本，试验室采取任何先进分离、判定和药敏技术都是无几于事。所以，正确、规范采集标本是确保临床微生物学检验质量最主要前提。临床规范搜集标本能够加紧汇报时间，提升检验质量。

微生物标本容器要求

临床病原学检测和标本的正确留取第35页小区取得MRSA(CaMRSA)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（HaMRSA)耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRSCons）万古霉素耐药金葡菌（全球6株，