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文档简介
第一章微生物绪论常见考点
第一章绪论
一、微生物的分类及命名
1、微生物的分类等级为界、门、纲、目、科、属、种,种是最基本的分类单位。目前国际上普遍采用的分类系统是伯杰
分类系统。
2、根据微生物的大小、结构和组成不同,分为三大类型:
(1)非细胞型微生物:此类微生物无细胞结构,由一种核酸和蛋白衣壳组成,必须寄生在活细胞内才能生长繁殖。如病
毒、类病毒和阮病毒(又称麻粒)。
(2)原核细胞型微生物:此类微生物由单细胞组成,细胞核分化程度低,无核膜、核仁,染色体为裸露的DNA分子,
缺乏完整的细胞器。如细菌、支原体、衣原体、立克次体和螺旋体。
(3)真核细胞型微生物:此类微生物细胞核分化程度高,有核膜、核仁、完整的细胞器。如真菌、单细胞藻类。
3、每种细菌DNA中的G(鸟喋吟)+C(胞口密咤)含量摩尔百分比有一定范围,变化不大,DNA(G+C)mol%可以作
为细菌分类的一个重要依据。
4、微生物命名由属名和种名组成,中文命名种名在前,属名在后。拉丁文则相反。
如:Mycobacteriumtuberculosis
中文名:种名+属名
例:结核分枝杆菌
二、微生物的发展
1、荷兰人列文虎克发明了显微镜,人类第一次观察到微生物。
2、法国科学家巴斯德被称为“微生物学之父"。
3、1929年,弗莱明发现了青霉素。1940年Florey和Chain将青霉素分离提纯,应用于临床。
5、德国医生郭霍证明了微生物是传染病的致病因子。
第二章细菌的基本性状常见考点
一、细菌的形态与结构
(-)细菌的大小和形态
1、细菌个体微小,通常以微米作为测量单位。
2、细菌的基本形态有三类:球菌、杆菌、螺形菌。
(二)细菌的基本结构
1、细菌的基本结构由外向内依次是细胞壁、细胞膜、细胞质和核质。
2、根据细胞壁的化学组成与结构不同,用革兰染色将细菌分为G,和G两大类。
3、磷壁酸是革兰阳性菌细胞壁特有的结构,壁磷壁酸为革兰阳性菌的重要表面抗原,膜磷壁酸为黏附因子。
4、外膜层是革兰阴性菌特细胞壁的特殊成分,从外向内依次是脂多糖、脂质双层、脂蛋白。其中脂多糖是革兰阴性菌内
毒素,脂质A是内毒素的主要毒性部分。
5、由于革兰阴性菌和革兰阳性菌细胞壁组成成分的不同,两者对药物的敏感性也不一样。革兰阳性菌细胞壁有五肽交联
桥,是青霉素作用的部位。
a5-2-1革兰阳性菌与阴性菌细胞壁结构比较
结构革兰阳性菌革兰阴性菌
肽聚糖组成聚糖骨架、四肽侧链、五肽交联桥聚糖骨架、四肽侧链
层数可达50层仅1〜2层
含量占细胞壁干重的50%〜80%占细胞壁干重的5%〜10%
机械强度强,较坚韧差,较疏松
磷壁酸有无
外膜无有
周浆间隙无有
6、中介体:又称中间体,是细胞膜内陷折叠而成的管状囊状结构。其功能类似真核细胞的线粒体,故有人称之为类线粒
体。
7、质粒:是细菌染色体(核质)以外的遗传物质,为双链闭环DNA分子,携带遗传信息,控制细菌某些特定的遗传性
状。F质粒控制性菌毛的产生、R质粒与细菌的耐药性有关。
(二)细菌的特殊结构
1、鞭毛:细菌的运动器官,是由细胞质伸出的蛋白性丝状物。
2、菌毛:主要出现在革兰阴性菌中。分为性菌毛和普通菌毛。
仅少数革兰阴性细菌具有性菌毛,较普通菌毛少,只有1~4根,比普通菌毛长且粗,呈中空管状,是两菌之间传递遗
传物质的通道。带有性菌毛的细菌称为F+菌或雄性菌,无菌毛的细菌称为F-菌或雌性菌。细菌的耐药性及某些毒力因子
均可通过这种方式转移。
3、荚膜:通常在机体内和营养物质丰富的环境中形成,在细胞壁外包绕的一层界限分明,且不易被洗脱的黏稠性物质。
4、芽胞:主要为革兰阳性杆菌在一定条件下细胞质、核质浓缩脱水而形成的一个遮光性很强、具有多层膜状结构、通透
性很低的圆形或卵圆形小体。
▲细菌L型即为细菌细胞壁缺陷型。在人工诱导(少量青霉素、头孑包菌素存在)或自然情况下,细菌L型在体内或体
外均可产生。
细菌L型在含血清的高渗低琼脂培养基中能缓慢生长,可形成"油煎蛋"样菌落(典型L型细菌):菌落较小,中心
致密并深陷人琼脂中;四周较薄,由透明的颗粒组成,在低倍镜下观察菌落呈"油煎蛋"状。
细菌L型保留了亲代的遗传特性,可返祖,可致病。
二、细菌的生理
1、细菌的基本化学组成:水、无机盐、蛋白质、糖类、脂类、核酸(细菌含有RNA和DNA两种核酸)。
2、细菌有带电现象,革兰阳性菌的等电点约为pH2~3,革兰阴性菌的等电点约为pH4~5。
(-)细菌的生长繁殖、控制、遗传及变异
1、细菌根据营养类型的不同,分为自养菌(以无机物作为原料)和异养菌,异氧菌又根据所需营养物质的不同分为腐生
菌(以无生命的有机物作为原料)和寄生菌(以宿主体内的有机物作为原料)。
2、细菌生长繁殖的主要条件有:
(1)充足的营养物质:水、碳源、氮源、无机盐、生长因子。
(2)合适的pH:大多数细菌的最适pH为7.2~7.6,有个别例外,结核分支杆菌在pH6.4~6.8、霍乱弧菌在pH8.4~
9.2的环境中生长最好。
(3)合适的温度:35~37℃
(4)必要的气体
根据细菌对氧气需求不一,分为:
①需氧菌:必须在有氧(空气)的情况下才能生长。
②微需氧菌:在5%~6%的低氧环境中才能生长。
③厌氧菌:必须在无氧的环境中才能生长。
④兼性厌氧菌:在有氧和无氧环境中均能生长。
3、细菌生长繁殖的规律
(1)细菌一般一无性二分裂的方式繁殖。
(2)大多数细菌20~30分钟繁殖一代,结核需要18~20小时才繁殖一代。
(3)细菌的生长曲线分为四个时期:
①迟缓期:适应阶段,此阶段细菌几乎不繁殖。一般约1~4小时。
②对数期:细菌的形态、染色性、生理活性都较典型,可以用来观察细菌的大小、形态、染色性、对抗菌药物的敏感性等。
一般约8~18小时。
③稳定期:细菌繁殖数与死亡数大致平衡。
④衰亡期:细菌死亡逐渐增多,死菌数超过活菌数。
4、细菌合成代谢的产物主要有:热原质、毒素(革兰阳性菌合成外毒素、革兰阴性菌合成内毒素)、侵袭性酶类、色素、
抗生素、细菌素、维生素。
▲我国规定生活饮用水的标准是:1ml水中的细菌总数不超过lOOcfu;100ml水中不得检出大肠埃希菌。
5、细菌的控制:
(1)消毒:杀死物体上的病原微生物但不一定杀死细菌芽胞的方法。
(2)灭菌:杀灭物体上所有的微生物,包括细菌芽泡。
(3)防腐:防止或抑制微生物生长繁殖的方法。
(4)无菌和无菌操作:无菌是指没有活的微生物存在。防止微生物进入机体或者其他操作对象的方法称为无菌操作。
(5)高压蒸汽灭菌法的压力为103.4kPa,温度为121.3q维持15-30分钟。检测高压蒸汽灭菌效果的细菌是嗜热枯
草芽抱杆菌。
(6)用于牛奶等物品的消毒方法是巴氏消毒法。
(7)紫外线杀菌的主要机制是干扰DNA的复制。
6、正常情况下,人体与外界相同的器官都有细菌,机体的胃、骨骼、肌肉、血液、脑等无菌。滥用抗生素会导致菌群失
调而发生一系列的病理反应。
7、细菌常见的变异现象:
(1)形态与结构变异:如细菌L型。①荚膜变异,从有到无;②鞭毛变异(H-0变异),从有到无;③芽胞变异,从有
到无。
(2)菌落变异:S-R变异,细菌菌落光滑型与粗造型之间的变异。
(3)毒力变异:包括毒力加强和毒力减弱。
(4)抗原变异
(5)耐药性变异:细菌对某种药物从敏感变为不敏感。
(6)酶活性变异
(7)生化特性的变异
8、细菌的R质粒是耐药质粒,可通过细菌间的接合或通过噬菌体进行传递。
9、细菌基因转移与重组的方式有转化、接合、转导、溶原性转换、原生质融合等。
(1)转化:是受体菌直接摄取供体菌提供的游离DNA片段整合重组,使受体菌的性状发生变异的过程。
(2)转导:是以噬菌体为媒介,将供体菌的基因转移到受体菌内,导致受体菌基因改变的过程。
(3)接合:受体菌和供体菌直接接触,供体菌通过性菌毛将所带有的F质粒或类似遗传物质转移至受体菌的过程。
(4)溶原性转换:是噬菌体的DNA与细菌染色体重组,使宿主菌遗传结构发生改变而引起的遗传型变异。
(5)原生质体融合:两种经过处理失去细胞壁的原生质体混和可发生融合,融合后的双倍体细胞可发生细菌染色体间的
重组。
10、细菌的主要遗传物质是染色体,为一条环状闭合的双螺旋DNA。质粒也是细菌的遗传物质。但不是主要遗传物质。
第三章微生物致病性与感染常见考点
1、病原微生物能否致病与病原体的毒力、数量、侵入么户、机体的免疫力、环境因素等密切相关。
2、细菌分泌的侵袭性酶类主要有:
(1)透明质酸酶:分解结缔组织的透明质酸,易于细菌扩散。
(2)胶原酶:分解细胞外基质的胶原蛋白。
(3)神经氨酸酶:分解肠黏膜上皮细胞的细胞间质。
(4)磷脂酶:可水解细胞膜的磷脂,破坏组织细胞。
(5)卵磷脂酶:分解细胞膜的卵磷脂。
(6)激酶:将血纤维蛋白酶原激活为纤维蛋白酶,以分解纤维蛋白,防止形成血凝块。
(7)凝固酶:使血浆发生凝固,保护细菌不被吞噬细胞吞噬和杀灭。
(8)IgA蛋白酶:与细菌的黏附有关。
3、细菌毒素根据来源、性质和作用特点不同分为外毒素和内毒素。
(1)外毒素的特性:①主要是革兰阳性菌产生;②具有菌种特异性;③毒性作用强;④毒性作用有组织选择性;⑤具有
良好的免疫原性:外毒素经过0.4%的甲醛处理可失去毒性但仍保持免疫原性变为类毒素,可刺激几天产生抗毒素;⑥不
耐热;⑦都是蛋白质,易被酸及蛋白水解酶灭活。
(2)内毒素的特性:①主要是革兰阴性菌产生;②化学性质是脂多糖;③抵抗力强,耐热、耐酸、耐碱、耐强氧化剂;
④细菌死亡溶解后释放;⑤毒性及免疫原性均较外毒素弱,不能用甲醛处理成类毒素。
4、内毒素的主要生物学活性有致热作用、白细胞增多、感染性休克、DIC等。
5、细菌全身感染在临床上常见以下几种情况:
(1)毒血症:致病菌不进入血液循环,但其产生的外毒素入血。
(2)菌血症:致病菌侵入血流,但不在其生长繁殖.
(3)败血症:致病菌侵入血流,在其中大量繁殖并产生毒性物质。
(4)脓毒血症:化脓性细菌侵入血流,并在其大量繁殖。
(5)内毒素血症:革兰阴性细菌侵入血流,并在其大量繁殖,崩解后释放大量内毒素。
第四章细菌检验技术常见考点
一、细菌染色标本镜检
▲染色标本检查的基本程序是涂片、干燥、固定、染色、镜检。
(-)革兰染色
1、革兰染色为两种染料先后进行染色,为复染色法。
2、染液:结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、稀释苯酚复红液或沙黄。
3、染色步骤:初染lmin(结晶紫)一流水冲洗一媒染lmin(卢戈碘液)一流水冲洗一脱色20-30s(95%乙醇)一流
水冲洗一复染0.5-lmin(稀释苯酚复红液或沙黄)一流水冲洗―干燥—镜检
4、意义:鉴别细菌、指导用药、指导临床治疗。
5、结果判定:染紫色为革兰阳性,染红色为革兰阴性。
(-)抗酸染色
1、抗酸染色也是两种染料先后染色,也是复染色法。
2、染液:苯酚复红、3%盐酸酒精、吕氏碱性亚甲蓝
3、染色步骤:初染5~8min(苯酚复红加热)一流水冲洗一脱色(3%盐酸酒精)一流水冲洗一复染lmin(吕氏亚甲
蓝)一流水冲洗一干燥一镜检
4、注意事项:①苯酚加热冒气即可,切勿煮沸或煮干;②脱色要脱到无红色染液脱下为止。③痰标本需要经过酸或碱处
理后,使痰液化后接种。
5、临床意义:一般用于分枝杆菌属的检查,如结核分枝杆菌、麻风杆菌等。
6、结果判定:染成红色为抗酸菌,染成蓝色为非抗酸菌。
二、细菌不染色标本镜检
▲压滴法、悬滴法、暗视野聚光法均用于观察细菌动力。暗视野聚光法使用暗视野显微镜可观察螺旋体及其动力。
三、细菌接种与培养技术
1、液体培养基是在肉浸液中加入1%蛋白陈和0.5%NaCI,调pH至7.4,蛋白月东的作用为提供细菌生长繁殖所需的氮
源。
2、半固体培养基是在液体培养基中加入0.2%~0.5的琼脂。
3、固体培养基是在液体培养基中加入2%~3%的琼脂。
4、细菌L型的培养基必须采用高渗(3%~5%NaCk10%~20%蔗糖等)低琼脂培养基。
5、制备好的培养基放于4。(:活冷暗处一般可以保存一周,最多不超过2周。
6、平板划线接种法一般用于含有多种细菌的标本,利用此接种法可以得到单个菌落,分为分区划线法和连续划线法。
7、分区划线法下一区应与上一区接触3~4次,此方法多用于含菌量多的标本,如粪便、浓汁、痰液等标本。连续划线
法多用于含菌量少的标本。
8、斜面接种法主要用于纯种增菌及保留菌种或生化反应。
9、穿刺接种法可用于观察细菌动力,有鞭毛的细菌可沿穿刺线扩散生长。
10、液体接种法多用于普通肉汤、蛋白月东水等液体培养基接种。
11、细菌在液体培养基上的生长现象有三种,分别是:①混浊(大多数细菌);②沉淀(链状生长的细菌,如链球菌、炭
疽芽胞杆菌等);③菌膜(专性需氧菌,如铜绿假单胞菌等)。
12、血琼脂上的溶血现象:
a溶血:又叫草绿色溶血,菌落周围血培养基变为绿色环状。
B溶血:又称完全溶血,菌落周围形成一个完全清晰透明的环。
Y溶血:即不溶血,菌落周围的培养基没有变化;红细胞没有溶解或无缺损。
双环:上层溶血环,内层为。溶血,外层为a溶血。如产气荚膜梭菌。
13、倾注平板法用于水、牛乳、饮料及尿液等液体标本的细菌计数。
14、常用的厌氧培养法有:①疱肉培养基法;②焦性没食子酸法;③厌氧罐法;④气袋法;⑤厌氧手套箱法,⑥气体喷
射法。
15、最常用的营养培养基:血平板和巧克力平板。
16、鉴别培养基:如糖发酵管、三糖铁培养基、枸椽酸盐培养基、克氏双糖铁琼脂(KIA)、伊红-美蓝琼脂和动力小引
噪-尿素(MIU)等培养基。
17、选择培养基:在培养基中加入某种化学成分或抗生素以抑制某些细菌的生长,而有助于需要的细菌生长,此培养基
称为选择培养基。如SS琼脂,其中的胆盐能抑制革兰阳性菌,因而使沙门菌、志贺菌容易得到分离。
18、增菌培养基:如乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌的生长需含血液或血清的培养基;霍乱弧菌的增菌常用碱性蛋白陈
水。
19、特殊培养基:包括厌氧培养基和细菌L型培养基。疏基乙醇酸钠是特殊培养基。厌氧培养基如疱肉培养基;细菌L
型培养基是针对细胞壁缺陷的细菌L型,由于胞内渗透压较高,培养基必须采用高渗低琼脂培养基。
20、细菌血液培养使用的抗凝剂为聚苯乙烯磺酸钠(SPS)。
四、细菌生化鉴定技术
(-)碳水化合物代谢试验
1、碳水化合物代谢试验包括:糖(醇、昔)类发酵试验、葡萄糖氧化/发酵试验、甲基红试验(MR)、V-P试验、如半乳
糖苗酶试验(ONPG)、七叶昔水解试验。
2、甲基红试验的原理是细菌发酵葡萄糖产酸,使培养基pH下降至4.5以下,加入甲基指示剂变红为试验阳性。
3、V-P试验出现红色为阳性,ONPG出现黄色为阳性,七叶甘水解试验出现黑色为阳性。V-P试验常与甲基红试验一起
使用,因为前者阳性的细菌,后者通常为阴性。
4、七叶音水解试验主要用于D族链球菌与其他链球菌的鉴别,前者为阳性(黑色)。
细菌的生物化学试验
•I碳水化合物的代谢试验
•1.糖(醇、昔)类发酵试验
原理:由于各种细菌含有发酵不同糖(爵、音)
类的酶,故分解糖类的能力不同,分解糖类后的终
末产物亦不一致,有的产酸、产气,有的仅产酸,故
可利用此特点以鉴别细菌。
培养基:在培养基中加入0.5%〜1%的糖类(单糖
、双糖或多糖)、醇类(甘露醇、肌醇等)、音类(反应型开放管封闭管
水杨普等)。产碱型--
应用:是鉴定细菌最主要和最基本的试验,特别氧化型+-
对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要.发酗型++
3.0-半乳糖昔酶试验(ONPG试验)
-2.氧化-发酵试验(0/F试验)
迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性,而
氧化型:仅在有氧环境中分解葡萄糖
不发酵乳糖的细菌为阴性。
发酵型:在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖
本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。
产碱型:在有氧或无氧环境中都不能分解葡萄糖
4.七叶音水解试验
培养基:HL(Hugh-Leifson)培养基
培养基:七叶苔培养基、胆汁七叶昔培养基。
结果:培养基变为黑色为阳性,不变色者为阴性。
应用:肠杆菌科(发酵型),非发酵菌(产碱和氧化型)应用:,要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别。
葡萄球菌(发酵型),微球菌(氧化型)
细菌的生物化学试验
碳水化合物的代谢试验
5.甲基红试验原理:由于细菌各自具有不同的酶系统,对糖的分解能
培养基:葡萄糖蛋白陈水培养基力不同,有的能分解某些糖产生酸和气体,有的虽能分
结果:呈现红色为阳性;橘红色为弱阳性;黄
解糖产生酸,但不产生气体,有的则不分解糖。据此可
色为阴性。
应用:大肠埃希菌、沙门菌属、志贺菌属、枸对分解产物进行检测从而鉴别细菌。
椽酸杆菌属、变形杆菌属(+)
产气肠杆菌、哈夫尼亚菌属。
6.V-P试验■氧酵各种糖醇甘,;
培养基:葡萄糖蛋白陈水培养基
结果:在数分钟内出现红色为阳性;如无红色
出现且于35℃4h后仍如故者即为阴性。'贝塔半乳糖甘酶。
应用:本试验常与甲基红试验一起使用,因为
前者阳性的细菌,后者通常为阴性。■VP相反甲基红,
■D链七叶昔发黑。
(~)蛋白质和氨基酸代谢试验
1、蛋白质和氨基酸代谢试验包括:靛基质(口引喙)试验、硫化氢试验、尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验、氨基酸脱竣
酶试验。
2、口即朵试验是由于细菌有色氨酸酶,可以分解色氨酸而产生叫口朵,与对二甲基苯甲醛反应生成红色化合物,本试验呈现
红色为阳性。
3、硫化氢试验是细菌能分解含硫氨基酸,产生的H2s与Fe2+反应呈黑色为阳性。主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。
如沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸檬酸杆菌属、变形杆菌属细菌,绝大多数硫化氢阳性,其他菌属阴性。沙门
菌属中也有硫化氢阴性菌种。
4、尿素酶试验是细菌分解尿素生成氨,使培养基呈碱性,指示剂变红为阳性。
5、苯丙氨酸脱氨酶的阳性结果为绿色,氨基酸脱樱酶的阳性结果为培养基从黄色变为紫色。
■蛋白质和氨基酸的代谢试验2.咛I噪(靛基质)试验
1.明胶液化试验培养基:蛋白陈水培养基
方法:将被检菌穿刺接种于明胶培养基,于22℃培方法:将待检菌接种于上述培养基中,于35℃
养7d,逐日观察结果。若用35℃孵育,因明胶在此温度培养24〜48h,沿试管壁慢慢加入用|噪试剂。
下自行液化,故在观察结果前,先置4℃冰箱内30min,结果:于两者液面接触处出现红色为阳性,无
再看结果。色为阴性.
应用:主要用于肠杆菌科细菌的鉴定.
结果:培养基呈液化状态为阳性大肠埃希氏菌阳性,沙门菌阴性
应用:
■肠杆菌科细菌的鉴别:沙雷菌、普通变形杆形、奇异变
形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶,而其他细菌很少液小
明腔.
■厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。
多数假单胞菌也能液化明胶。
-3.硫化氢试验■4.尿素分解试验
培养基:醋酸铅培养基原理:
方法:将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基,于
35℃培养24〜48h观察结果。培养基:尿素培养基
结果:培养基变黑为阳性.不变为阴性,方法:将待检菌接种于尿素培养基,于35℃培
羔18〜銮结臭_
结果:培养基呈鼠性,使酚红指示剂变红为阳
应用:主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。如
沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸檬酸杆性,不变为阴性。
菌属、变形杆菌属细菌,绝大多数硫化氢阳性,其应用:主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的
他菌属阴性。沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。鉴定.奇异变形杆菌和普通变形杆菌脉酶阳性。另
外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性,而斯氏和产碱
普罗威登菌阴性。
•5.苯丙氨酸脱氨酶试验氨基酸脱竣酶试验
培养基:苯丙氨酸琼脂培养基培养基:氨基酸脱段酶培养基和氨基酸对照培养基
方法:将被检菌浓厚接种于苯丙氨酸琼脂培养方法:将被检菌分别接种于赖氨酸(或鸟氨酸或精
基斜面上,于35℃培养18〜24h,滴加10%三氯化氨酸)培养基和氨基酸对照培养基中,并加入无菌
铁试剂3〜4滴,自斜面上方流下。液体石蜡或矿物油,于35℃培养1〜4d,每日观察
结果:应立即观察结果,出现绿色为阳性.结果。
应用:主要用于肠杆菌科细菌的鉴定.3果:对照管应呈黄色,测定管呈紫色(指示
-变形杆菌、普罗维斯登菌属和摩根菌属阳性剂为溟甲酚紫)为阳性,若测定管呈黄色为阴性。
•肠杆菌种中其他细菌阴性若对照管呈现紫色则试验无意义,不能作出判断。
应用:主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。如沙门
菌属中除伤寒和鸡沙门菌外,其余沙门菌的赖氨酸
和鸟氨酸脱段酶均为阳性,志贺菌属除宋内和鲍氏
志贺菌外,其他志贺菌均为阴性。
(三)碳源利用试验
1、碳源利用试验包括枸椽酸盐利用试验和丙二酸盐利用试验。
2、枸檬酸盐利用试验的阳性结果为深蓝色,阴性为绿色。
3、丙二酸盐利用试验的阳性结果为深蓝色。
4、枸椽酸盐利用试验在肠杆菌科中埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性,沙门菌属、克雷伯菌属通
常为阳性。
■碳源和氮源利用试验2.丙二酸盐利用试验
细菌对单一来源的碳源利用的鉴定试验。培养基:丙二酸盐培养基
1.枸檬酸盐利用试验方法:将被检菌接种于培养基,35℃培养24〜
培养基:枸檬酸盐培养基
方法:将被检菌接种于枸椽酸盐培养基,于结果:培算基由淡绿色变为深蓝色为阳性,颜
35℃培养1〜4d,每日观察结果。色无变化为阴性,
结果:由淡绿色变为深蓝色为阳性;不能利用应用:肠杆菌科中属间及种的鉴别。克雷伯菌
枸椽酸盐作为碳源的细菌,在此培养基上不能生长属为阳性,枸椽酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌
,培养基则不变色,为阴性。属中有些菌种也呈阳性.其他菌属均为阴性u
■应用:用于肠杆菌科中菌属间的鉴定:在肠杆菌科
中一希茵属、志「志属、帝蕉乡南属和耶尔森菌屋
均为阴性,沙门菌属、克雷伯菌属通常为阳性。
(四)酶类试验
1、触酶试验:细菌能催化过氧化氢生成水和氧气,出现气泡为阳性。
2、氧化酶试验:某些细菌具有细胞色素氧化酶,能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺氧化成红色的化合物,出现红色
为阳性。
3、凝固酶试验:主要用于金黄色葡萄球菌的鉴定。
4、DNA酶试验:细菌产生DNA酶分解DNA,是菌落周围出现透明环。葡萄球菌、沙雷菌、变形杆菌均为阳性。
5、硝酸盐还原试验:出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反应,可能是:①硝酸盐没有被还原,试验阴性;②硝酸盐
被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果,这时应在试管内加入少许锌粉(还原剂),如出现红色则表明试验确实为
阴性。若仍不产生红色,表示试验为假阴性。
■各种酶类试验3.硝酸盐还原试验
1.氧化酶试验(变色)培养基:硝酸盐培养基
试剂:1%盐酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺试剂:甲液(对氨基苯磺酸);乙液(a•蔡胺)
方法:被检菌接种于硝酸盐培养基中,于35℃培
养1〜45将甲、乙液等量混合后(约力口
结果:细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色,为阳性。
入培养基内,立即观察结果。
为保证结果的准确性,分别以铜绿假单胞菌和大肠埃
希菌作为阳性和阴性对照.结果:出现红色为阳性。
若加入试剂后无颜色反应,可能是:
■假单胞菌、奈瑟菌属、莫拉菌属阳性
①硝酸盐没有被还原,试验阴性;
•肠杆菌科细菌阴性②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假
2.过氧化氢酶试验(触醵试验)冒泡阴性结果,这时应在试管内加入少许锌粉,如出现
试剂:3%过氧化氢溶液红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色,表
示试验为假阴性。检查有无氮气产生在试管内加入
方法:取槽置于洁净的试管内或玻片上,然后加3%过氧
倒置小管一只,有气泡表示有氮气产生。
化氢数滴;或直接滴加3%过氧化氢于不含血液的细
菌培养物中,立即观察结果。应用:
结果:有大量气泡产生者为阳性.不产生气泡者为阴性。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐:
铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产
应用:故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。
生氮气;有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。
葡萄球菌、豚球菌阳性
链球菌属球性
-4.脂酶试验(梭菌+)6.DNA酶试验
培养基:脂酶培养基(含维多利亚蓝)培养基:0.2%DNA琼脂平板。
方法:将被检菌接种于上述培养基中,于37℃方法:将被检菌点种于上述平板上,于35℃培
培养24h。养18〜24h,然后用1mol/L盐酸覆盖平板,观察结
结果:培养基变为蓝色为阳性,阴性为粉红色果。
或无色。结果:在菌落周围出现透明环为阳性,无透明
应用:主要用于厌氧菌的鉴别。环为阴性,
类杆菌属中的中间类杆菌产生脂酹,其他类杆应用:在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌
菌则阴性;产生DNA酹;用于革兰氏阴性《球菌中卡他布兰汉
芽胞梭菌属中产气芽胞梭菌、肉毒梭菌和诺维菌(阳性)与奈瑟菌属的鉴别,
梭菌为阳性,而其他梭菌阴性。在肠杆菌科中沙雷菌和变形杆菌产生此酶,
5.卵磷脂酶试验7.凝固醇试验
培养基:1%卵黄琼脂平板试管法:取试管2支,各加0.5ml人或兔血浆,
方法:将被检菌划线接种于卵黄琼脂平板上,挑取被检菌和阳性对照菌分别加入血浆中并混匀,
35℃培养3〜6h,于37℃水浴3〜4h。
结果:若3h后在菌落周围形成乳白色混浊环,结果:玻片法以血浆中有明显的颗粒出现而盐
即为阳性,6h后混浊环可扩展至5〜6mm。水中无自凝现象判为阳性;试管法以血浆凝固判为
应用:主要用于厌氧菌的鉴定。阳性。
产气荚膜梭菌、诺维梭菌产生此酹,其他梭菌应用:作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标,
为阴性。也是小黄色葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。
-这2个试验一起记忆均为鉴别厌氧菌的试验。
8.CAMP试验9.胆汁溶菌试验
原理:B群链球菌能产生CAMP因子,可促进原理:胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌,可能是由
葡萄球菌的缶溶血素溶解红细胞的活性,因此在两于胆汁降低细胞膜表面的张力,使细胞膜破损或使菌
菌(B群链球菌和葡萄球菌)的交界处溶血力增加体裂解;或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶
,出现矢形(半月形)的溶血区。过程,促使细菌发生自溶。
培养基:血琼脂平板试剂:10%去氧胆酸钠
方法:先以产溶血素的金黄色葡萄球菌划一方法:
横线接种于血琼脂平板上,再将被检菌与前一划线1)平板法:取10%去氧胆酸钠溶液一接种环,
作垂直划线接种,两线不能相交,相距0.5〜1cm,滴加于被测菌的菌落上,置35°C30min后观察结果.
于37℃培养18〜24h,观察结果。2)试管法:被检菌培养物2支,各0.9ml,分别
结果:在两划线交界处出现箭头样的溶血区为加入10%去氧胆酸钠溶液和生理盐水(对照管)0.1ml
阳性。,摇匀后置35℃水浴10〜30min,观察结果,
应用:在链球菌中,只有B群链球菌CAMP试结果:平板法以“菌落消失”判为阳性;
验阳性,故可作为特异性鉴定.试管法以“加胆盐的培养物变透明,而对照管仍混
浊”判为阳性.
应用:肺炎链球菌(阳性)
甲群链球菌(阴性)
(五)其他及药敏鉴定试验
1、CAMP试验:B群链球菌能产生CAMP因子,可促进葡萄球菌的田溶血素溶解红细胞的活性,因此在两菌(B群链
球菌和葡萄球菌)的交界处溶血力增加,出现箭头状或矢形(半月形)的溶血区。在链球菌中,只有B群链球菌CAMP
试验阳性,故可作为特异性鉴定。
2、胆汁溶菌试验:胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌,可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力,使细胞膜破损或使菌体裂解;
或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶过程,促使细菌发生自溶。
3、0/129抑菌试验:0/129抑菌试验为药敏试验,0/129(二氨基喋陡)对弧菌属细菌有抑制作用,而对气单胞菌属
细菌无抑制作用。
4、杆菌肽试验:A群链球菌对杆菌肽几乎全部敏感,而其他群链球菌绝大多数对其耐药。
5、奥普托欣(Optochin)试验:几乎所有肺炎链球菌对奥普托欣试验敏感,而奥普托欣试验对其他链球菌则无抑制作
用。
五、细菌毒力鉴定
▲内毒素
常采用蚩试验——内毒素激活量试剂中凝固酶原转变为凝固酶,凝固蛋白原生成凝固蛋白。
▲外毒素
常用体内及体外毒力试验检测,也用ELISA法测定。
第五章细菌对抗菌药物的敏感试验
一、临床常用抗菌药物
(-)B-内酰胺类
L常见药物主要是青霉素类、头狗菌素类和单环内酰胺类(氨曲南和卡芦莫南)。
2、作用机制:B-内酰胺类抗生素的作用机制相似,均是与青霉素结合蛋白(PBP)结合,抑制细菌细胞壁合成,致使细
菌死亡。
(~)氨基糖昔类
1、作用机制:①依靠离子的附作用,吸附在菌体表面,造成膜的损伤;②和细菌核糖体30s小亚基发生不可逆结合,抑
制mRNA的转录和蛋白质的合成,造成遗传密码的错读,产生无意义的蛋白质。
2、种类:①链霉菌属:如链霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龙霉素、新霉素;
②小单胞菌属:如庆大霉素、福提霉素;
③半合成氨基昔类:阿米卡星、奈替米星、地贝卡星等,氨基昔类抗菌药物对需氧G-杆菌有较强的抗菌活性,对G+
球菌有一定的活性。
(三)噗诺酮类
1、作用机制:①通过外膜孔蛋白和磷脂渗透进入细菌细胞;②作用于DNA旋转酶,干扰细菌DNA复制、修复和重组。
2、种类:①第一代:为窄谱抗菌药物,对G+球菌无作用;主要作用于大肠埃希菌,且迅速出现耐药,较少应用于临床。
②第二代:对G-和G+细菌均有作用;比较这类药的抗菌活性强度依次为环丙沙星、氧氟沙星、罗美沙星、氟罗沙星、
培氟沙星、诺氟沙星;
③第三代:对G+菌作用高于第二代的4~8倍,对厌氧菌亦有作用;司帕沙星、妥舒沙星、左氧氟沙星、加替沙星、格
帕沙星、莫西沙星等。
(四)大环内酯类
1、作用机制:可逆结合细菌核糖体50S大亚基的23S单位,抑制细菌蛋白质合成和肽链延伸;
2、种类:国内常用有红霉素、吉他霉素、麦迪霉素、乙酰螺旋霉素。新一代大环内酯类有克拉霉素、罗红霉素、地红霉
素、氟红霉素、阿奇霉素和乙酰麦迪霉素。
(五)其他抗菌药物
▲磺胺类:竞争性第与二氢叶酸合成酶结合,阻止核酸形成。
▲四环素类:阻止酰胺基转移酶RNA与mRNA核糖体的受体位点结合。分为短效(土霉素、四环素)、中效(地美环素、
美他环素)和长效(多西环素、米诺环素)。
▲氯霉素类、林克霉素类:能与细菌核蛋白体50s亚基结合,使蛋白质合成呈可逆性抑制。
▲糖肽类:属于杀菌剂,能与一个或多个肽聚糖合成中间产物形成复合物,阻断肽聚糖合成,阻止细胞壁合成。包括万古
霉素、去甲万古霉素、替考拉宁、多粘菌素、杆菌肽等。
♦大环内酯类的抗生素是抑菌剂。
二、抗菌药物敏感试验方法
▲细菌多抗菌药物的敏感分为三种现象:敏感(S)、耐药(R)、中介⑴。
(-)扩散法(K-B法)
1、目前常用的方法,是一种半定量的方法。采用的接种方法是平板涂布法。
2、抑菌圈的大小可以反映待检菌对测定药物的敏感程度,与该药对待检菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关,即抑菌圈
愈大,MIC愈小。
3、含药纸片贴于含菌琼脂表面时应注意:①各纸片中心距离不小于24mm,纸片距平板内缘应大于15mm;②一旦碰
触培养基就不可再动;③平板最好单独平放,不超过两个叠放。
4、采用标准菌株是进行质控的主要措施。
♦金黄色葡萄球菌ATCC25923,大肠埃希菌ATCC25922,铜绿假单胞菌ATCC27853,粪肠球菌ATCC29212或
ATCC33186。
5、纸片扩散法的培养基要求其pH值为7.2~7.4,过高或过低的pH值会影响药物效能。碱性可扩大氨基糖普类药物的
抑菌圈,酸性可扩大四环素类药物的抑菌圈。
★其他高频考点
1、MBC为最低杀菌浓度。
2、体外联合药物敏感试验的FIC(部分抑菌浓度指数):FIC指数<0.5协同作用;FIC指数0.5~1相加作用;FIC指数
1-2无关作用;FIC指数>2拮抗作用。
3、抗结核分枝杆菌的首选一线药物是异烟肿、利福平。
4、产ESBL菌株临床上用卜内酰胺类抗生素(青霉素类、头袍菌素类及氨曲南)治疗无效。
5、耐甲氧西林金葡菌(MRSA)用如内酰胺类抗生素治疗无效。
6、产AmpC酶菌株对*内酰胺类抗生素(青霉素类、头抱菌素类及氨曲南)及含酶抑制剂复合制剂耐药。治疗有效的
药物主要有碳青霉烯类(亚胺培南)和第四代头(头抱咄后、头抱匹罗)以及某些暧酮类和氨基糖甘类抗生素。
7、药敏试验时,采用的菌液浓度为0.5麦氏比浊度,相当于L5xlOA8/ml含菌量。
第六章各菌属特征汇总
•葡萄球菌属
1、葡萄球均属是一类触酶试验阳性的革兰阳性(G')球菌,无鞭毛和芽胞,某些菌株能形成荚膜。包括金黄色、表皮、
腐生、溶血葡萄球菌。
2、葡萄球菌触和链球菌鉴别用触酶试验,葡萄球菌触酶阳性,链球菌是阴性。
3、葡萄球菌的致病性用凝固酶试验,致病性葡萄糖球菌为阳性,还可以分解甘露醇产酸,耐热DNA酶阳性。主要见于
金黄色葡萄球菌。
4、葡萄球菌的细胞壁上有葡萄球菌A蛋白(SPA),可以与人类IgG的Fc段结合,可进行协同凝集试验。
5、葡萄球菌抵抗力强,耐热、耐干燥、耐高盐,是抵抗力最强的无芽胞细菌。
6、耐甲氧西林的金葡菌(MRSA),耐甲氧西林的表葡菌(MRSE),耐万古霉素的金黄色葡萄球菌(VRSA),耐万古霉
素的表皮葡萄球菌(VRSE),MRSA的首选抗生素为万古霉素。
7、表皮葡萄球菌为医院感染的重要病原菌,它是导致血培养污染的常见细菌之一。
8、腐生葡萄球菌是导致尿路感染的常见病原菌之一。
★看到凝固酶、耐热DNA酶阳性,就选金黄色葡萄糖球菌。
・链球菌属
1、链球菌属是一大群触酶试验阴性、在液体培养基上呈链状排列的革兰阳性(G')球菌,但在陈旧培养基或被吞噬细胞
吞噬后常呈革兰阴性(G)。无鞭毛、无芽胞。
2、肺炎链球菌矛头状排列,由于其能产生自溶酶,菌落呈脐窝状,鉴别试验:奥普托欣试验(Optochin),阳性、胆汁
溶菌试验阳性、荚膜肿胀试验阳性、草绿色溶血圈。本菌是社区获得性肺炎的最常见病原菌。
3、A群链球菌用杆菌肽试验鉴别,为阳性。可产生溶血素和红疹毒素,前者在血平板上形成出溶血环,后者引起猩红热。
对人类有致病性的90%属A群。
4、B群链球菌可以水解马尿酸和CAMP试验阳性。
5、D群链球菌七叶昔试验阳性。
6、草绿色链球菌是引起亚急性心内膜炎最常见的病原菌。
7、链球菌感染引起的变态反应疾病为风湿热、肾小球肾炎,为HI。
8、化脓性链球菌产生的酶有脱氧核糖核酸酶(链道酶)、透明质酸酶(扩散因子)、链激酶(溶解纤维蛋白酶)。因为有这
几种酶的的产生,化脓性链球菌感染的病灶范围广、脓液稀薄、边界不清。
9、根据溶血现象的不同,将链球菌分为甲型溶血性链球菌(a溶血)、乙型溶血性链球菌犀溶血)、丙型溶血性链球菌
(Y溶血)。
•肠球菌属
1、肠球菌属是肠道的正常栖居菌。G+,成双或短链状排列的卵圆形球菌,无芽胞,无荚膜,部分肠球菌有稀疏鞭毛。
2、肠球菌能在高盐(6.5%NaCI)、高碱(pH9.6)、40%胆汁培养基上和10。045久环境下生长;
•奈瑟菌属
1、G-,呈肾形,坦面相对,双球菌,存在于中性粒细胞内(或胞外),无鞭毛,无芽胞,有菌毛。专性需氧,氧化酶阳
性。
2、在血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂,置5%~10%C02环境中,35久培养18~24h后可见圆形、灰褐色、湿润、
光滑、边缘整齐、直径1~2mm的小菌落。
3、淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌用麦芽糖发酵试验区别,前者不发酵乳糖,后者发酵乳糖。
4、奈瑟菌属初次分离需要5%-10%二氧化碳。营养要求高,要用巧克力平板。
5、脑膜炎奈瑟菌定植于鼻咽部,弓I起流脑,少数还可引起败血症。
6、淋病奈瑟菌人类是唯一宿主。怀疑奈瑟菌感染,标本需保温保湿送检。
♦卡他布兰汉菌:氧化酶和触酶阳性,产DNA酶,大部分菌株还原硝酸盐和亚硝酸盐,营养要求不高,在普通培养基上
18~2(yC即可生长,借此可与奈瑟菌属相鉴别。
・肠杆菌科
1、肠杆菌科共同特征:革兰氏阴性杆菌、氧化酶阴性、触酶和硝酸盐还原试验为阳性。
2、肠杆菌中志贺、克雷伯、鼠疫耶尔菌属、日EC没有鞭毛,也就是说它们的动力阴性。
3、0抗原和H抗原是肠杆菌科分群及分型的依据,
4、乳糖发酵是区别致病性与非致病性,致病性不发酵乳糖,非致病性发酵乳糖。
・埃希菌属
1、G-,短杆菌,多数有周鞭毛,有菌毛,有英膜或微荚膜。兼性厌氧菌。
2、大肠埃希菌在EMB平板上是带有金属光泽呈蓝紫色的菌落,麦康凯和SS琼脂上呈粉红色菌落。双糖铁发酵管(KIA)
产酸产气,IMViC试验结果++--。
5、大肠埃希菌肠道外感染以尿系统感染为主,常见肾盂肾炎。
肠道内感染:(1)产毒素性(ETEC):主要引起旅游者腹泻、婴儿腹泻。
(2)肠致病性(EPEC):婴儿腹泻。
(3)肠侵袭性(EIEC):类似志贺菌肠炎的症状。里急后重。
(4)肠出血性(EHEC):常见血清型0157:H7,引起出血性肠炎,主要见于婴幼儿,还可引起溶血性尿毒症。
(5)肠粘附性(EaggEC):婴儿急性水样腹泻。
•志贺菌属
1、G-,短小杆菌,无荚膜,无芽胞,无鞭毛,有菌毛。需氧或兼性厌氧。
2、志贺菌属是细菌性痢疾最常见的病原菌,中国最常见的是福氏(B群)和宋氏(D群)。
3、志贺菌属用SS培养基或中国蓝(麦康凯)平板,菌落为红色或粉红色。
4、由于志贺菌没有鞭毛,所以它没有H抗原,有。抗原、K抗原。
5、志贺菌引起的腹泻常为里急后重。
•沙门菌属
1、G-,直杆菌,无芽胞,无荚膜,周鞭毛(除鸡沙门菌),多数有菌毛。
2、SS琼脂和麦康凯琼脂培养基:约2~4mm的透明或半透明菌落,对胆盐耐受。产H2s者在SS琼脂上形成黑色中心
菌落。
3、伤寒沙门菌的抗原主要包括菌体(0)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原。
4、伤寒沙门菌检测用肥达试验:用已知的伤寒沙门菌0、H抗原,副伤寒甲、乙H抗原稀释后与被检血清作定量凝集
试验,以检测患者血清中抗体的含量,来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热症并判别沙门菌的种类。
5、菌体(0)抗原刺激机体产生的抗体以IgM为主,H抗原则以IgG为主。
6、伤寒沙门菌感染1周取血液标本,2~3周取粪便,3周以后取尿液。
7、所致疾病:肠热症,即伤寒与副伤寒病、食物中毒、慢
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