临床医学检验考试辅导

第一章微生物绪论常见考点

第一章绪论

一、微生物的分类及命名

1、微生物的分类等级为界、门、纲、目、科、属、种，种是最基本的分类单位。目前国际上普遍采用的分类系统是伯杰

分类系统。

2、根据微生物的大小、结构和组成不同，分为三大类型：

(1)非细胞型微生物：此类微生物无细胞结构，由一种核酸和蛋白衣壳组成，必须寄生在活细胞内才能生长繁殖。如病

毒、类病毒和阮病毒(又称麻粒)。

(2)原核细胞型微生物：此类微生物由单细胞组成，细胞核分化程度低，无核膜、核仁，染色体为裸露的DNA分子,

缺乏完整的细胞器。如细菌、支原体、衣原体、立克次体和螺旋体。

(3)真核细胞型微生物：此类微生物细胞核分化程度高，有核膜、核仁、完整的细胞器。如真菌、单细胞藻类。

3、每种细菌DNA中的G(鸟喋吟)+C(胞口密咤)含量摩尔百分比有一定范围，变化不大，DNA(G+C)mol%可以作

为细菌分类的一个重要依据。

4、微生物命名由属名和种名组成，中文命名种名在前，属名在后。拉丁文则相反。

如:Mycobacteriumtuberculosis

中文名：种名+属名

例：结核分枝杆菌

二、微生物的发展

1、荷兰人列文虎克发明了显微镜，人类第一次观察到微生物。

2、法国科学家巴斯德被称为“微生物学之父"。

3、1929年，弗莱明发现了青霉素。1940年Florey和Chain将青霉素分离提纯，应用于临床。

5、德国医生郭霍证明了微生物是传染病的致病因子。

第二章细菌的基本性状常见考点

一、细菌的形态与结构

(-)细菌的大小和形态

1、细菌个体微小，通常以微米作为测量单位。

2、细菌的基本形态有三类：球菌、杆菌、螺形菌。

(二)细菌的基本结构

1、细菌的基本结构由外向内依次是细胞壁、细胞膜、细胞质和核质。

2、根据细胞壁的化学组成与结构不同，用革兰染色将细菌分为G,和G两大类。

3、磷壁酸是革兰阳性菌细胞壁特有的结构，壁磷壁酸为革兰阳性菌的重要表面抗原，膜磷壁酸为黏附因子。

4、外膜层是革兰阴性菌特细胞壁的特殊成分，从外向内依次是脂多糖、脂质双层、脂蛋白。其中脂多糖是革兰阴性菌内

毒素，脂质A是内毒素的主要毒性部分。

5、由于革兰阴性菌和革兰阳性菌细胞壁组成成分的不同，两者对药物的敏感性也不一样。革兰阳性菌细胞壁有五肽交联

桥，是青霉素作用的部位。

a5-2-1革兰阳性菌与阴性菌细胞壁结构比较

结构革兰阳性菌革兰阴性菌

肽聚糖组成聚糖骨架、四肽侧链、五肽交联桥聚糖骨架、四肽侧链

层数可达50层仅1〜2层

含量占细胞壁干重的50%〜80%占细胞壁干重的5%〜10%

机械强度强，较坚韧差,较疏松

磷壁酸有无

外膜无有

周浆间隙无有

6、中介体：又称中间体，是细胞膜内陷折叠而成的管状囊状结构。其功能类似真核细胞的线粒体，故有人称之为类线粒

体。

7、质粒：是细菌染色体（核质）以外的遗传物质，为双链闭环DNA分子，携带遗传信息，控制细菌某些特定的遗传性

状。F质粒控制性菌毛的产生、R质粒与细菌的耐药性有关。

（二）细菌的特殊结构

1、鞭毛：细菌的运动器官，是由细胞质伸出的蛋白性丝状物。

2、菌毛：主要出现在革兰阴性菌中。分为性菌毛和普通菌毛。

仅少数革兰阴性细菌具有性菌毛，较普通菌毛少，只有1~4根，比普通菌毛长且粗，呈中空管状，是两菌之间传递遗

传物质的通道。带有性菌毛的细菌称为F+菌或雄性菌，无菌毛的细菌称为F-菌或雌性菌。细菌的耐药性及某些毒力因子

均可通过这种方式转移。

3、荚膜：通常在机体内和营养物质丰富的环境中形成，在细胞壁外包绕的一层界限分明，且不易被洗脱的黏稠性物质。

4、芽胞：主要为革兰阳性杆菌在一定条件下细胞质、核质浓缩脱水而形成的一个遮光性很强、具有多层膜状结构、通透

性很低的圆形或卵圆形小体。

▲细菌L型即为细菌细胞壁缺陷型。在人工诱导（少量青霉素、头孑包菌素存在）或自然情况下，细菌L型在体内或体

外均可产生。

细菌L型在含血清的高渗低琼脂培养基中能缓慢生长，可形成"油煎蛋"样菌落(典型L型细菌)：菌落较小，中心

致密并深陷人琼脂中；四周较薄，由透明的颗粒组成，在低倍镜下观察菌落呈"油煎蛋"状。

细菌L型保留了亲代的遗传特性，可返祖，可致病。

二、细菌的生理

1、细菌的基本化学组成：水、无机盐、蛋白质、糖类、脂类、核酸(细菌含有RNA和DNA两种核酸)。

2、细菌有带电现象，革兰阳性菌的等电点约为pH2~3,革兰阴性菌的等电点约为pH4~5。

(-)细菌的生长繁殖、控制、遗传及变异

1、细菌根据营养类型的不同，分为自养菌(以无机物作为原料)和异养菌，异氧菌又根据所需营养物质的不同分为腐生

菌(以无生命的有机物作为原料)和寄生菌(以宿主体内的有机物作为原料)。

2、细菌生长繁殖的主要条件有：

(1)充足的营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子。

(2)合适的pH:大多数细菌的最适pH为7.2~7.6,有个别例外，结核分支杆菌在pH6.4~6.8、霍乱弧菌在pH8.4~

9.2的环境中生长最好。

(3)合适的温度：35~37℃

(4)必要的气体

根据细菌对氧气需求不一，分为：

①需氧菌：必须在有氧(空气)的情况下才能生长。

②微需氧菌：在5%~6%的低氧环境中才能生长。

③厌氧菌：必须在无氧的环境中才能生长。

④兼性厌氧菌：在有氧和无氧环境中均能生长。

3、细菌生长繁殖的规律

(1)细菌一般一无性二分裂的方式繁殖。

(2)大多数细菌20~30分钟繁殖一代，结核需要18~20小时才繁殖一代。

(3)细菌的生长曲线分为四个时期：

①迟缓期：适应阶段，此阶段细菌几乎不繁殖。一般约1~4小时。

②对数期：细菌的形态、染色性、生理活性都较典型，可以用来观察细菌的大小、形态、染色性、对抗菌药物的敏感性等。

一般约8~18小时。

③稳定期：细菌繁殖数与死亡数大致平衡。

④衰亡期：细菌死亡逐渐增多，死菌数超过活菌数。

4、细菌合成代谢的产物主要有：热原质、毒素(革兰阳性菌合成外毒素、革兰阴性菌合成内毒素)、侵袭性酶类、色素、

抗生素、细菌素、维生素。

▲我国规定生活饮用水的标准是：1ml水中的细菌总数不超过lOOcfu;100ml水中不得检出大肠埃希菌。

5、细菌的控制:

(1)消毒：杀死物体上的病原微生物但不一定杀死细菌芽胞的方法。

(2)灭菌：杀灭物体上所有的微生物，包括细菌芽泡。

(3)防腐：防止或抑制微生物生长繁殖的方法。

(4)无菌和无菌操作：无菌是指没有活的微生物存在。防止微生物进入机体或者其他操作对象的方法称为无菌操作。

(5)高压蒸汽灭菌法的压力为103.4kPa,温度为121.3q维持15-30分钟。检测高压蒸汽灭菌效果的细菌是嗜热枯

草芽抱杆菌。

(6)用于牛奶等物品的消毒方法是巴氏消毒法。

(7)紫外线杀菌的主要机制是干扰DNA的复制。

6、正常情况下，人体与外界相同的器官都有细菌，机体的胃、骨骼、肌肉、血液、脑等无菌。滥用抗生素会导致菌群失

调而发生一系列的病理反应。

7、细菌常见的变异现象：

(1)形态与结构变异：如细菌L型。①荚膜变异，从有到无；②鞭毛变异(H-0变异)，从有到无；③芽胞变异，从有

到无。

(2)菌落变异：S-R变异，细菌菌落光滑型与粗造型之间的变异。

(3)毒力变异：包括毒力加强和毒力减弱。

(4)抗原变异

(5)耐药性变异：细菌对某种药物从敏感变为不敏感。

(6)酶活性变异

(7)生化特性的变异

8、细菌的R质粒是耐药质粒，可通过细菌间的接合或通过噬菌体进行传递。

9、细菌基因转移与重组的方式有转化、接合、转导、溶原性转换、原生质融合等。

(1)转化：是受体菌直接摄取供体菌提供的游离DNA片段整合重组，使受体菌的性状发生变异的过程。

(2)转导：是以噬菌体为媒介，将供体菌的基因转移到受体菌内，导致受体菌基因改变的过程。

(3)接合：受体菌和供体菌直接接触，供体菌通过性菌毛将所带有的F质粒或类似遗传物质转移至受体菌的过程。

(4)溶原性转换：是噬菌体的DNA与细菌染色体重组，使宿主菌遗传结构发生改变而引起的遗传型变异。

(5)原生质体融合：两种经过处理失去细胞壁的原生质体混和可发生融合，融合后的双倍体细胞可发生细菌染色体间的

重组。

10、细菌的主要遗传物质是染色体，为一条环状闭合的双螺旋DNA。质粒也是细菌的遗传物质。但不是主要遗传物质。

第三章微生物致病性与感染常见考点

1、病原微生物能否致病与病原体的毒力、数量、侵入么户、机体的免疫力、环境因素等密切相关。

2、细菌分泌的侵袭性酶类主要有：

(1)透明质酸酶：分解结缔组织的透明质酸，易于细菌扩散。

(2)胶原酶：分解细胞外基质的胶原蛋白。

(3)神经氨酸酶：分解肠黏膜上皮细胞的细胞间质。

(4)磷脂酶：可水解细胞膜的磷脂，破坏组织细胞。

(5)卵磷脂酶：分解细胞膜的卵磷脂。

(6)激酶：将血纤维蛋白酶原激活为纤维蛋白酶，以分解纤维蛋白，防止形成血凝块。

(7)凝固酶：使血浆发生凝固，保护细菌不被吞噬细胞吞噬和杀灭。

(8)IgA蛋白酶：与细菌的黏附有关。

3、细菌毒素根据来源、性质和作用特点不同分为外毒素和内毒素。

(1)外毒素的特性：①主要是革兰阳性菌产生；②具有菌种特异性；③毒性作用强；④毒性作用有组织选择性；⑤具有

良好的免疫原性：外毒素经过0.4%的甲醛处理可失去毒性但仍保持免疫原性变为类毒素，可刺激几天产生抗毒素；⑥不

耐热；⑦都是蛋白质，易被酸及蛋白水解酶灭活。

(2)内毒素的特性：①主要是革兰阴性菌产生；②化学性质是脂多糖；③抵抗力强，耐热、耐酸、耐碱、耐强氧化剂；

④细菌死亡溶解后释放；⑤毒性及免疫原性均较外毒素弱，不能用甲醛处理成类毒素。

4、内毒素的主要生物学活性有致热作用、白细胞增多、感染性休克、DIC等。

5、细菌全身感染在临床上常见以下几种情况：

(1)毒血症：致病菌不进入血液循环，但其产生的外毒素入血。

(2)菌血症：致病菌侵入血流，但不在其生长繁殖.

(3)败血症：致病菌侵入血流，在其中大量繁殖并产生毒性物质。

(4)脓毒血症：化脓性细菌侵入血流，并在其大量繁殖。

(5)内毒素血症：革兰阴性细菌侵入血流，并在其大量繁殖，崩解后释放大量内毒素。

第四章细菌检验技术常见考点

一、细菌染色标本镜检

▲染色标本检查的基本程序是涂片、干燥、固定、染色、镜检。

(-)革兰染色

1、革兰染色为两种染料先后进行染色，为复染色法。

2、染液：结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、稀释苯酚复红液或沙黄。

3、染色步骤：初染lmin(结晶紫)一流水冲洗一媒染lmin(卢戈碘液)一流水冲洗一脱色20-30s(95%乙醇)一流

水冲洗一复染0.5-lmin(稀释苯酚复红液或沙黄)一流水冲洗―干燥—镜检

4、意义：鉴别细菌、指导用药、指导临床治疗。

5、结果判定：染紫色为革兰阳性，染红色为革兰阴性。

(-)抗酸染色

1、抗酸染色也是两种染料先后染色，也是复染色法。

2、染液：苯酚复红、3%盐酸酒精、吕氏碱性亚甲蓝

3、染色步骤：初染5~8min(苯酚复红加热)一流水冲洗一脱色(3%盐酸酒精)一流水冲洗一复染lmin(吕氏亚甲

蓝)一流水冲洗一干燥一镜检

4、注意事项：①苯酚加热冒气即可，切勿煮沸或煮干；②脱色要脱到无红色染液脱下为止。③痰标本需要经过酸或碱处

理后，使痰液化后接种。

5、临床意义：一般用于分枝杆菌属的检查，如结核分枝杆菌、麻风杆菌等。

6、结果判定：染成红色为抗酸菌，染成蓝色为非抗酸菌。

二、细菌不染色标本镜检

▲压滴法、悬滴法、暗视野聚光法均用于观察细菌动力。暗视野聚光法使用暗视野显微镜可观察螺旋体及其动力。

三、细菌接种与培养技术

1、液体培养基是在肉浸液中加入1%蛋白陈和0.5%NaCI,调pH至7.4,蛋白月东的作用为提供细菌生长繁殖所需的氮

源。

2、半固体培养基是在液体培养基中加入0.2%~0.5的琼脂。

3、固体培养基是在液体培养基中加入2%~3%的琼脂。

4、细菌L型的培养基必须采用高渗（3%~5%NaCk10%~20%蔗糖等）低琼脂培养基。

5、制备好的培养基放于4。（：活冷暗处一般可以保存一周，最多不超过2周。

6、平板划线接种法一般用于含有多种细菌的标本，利用此接种法可以得到单个菌落，分为分区划线法和连续划线法。

7、分区划线法下一区应与上一区接触3~4次，此方法多用于含菌量多的标本，如粪便、浓汁、痰液等标本。连续划线

法多用于含菌量少的标本。

8、斜面接种法主要用于纯种增菌及保留菌种或生化反应。

9、穿刺接种法可用于观察细菌动力，有鞭毛的细菌可沿穿刺线扩散生长。

10、液体接种法多用于普通肉汤、蛋白月东水等液体培养基接种。

11、细菌在液体培养基上的生长现象有三种，分别是：①混浊（大多数细菌）；②沉淀（链状生长的细菌，如链球菌、炭

疽芽胞杆菌等）；③菌膜（专性需氧菌，如铜绿假单胞菌等）。

12、血琼脂上的溶血现象：

a溶血：又叫草绿色溶血，菌落周围血培养基变为绿色环状。

B溶血：又称完全溶血，菌落周围形成一个完全清晰透明的环。

Y溶血：即不溶血，菌落周围的培养基没有变化；红细胞没有溶解或无缺损。

双环：上层溶血环，内层为。溶血，外层为a溶血。如产气荚膜梭菌。

13、倾注平板法用于水、牛乳、饮料及尿液等液体标本的细菌计数。

14、常用的厌氧培养法有：①疱肉培养基法；②焦性没食子酸法；③厌氧罐法；④气袋法；⑤厌氧手套箱法，⑥气体喷

射法。

15、最常用的营养培养基：血平板和巧克力平板。

16、鉴别培养基：如糖发酵管、三糖铁培养基、枸椽酸盐培养基、克氏双糖铁琼脂（KIA）、伊红-美蓝琼脂和动力小引

噪-尿素（MIU）等培养基。

17、选择培养基：在培养基中加入某种化学成分或抗生素以抑制某些细菌的生长，而有助于需要的细菌生长，此培养基

称为选择培养基。如SS琼脂，其中的胆盐能抑制革兰阳性菌，因而使沙门菌、志贺菌容易得到分离。

18、增菌培养基：如乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌的生长需含血液或血清的培养基；霍乱弧菌的增菌常用碱性蛋白陈

水。

19、特殊培养基：包括厌氧培养基和细菌L型培养基。疏基乙醇酸钠是特殊培养基。厌氧培养基如疱肉培养基；细菌L

型培养基是针对细胞壁缺陷的细菌L型，由于胞内渗透压较高，培养基必须采用高渗低琼脂培养基。

20、细菌血液培养使用的抗凝剂为聚苯乙烯磺酸钠（SPS）。

四、细菌生化鉴定技术

（-）碳水化合物代谢试验

1、碳水化合物代谢试验包括：糖（醇、昔）类发酵试验、葡萄糖氧化/发酵试验、甲基红试验（MR）、V-P试验、如半乳

糖苗酶试验（ONPG）、七叶昔水解试验。

2、甲基红试验的原理是细菌发酵葡萄糖产酸，使培养基pH下降至4.5以下，加入甲基指示剂变红为试验阳性。

3、V-P试验出现红色为阳性，ONPG出现黄色为阳性，七叶甘水解试验出现黑色为阳性。V-P试验常与甲基红试验一起

使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。

4、七叶音水解试验主要用于D族链球菌与其他链球菌的鉴别，前者为阳性（黑色）。

细菌的生物化学试验

•I碳水化合物的代谢试验

•1.糖（醇、昔）类发酵试验

原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（爵、音）

类的酶，故分解糖类的能力不同，分解糖类后的终

末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故

可利用此特点以鉴别细菌。

培养基：在培养基中加入0.5%〜1%的糖类（单糖

、双糖或多糖）、醇类（甘露醇、肌醇等）、音类（反应型开放管封闭管

水杨普等）。产碱型--

应用：是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别氧化型+-

对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要.发酗型++

3.0-半乳糖昔酶试验（ONPG试验）

-2.氧化-发酵试验（0/F试验）

迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而

氧化型：仅在有氧环境中分解葡萄糖

不发酵乳糖的细菌为阴性。

发酵型：在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖

本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。

产碱型：在有氧或无氧环境中都不能分解葡萄糖

4.七叶音水解试验

培养基：HL（Hugh-Leifson）培养基

培养基：七叶苔培养基、胆汁七叶昔培养基。

结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。

应用：肠杆菌科（发酵型），非发酵菌（产碱和氧化型）应用：，要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别。

葡萄球菌（发酵型），微球菌（氧化型）

细菌的生物化学试验

碳水化合物的代谢试验

5.甲基红试验原理：由于细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能

培养基：葡萄糖蛋白陈水培养基力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的虽能分

结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄

解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分解糖。据此可

色为阴性。

应用：大肠埃希菌、沙门菌属、志贺菌属、枸对分解产物进行检测从而鉴别细菌。

椽酸杆菌属、变形杆菌属（+）

产气肠杆菌、哈夫尼亚菌属。

6.V-P试验■氧酵各种糖醇甘，;

培养基：葡萄糖蛋白陈水培养基

结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色

出现且于35℃4h后仍如故者即为阴性。'贝塔半乳糖甘酶。

应用：本试验常与甲基红试验一起使用，因为

前者阳性的细菌，后者通常为阴性。■VP相反甲基红，

■D链七叶昔发黑。

（~）蛋白质和氨基酸代谢试验

1、蛋白质和氨基酸代谢试验包括：靛基质（口引喙）试验、硫化氢试验、尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验、氨基酸脱竣

酶试验。

2、口即朵试验是由于细菌有色氨酸酶,可以分解色氨酸而产生叫口朵，与对二甲基苯甲醛反应生成红色化合物，本试验呈现

红色为阳性。

3、硫化氢试验是细菌能分解含硫氨基酸，产生的H2s与Fe2+反应呈黑色为阳性。主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。

如沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸檬酸杆菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。沙门

菌属中也有硫化氢阴性菌种。

4、尿素酶试验是细菌分解尿素生成氨，使培养基呈碱性，指示剂变红为阳性。

5、苯丙氨酸脱氨酶的阳性结果为绿色，氨基酸脱樱酶的阳性结果为培养基从黄色变为紫色。

■蛋白质和氨基酸的代谢试验2.咛I噪（靛基质）试验

1.明胶液化试验培养基：蛋白陈水培养基

方法：将被检菌穿刺接种于明胶培养基，于22℃培方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃

养7d,逐日观察结果。若用35℃孵育，因明胶在此温度培养24〜48h,沿试管壁慢慢加入用|噪试剂。

下自行液化，故在观察结果前，先置4℃冰箱内30min,结果：于两者液面接触处出现红色为阳性，无

再看结果。色为阴性.

应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定.

结果：培养基呈液化状态为阳性大肠埃希氏菌阳性，沙门菌阴性

应用：

■肠杆菌科细菌的鉴别：沙雷菌、普通变形杆形、奇异变

形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液小

明腔.

■厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。

多数假单胞菌也能液化明胶。

-3.硫化氢试验■4.尿素分解试验

培养基：醋酸铅培养基原理：

方法：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基，于

35℃培养24〜48h观察结果。培养基：尿素培养基

结果：培养基变黑为阳性.不变为阴性，方法：将待检菌接种于尿素培养基，于35℃培

羔18〜銮结臭_

结果：培养基呈鼠性，使酚红指示剂变红为阳

应用：主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。如

沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸檬酸杆性，不变为阴性。

菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的

他菌属阴性。沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。鉴定.奇异变形杆菌和普通变形杆菌脉酶阳性。另

外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯氏和产碱

普罗威登菌阴性。

•5.苯丙氨酸脱氨酶试验氨基酸脱竣酶试验

培养基：苯丙氨酸琼脂培养基培养基：氨基酸脱段酶培养基和氨基酸对照培养基

方法：将被检菌浓厚接种于苯丙氨酸琼脂培养方法：将被检菌分别接种于赖氨酸（或鸟氨酸或精

基斜面上，于35℃培养18〜24h,滴加10%三氯化氨酸）培养基和氨基酸对照培养基中，并加入无菌

铁试剂3〜4滴，自斜面上方流下。液体石蜡或矿物油，于35℃培养1〜4d,每日观察

结果：应立即观察结果，出现绿色为阳性.结果。

应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定.3果：对照管应呈黄色，测定管呈紫色（指示

-变形杆菌、普罗维斯登菌属和摩根菌属阳性剂为溟甲酚紫）为阳性，若测定管呈黄色为阴性。

•肠杆菌种中其他细菌阴性若对照管呈现紫色则试验无意义，不能作出判断。

应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。如沙门

菌属中除伤寒和鸡沙门菌外,其余沙门菌的赖氨酸

和鸟氨酸脱段酶均为阳性,志贺菌属除宋内和鲍氏

志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。

（三）碳源利用试验

1、碳源利用试验包括枸椽酸盐利用试验和丙二酸盐利用试验。

2、枸檬酸盐利用试验的阳性结果为深蓝色，阴性为绿色。

3、丙二酸盐利用试验的阳性结果为深蓝色。

4、枸椽酸盐利用试验在肠杆菌科中埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属、克雷伯菌属通

常为阳性。

■碳源和氮源利用试验2.丙二酸盐利用试验

细菌对单一来源的碳源利用的鉴定试验。培养基：丙二酸盐培养基

1.枸檬酸盐利用试验方法：将被检菌接种于培养基，35℃培养24〜

培养基：枸檬酸盐培养基

方法：将被检菌接种于枸椽酸盐培养基，于结果：培算基由淡绿色变为深蓝色为阳性，颜

35℃培养1〜4d,每日观察结果。色无变化为阴性,

结果：由淡绿色变为深蓝色为阳性；不能利用应用：肠杆菌科中属间及种的鉴别。克雷伯菌

枸椽酸盐作为碳源的细菌，在此培养基上不能生长属为阳性，枸椽酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌

,培养基则不变色，为阴性。属中有些菌种也呈阳性.其他菌属均为阴性u

■应用：用于肠杆菌科中菌属间的鉴定：在肠杆菌科

中一希茵属、志「志属、帝蕉乡南属和耶尔森菌屋

均为阴性，沙门菌属、克雷伯菌属通常为阳性。

（四）酶类试验

1、触酶试验：细菌能催化过氧化氢生成水和氧气，出现气泡为阳性。

2、氧化酶试验：某些细菌具有细胞色素氧化酶，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺氧化成红色的化合物，出现红色

为阳性。

3、凝固酶试验：主要用于金黄色葡萄球菌的鉴定。

4、DNA酶试验：细菌产生DNA酶分解DNA,是菌落周围出现透明环。葡萄球菌、沙雷菌、变形杆菌均为阳性。

5、硝酸盐还原试验：出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反应，可能是：①硝酸盐没有被还原，试验阴性；②硝酸盐

被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉（还原剂），如出现红色则表明试验确实为

阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴性。

■各种酶类试验3.硝酸盐还原试验

1.氧化酶试验（变色）培养基：硝酸盐培养基

试剂：1%盐酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺试剂：甲液（对氨基苯磺酸）；乙液（a•蔡胺）

方法：被检菌接种于硝酸盐培养基中，于35℃培

养1〜45将甲、乙液等量混合后（约力口

结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。

入培养基内，立即观察结果。

为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃

希菌作为阳性和阴性对照.结果：出现红色为阳性。

若加入试剂后无颜色反应，可能是：

■假单胞菌、奈瑟菌属、莫拉菌属阳性

①硝酸盐没有被还原，试验阴性；

•肠杆菌科细菌阴性②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假

2.过氧化氢酶试验（触醵试验）冒泡阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉,如出现

试剂：3%过氧化氢溶液红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表

示试验为假阴性。检查有无氮气产生在试管内加入

方法：取槽置于洁净的试管内或玻片上，然后加3%过氧

倒置小管一只，有气泡表示有氮气产生。

化氢数滴；或直接滴加3%过氧化氢于不含血液的细

菌培养物中，立即观察结果。应用：

结果：有大量气泡产生者为阳性.不产生气泡者为阴性。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐:

铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产

应用：故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。

生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。

葡萄球菌、豚球菌阳性

链球菌属球性

-4.脂酶试验（梭菌+）6.DNA酶试验

培养基：脂酶培养基（含维多利亚蓝）培养基：0.2%DNA琼脂平板。

方法：将被检菌接种于上述培养基中，于37℃方法：将被检菌点种于上述平板上，于35℃培

培养24h。养18〜24h,然后用1mol/L盐酸覆盖平板，观察结

结果：培养基变为蓝色为阳性，阴性为粉红色果。

或无色。结果：在菌落周围出现透明环为阳性，无透明

应用：主要用于厌氧菌的鉴别。环为阴性，

类杆菌属中的中间类杆菌产生脂酹，其他类杆应用：在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌

菌则阴性；产生DNA酹；用于革兰氏阴性《球菌中卡他布兰汉

芽胞梭菌属中产气芽胞梭菌、肉毒梭菌和诺维菌（阳性）与奈瑟菌属的鉴别，

梭菌为阳性，而其他梭菌阴性。在肠杆菌科中沙雷菌和变形杆菌产生此酶,

5.卵磷脂酶试验7.凝固醇试验

培养基：1%卵黄琼脂平板试管法：取试管2支，各加0.5ml人或兔血浆，

方法：将被检菌划线接种于卵黄琼脂平板上，挑取被检菌和阳性对照菌分别加入血浆中并混匀，

35℃培养3〜6h,于37℃水浴3〜4h。

结果：若3h后在菌落周围形成乳白色混浊环，结果：玻片法以血浆中有明显的颗粒出现而盐

即为阳性，6h后混浊环可扩展至5〜6mm。水中无自凝现象判为阳性；试管法以血浆凝固判为

应用：主要用于厌氧菌的鉴定。阳性。

产气荚膜梭菌、诺维梭菌产生此酹，其他梭菌应用：作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，

为阴性。也是小黄色葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。

-这2个试验一起记忆均为鉴别厌氧菌的试验。

8.CAMP试验9.胆汁溶菌试验

原理：B群链球菌能产生CAMP因子，可促进原理：胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由

葡萄球菌的缶溶血素溶解红细胞的活性，因此在两于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌

菌（B群链球菌和葡萄球菌）的交界处溶血力增加体裂解；或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶

,出现矢形（半月形）的溶血区。过程，促使细菌发生自溶。

培养基：血琼脂平板试剂：10%去氧胆酸钠

方法：先以产溶血素的金黄色葡萄球菌划一方法：

横线接种于血琼脂平板上，再将被检菌与前一划线1）平板法：取10%去氧胆酸钠溶液一接种环，

作垂直划线接种，两线不能相交，相距0.5〜1cm,滴加于被测菌的菌落上，置35°C30min后观察结果.

于37℃培养18〜24h,观察结果。2）试管法：被检菌培养物2支，各0.9ml,分别

结果：在两划线交界处出现箭头样的溶血区为加入10%去氧胆酸钠溶液和生理盐水（对照管）0.1ml

阳性。，摇匀后置35℃水浴10〜30min,观察结果,

应用：在链球菌中,只有B群链球菌CAMP试结果：平板法以“菌落消失”判为阳性；

验阳性，故可作为特异性鉴定.试管法以“加胆盐的培养物变透明，而对照管仍混

浊”判为阳性.

应用：肺炎链球菌（阳性）

甲群链球菌（阴性）

（五）其他及药敏鉴定试验

1、CAMP试验：B群链球菌能产生CAMP因子，可促进葡萄球菌的田溶血素溶解红细胞的活性，因此在两菌（B群链

球菌和葡萄球菌）的交界处溶血力增加，出现箭头状或矢形（半月形）的溶血区。在链球菌中，只有B群链球菌CAMP

试验阳性，故可作为特异性鉴定。

2、胆汁溶菌试验：胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；

或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶过程，促使细菌发生自溶。

3、0/129抑菌试验：0/129抑菌试验为药敏试验，0/129（二氨基喋陡）对弧菌属细菌有抑制作用，而对气单胞菌属

细菌无抑制作用。

4、杆菌肽试验：A群链球菌对杆菌肽几乎全部敏感，而其他群链球菌绝大多数对其耐药。

5、奥普托欣（Optochin）试验：几乎所有肺炎链球菌对奥普托欣试验敏感，而奥普托欣试验对其他链球菌则无抑制作

用。

五、细菌毒力鉴定

▲内毒素

常采用蚩试验——内毒素激活量试剂中凝固酶原转变为凝固酶，凝固蛋白原生成凝固蛋白。

▲外毒素

常用体内及体外毒力试验检测，也用ELISA法测定。

第五章细菌对抗菌药物的敏感试验

一、临床常用抗菌药物

（-）B-内酰胺类

L常见药物主要是青霉素类、头狗菌素类和单环内酰胺类（氨曲南和卡芦莫南）。

2、作用机制：B-内酰胺类抗生素的作用机制相似，均是与青霉素结合蛋白（PBP）结合，抑制细菌细胞壁合成，致使细

菌死亡。

（~）氨基糖昔类

1、作用机制：①依靠离子的附作用,吸附在菌体表面，造成膜的损伤；②和细菌核糖体30s小亚基发生不可逆结合，抑

制mRNA的转录和蛋白质的合成，造成遗传密码的错读，产生无意义的蛋白质。

2、种类：①链霉菌属：如链霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龙霉素、新霉素；

②小单胞菌属：如庆大霉素、福提霉素；

③半合成氨基昔类：阿米卡星、奈替米星、地贝卡星等，氨基昔类抗菌药物对需氧G-杆菌有较强的抗菌活性，对G+

球菌有一定的活性。

（三）噗诺酮类

1、作用机制：①通过外膜孔蛋白和磷脂渗透进入细菌细胞；②作用于DNA旋转酶，干扰细菌DNA复制、修复和重组。

2、种类：①第一代：为窄谱抗菌药物，对G+球菌无作用；主要作用于大肠埃希菌，且迅速出现耐药，较少应用于临床。

②第二代：对G-和G+细菌均有作用；比较这类药的抗菌活性强度依次为环丙沙星、氧氟沙星、罗美沙星、氟罗沙星、

培氟沙星、诺氟沙星；

③第三代：对G+菌作用高于第二代的4~8倍，对厌氧菌亦有作用；司帕沙星、妥舒沙星、左氧氟沙星、加替沙星、格

帕沙星、莫西沙星等。

（四）大环内酯类

1、作用机制：可逆结合细菌核糖体50S大亚基的23S单位，抑制细菌蛋白质合成和肽链延伸；

2、种类：国内常用有红霉素、吉他霉素、麦迪霉素、乙酰螺旋霉素。新一代大环内酯类有克拉霉素、罗红霉素、地红霉

素、氟红霉素、阿奇霉素和乙酰麦迪霉素。

（五）其他抗菌药物

▲磺胺类：竞争性第与二氢叶酸合成酶结合，阻止核酸形成。

▲四环素类：阻止酰胺基转移酶RNA与mRNA核糖体的受体位点结合。分为短效（土霉素、四环素）、中效（地美环素、

美他环素）和长效（多西环素、米诺环素）。

▲氯霉素类、林克霉素类：能与细菌核蛋白体50s亚基结合，使蛋白质合成呈可逆性抑制。

▲糖肽类：属于杀菌剂，能与一个或多个肽聚糖合成中间产物形成复合物，阻断肽聚糖合成，阻止细胞壁合成。包括万古

霉素、去甲万古霉素、替考拉宁、多粘菌素、杆菌肽等。

♦大环内酯类的抗生素是抑菌剂。

二、抗菌药物敏感试验方法

▲细菌多抗菌药物的敏感分为三种现象：敏感（S）、耐药（R）、中介⑴。

（-）扩散法（K-B法）

1、目前常用的方法，是一种半定量的方法。采用的接种方法是平板涂布法。

2、抑菌圈的大小可以反映待检菌对测定药物的敏感程度，与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈

愈大，MIC愈小。

3、含药纸片贴于含菌琼脂表面时应注意：①各纸片中心距离不小于24mm,纸片距平板内缘应大于15mm;②一旦碰

触培养基就不可再动；③平板最好单独平放，不超过两个叠放。

4、采用标准菌株是进行质控的主要措施。

♦金黄色葡萄球菌ATCC25923,大肠埃希菌ATCC25922,铜绿假单胞菌ATCC27853,粪肠球菌ATCC29212或

ATCC33186。

5、纸片扩散法的培养基要求其pH值为7.2~7.4,过高或过低的pH值会影响药物效能。碱性可扩大氨基糖普类药物的

抑菌圈，酸性可扩大四环素类药物的抑菌圈。

★其他高频考点

1、MBC为最低杀菌浓度。

2、体外联合药物敏感试验的FIC（部分抑菌浓度指数）：FIC指数＜0.5协同作用；FIC指数0.5~1相加作用；FIC指数

1-2无关作用；FIC指数＞2拮抗作用。

3、抗结核分枝杆菌的首选一线药物是异烟肿、利福平。

4、产ESBL菌株临床上用卜内酰胺类抗生素（青霉素类、头袍菌素类及氨曲南）治疗无效。

5、耐甲氧西林金葡菌（MRSA）用如内酰胺类抗生素治疗无效。

6、产AmpC酶菌株对*内酰胺类抗生素（青霉素类、头抱菌素类及氨曲南）及含酶抑制剂复合制剂耐药。治疗有效的

药物主要有碳青霉烯类（亚胺培南）和第四代头（头抱咄后、头抱匹罗）以及某些暧酮类和氨基糖甘类抗生素。

7、药敏试验时，采用的菌液浓度为0.5麦氏比浊度，相当于L5xlOA8/ml含菌量。

第六章各菌属特征汇总

•葡萄球菌属

1、葡萄球均属是一类触酶试验阳性的革兰阳性（G'）球菌，无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。包括金黄色、表皮、

腐生、溶血葡萄球菌。

2、葡萄球菌触和链球菌鉴别用触酶试验，葡萄球菌触酶阳性，链球菌是阴性。

3、葡萄球菌的致病性用凝固酶试验，致病性葡萄糖球菌为阳性，还可以分解甘露醇产酸，耐热DNA酶阳性。主要见于

金黄色葡萄球菌。

4、葡萄球菌的细胞壁上有葡萄球菌A蛋白（SPA）,可以与人类IgG的Fc段结合，可进行协同凝集试验。

5、葡萄球菌抵抗力强，耐热、耐干燥、耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。

6、耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）,耐甲氧西林的表葡菌（MRSE）,耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（VRSA）,耐万古霉

素的表皮葡萄球菌（VRSE）,MRSA的首选抗生素为万古霉素。

7、表皮葡萄球菌为医院感染的重要病原菌，它是导致血培养污染的常见细菌之一。

8、腐生葡萄球菌是导致尿路感染的常见病原菌之一。

★看到凝固酶、耐热DNA酶阳性，就选金黄色葡萄糖球菌。

・链球菌属

1、链球菌属是一大群触酶试验阴性、在液体培养基上呈链状排列的革兰阳性（G'）球菌，但在陈旧培养基或被吞噬细胞

吞噬后常呈革兰阴性（G）。无鞭毛、无芽胞。

2、肺炎链球菌矛头状排列，由于其能产生自溶酶，菌落呈脐窝状，鉴别试验：奥普托欣试验（Optochin）,阳性、胆汁

溶菌试验阳性、荚膜肿胀试验阳性、草绿色溶血圈。本菌是社区获得性肺炎的最常见病原菌。

3、A群链球菌用杆菌肽试验鉴别，为阳性。可产生溶血素和红疹毒素，前者在血平板上形成出溶血环，后者引起猩红热。

对人类有致病性的90%属A群。

4、B群链球菌可以水解马尿酸和CAMP试验阳性。

5、D群链球菌七叶昔试验阳性。

6、草绿色链球菌是引起亚急性心内膜炎最常见的病原菌。

7、链球菌感染引起的变态反应疾病为风湿热、肾小球肾炎，为HI。

8、化脓性链球菌产生的酶有脱氧核糖核酸酶（链道酶）、透明质酸酶（扩散因子）、链激酶（溶解纤维蛋白酶）。因为有这

几种酶的的产生，化脓性链球菌感染的病灶范围广、脓液稀薄、边界不清。

9、根据溶血现象的不同，将链球菌分为甲型溶血性链球菌（a溶血）、乙型溶血性链球菌犀溶血）、丙型溶血性链球菌

（Y溶血）。

•肠球菌属

1、肠球菌属是肠道的正常栖居菌。G+,成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜，部分肠球菌有稀疏鞭毛。

2、肠球菌能在高盐（6.5%NaCI）、高碱（pH9.6）、40%胆汁培养基上和10。045久环境下生长；

•奈瑟菌属

1、G-,呈肾形，坦面相对，双球菌，存在于中性粒细胞内（或胞外），无鞭毛，无芽胞，有菌毛。专性需氧，氧化酶阳

性。

2、在血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂，置5%~10%C02环境中，35久培养18~24h后可见圆形、灰褐色、湿润、

光滑、边缘整齐、直径1~2mm的小菌落。

3、淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌用麦芽糖发酵试验区别，前者不发酵乳糖，后者发酵乳糖。

4、奈瑟菌属初次分离需要5%-10%二氧化碳。营养要求高，要用巧克力平板。

5、脑膜炎奈瑟菌定植于鼻咽部，弓I起流脑，少数还可引起败血症。

6、淋病奈瑟菌人类是唯一宿主。怀疑奈瑟菌感染，标本需保温保湿送检。

♦卡他布兰汉菌：氧化酶和触酶阳性，产DNA酶，大部分菌株还原硝酸盐和亚硝酸盐，营养要求不高，在普通培养基上

18~2(yC即可生长，借此可与奈瑟菌属相鉴别。

・肠杆菌科

1、肠杆菌科共同特征：革兰氏阴性杆菌、氧化酶阴性、触酶和硝酸盐还原试验为阳性。

2、肠杆菌中志贺、克雷伯、鼠疫耶尔菌属、日EC没有鞭毛，也就是说它们的动力阴性。

3、0抗原和H抗原是肠杆菌科分群及分型的依据，

4、乳糖发酵是区别致病性与非致病性，致病性不发酵乳糖，非致病性发酵乳糖。

・埃希菌属

1、G-,短杆菌，多数有周鞭毛，有菌毛，有英膜或微荚膜。兼性厌氧菌。

2、大肠埃希菌在EMB平板上是带有金属光泽呈蓝紫色的菌落，麦康凯和SS琼脂上呈粉红色菌落。双糖铁发酵管(KIA)

产酸产气，IMViC试验结果++--。

5、大肠埃希菌肠道外感染以尿系统感染为主，常见肾盂肾炎。

肠道内感染：(1)产毒素性(ETEC):主要引起旅游者腹泻、婴儿腹泻。

(2)肠致病性(EPEC)：婴儿腹泻。

(3)肠侵袭性(EIEC):类似志贺菌肠炎的症状。里急后重。

(4)肠出血性(EHEC):常见血清型0157：H7,引起出血性肠炎，主要见于婴幼儿，还可引起溶血性尿毒症。

(5)肠粘附性(EaggEC):婴儿急性水样腹泻。

•志贺菌属

1、G-,短小杆菌,无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛。需氧或兼性厌氧。

2、志贺菌属是细菌性痢疾最常见的病原菌，中国最常见的是福氏(B群)和宋氏(D群)。

3、志贺菌属用SS培养基或中国蓝（麦康凯）平板，菌落为红色或粉红色。

4、由于志贺菌没有鞭毛，所以它没有H抗原，有。抗原、K抗原。

5、志贺菌引起的腹泻常为里急后重。

•沙门菌属

1、G-,直杆菌，无芽胞，无荚膜，周鞭毛（除鸡沙门菌），多数有菌毛。

2、SS琼脂和麦康凯琼脂培养基：约2~4mm的透明或半透明菌落，对胆盐耐受。产H2s者在SS琼脂上形成黑色中心

菌落。

3、伤寒沙门菌的抗原主要包括菌体（0）抗原、鞭毛（H）抗原和表面（Vi）抗原。

4、伤寒沙门菌检测用肥达试验：用已知的伤寒沙门菌0、H抗原，副伤寒甲、乙H抗原稀释后与被检血清作定量凝集

试验，以检测患者血清中抗体的含量，来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热症并判别沙门菌的种类。

5、菌体（0）抗原刺激机体产生的抗体以IgM为主，H抗原则以IgG为主。

6、伤寒沙门菌感染1周取血液标本，2~3周取粪便，3周以后取尿液。

7、所致疾病：肠热症，即伤寒与副伤寒病、食物中毒、慢