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文档简介
作业52微生物的培育和利用A组基础达标1.下列有关生物技术实践试验中灭菌方法的叙述,错误的是()A.用高压蒸汽灭菌法对涂布器进行灭菌B.尿素培育基用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌即可C.含葡萄糖的培育基须在500g/cm2压力下灭菌30minD.接种环在运用的过程中常通过灼烧灭菌(2024浙江金华十校模拟)阅读下面材料,回答第2、3题。某技术人员设计了青霉素生产菌——产黄青霉菌的诱变育种方案,详细包括:①配制中性偏酸的培育基,打算相关的培育皿、稀释用水;②进行菌种的紫外线诱变;③用接种环蘸取诱变后的产黄青霉菌孢子悬液在固体培育基上划线;④放在恒温培育箱中培育到长出单菌落;⑤挑取单菌落,接种至匀整分布野生型金黄色葡萄球菌(以葡萄糖为主要碳源)的培育基上进行生产青霉素性能的测定。2.下列对该方案的叙述,正确的是()A.①中应配制中性偏碱的培育基B.③中分别菌种应用稀释涂布平板法C.步骤②③的依次应当调换D.⑤中应将单菌落接种至含酚红的培育基上3.下列关于该方案中无菌操作的叙述,正确的是()A.①中调整pH需在灭菌之后进行B.试验结束时可用紫外线照耀的方法对④中残余的培育基彻底灭菌C.⑤过程培育基中添加的葡萄糖可用G6玻璃砂漏斗过滤除菌D.青霉素具有杀菌作用,此发酵罐不需严格灭菌4.(2024浙江湖州教学质量检测)利用以尿素为唯一氮源的培育基,可从土壤中分别出能产脲酶的微生物。下列叙述错误的是()A.需用无菌水制备和稀释土壤菌悬液B.培育基中加入酚红可起到鉴别作用C.尿素溶液用G6玻璃砂漏斗过滤除菌D.能在该培育基上生长的微生物均能产生脲酶5.为了调查湖水中细菌的污染状况,某小组同学进行了相关试验,其中包括制备培育基、灭菌、接种、培育及菌落视察计数。下列叙述错误的是()A.LB培育基中的蛋白胨可为细菌供应碳源和氮源B.配制好的培育基,分装到锥形瓶,放入高压灭菌锅灭菌C.培育接种无菌水的平板作为比照,可检验培育基的灭菌是否合格D.若试验组平板上出现形态和颜色不同的菌落,说明湖水遭遇严峻污染6.(2024浙江柯桥适应性考试)在生产、生活和科研实践中,常常通过无菌操作技术避开杂菌的污染。下列有关无菌操作技术的叙述,错误的是()A.当超净工作台处于紫外灯和过滤风打开状态时,人必需离开B.高压蒸汽灭菌时,只要压力达到设定要求锅内就可达到相应温度C.密闭空间内可接受紫外线照耀消毒,在照耀前可喷洒消毒液D.用乙醇和次氯酸钠处理过的外植体需经无菌水清洗后才可用于组织培育7.(2024浙江杭州其次次联考)在某病原菌匀整分布的平板上,铺设含有不同种抗生素的圆形纸片,用纸片扩散法测定某病原菌对各种抗生素的敏感性,图示为培育的结果(其中抑菌圈是在纸片四周出现的透亮区域)。下列分析错误的是()A.有些未形成抑菌圈可能是该病原菌对该抗生素很敏感B.有些抑菌圈很小可能与该抗生素扩散速度太慢有关C.若抑菌圈内出现一个菌落,则该菌落可能由抗药性变异菌体形成D.从抑菌圈边缘挑取病原菌接着培育,连续选择几代后抑菌圈的直径会变小B组素能培优8.血细胞计数板是酵母菌计数的常用工具,如图表示一个计数室及显微镜下一个中方格菌体分布状况。下列有关叙述错误的是()A.每次选取计数室四个角和中心的五个中格计数,目的是减小误差B.须要先盖盖玻片再滴加样液,等酵母菌全部沉降后方可计数C.每天的取样时间可随意选择,但取样前要摇匀培育液,目的是使酵母菌匀整分布,减小误差D.若五个中格酵母菌平均数为上图所示,则估算酵母菌的总数为6×106个/mL9.(2024浙江6月选考节选)回答与产淀粉酶的枯草杆菌育种有关的问题。(1)为快速分别产淀粉酶的枯草杆菌,可将土样用制成悬液,再将含有悬液的三角瓶置于80℃的中保温一段时间,其目的是。
(2)为提高筛选效率,可将菌种的过程与菌种的产酶性能测定一起进行:将上述悬液稀释后涂布于以淀粉为唯一碳源的固体培育基上培育,接受显色方法,依据透亮圈与菌落直径比值的大小,可粗略估计出菌株是否产酶及产酶性能。(3)为了获得高产淀粉酶的枯草杆菌,可利用现有菌种,通过后再筛选获得,或利用转基因、等技术获得。
10.(2024浙江精诚联盟一模)为了探究微生物在不同条件下的繁殖速度,微生物的计数是发酵工程中不行或缺的环节。回答下列问题。(1)测定微生物细胞数量的方法许多,通常接受稀释涂布平板法和显微镜计数法,前者往往无法进行动物细胞数量的测定,缘由是;显微镜计数法计数结果一般比稀释涂布平板法大,可能的缘由是。
(2)在用显微镜进行酵母菌细胞计数时,必需将菌液,然后应(①盖专用盖玻片;②滴加酵母菌悬液。按操作的先后依次填写序号),已知血细胞计数板规格为1mm×1mm×0.1mm,在培育后期对培育液稀释100倍后,用显微镜视察到其中某方格中酵母菌的分布状况如图,若最终几个样方中平均数与其相同,则培育液中酵母菌的密度为个/mL。
(3)稀释涂布平板时,若平板中菌落数过少,随机误差增大。要解决这个问题可以从两方面入手:一是在保证能精确计数的前提下降低稀释度;二是将相同稀释度下的多组数值取平均值后再进行计算。除用于计数,稀释涂布平板法还能实现对目标微生物的。
11.(2024浙南联盟模拟)苹果树腐烂病由真菌感染引起,为了找寻该病的生物防治途径,探讨者拟从土壤中分别筛选出能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌,试验流程如下图。请回答下列问题。(1)配制培育基时,培育基的灭菌应当在倒平板(填“之前”或“之后”)。
(2)图中①过程取5g土壤加入45mL无菌水中充分振荡得到10-1的土壤稀释液,进行系列稀释后,用法接种到培育基上。在接种过程中,下列选项无须用到的是(填序号)。
①酒精灯②涂布器③显微镜④接种环⑤移液器(3)接种后在37℃条件下培育24h,依据菌落特征鉴别出芽孢杆菌并进一步纯化。目的菌筛选时,应将芽孢杆菌接种于(填“A”或“B”)处,培育3~5天,筛选出抑菌率最高的菌株。
(4)与化学防治相比,该生物防治方法的优点是。(只需答出一点)。
答案:1.B应接受已在121℃下高压蒸汽灭菌的、孔径最小的G6玻璃砂漏斗对尿素进行过滤除菌,再将尿素添加到已灭菌的培育基中,B项错误。2.B霉菌相宜在中性偏酸的环境中成长,A项错误;该方案的目的是诱变出产黄青霉菌高产菌株,全部的诱变后的菌株都须要测定,应用稀释涂布平板法获得全部诱变菌株的单菌落,B项正确;应先对菌种进行诱变,再接种培育纯化,步骤②③的依次不能调换,C项错误;该方案是生产青霉素性能的测定,不应接种至含酚红的培育基上,D项错误。3.C①中调整pH时可能会带入杂菌,应在灭菌之前进行,A项错误;紫外线照耀只能消毒,杀死部分微生物,不能对④中残余的培育基彻底灭菌,B项错误;葡萄糖在115℃以上会焦化,可接受已在121℃下高压蒸汽灭菌的、孔径最小的G6玻璃砂漏斗对葡萄糖进行过滤除菌后,再在超净工作台内添加到培育基中,C项正确;青霉素具有杀菌作用,但不能杀死全部的微生物,所以发酵罐需严格灭菌,D项错误。4.D需用无菌水制备和稀释土壤菌悬液,避开杂菌污染,A项正确;由于尿素被分解后产生氨会使培育基的pH上升,因此培育基中加入酚红可起到鉴别作用,会显红色,B项正确;尿素溶液需用到高压蒸汽灭菌的G6玻璃砂漏斗过滤,用其过滤的缘由是其孔径小、细菌不能通过,便于除菌,C项正确;能在该培育基上生长的微生物不愿定能产生脲酶,比如能够利用空气中的氮气作为氮源的微生物也可以在上面生长,D项错误。5.DLB培育基中的蛋白胨来源于动、植物蛋白,含有糖类、维生素和有机氮化合物等养分物质,可为细菌供应碳源和氮源,A项正确;配制好的培育基,应分装到锥形瓶,塞好棉塞,用牛皮纸将瓶口包袱好,放入高压灭菌锅灭菌,B项正确;培育接种无菌水的平板作为比照,可检验培育基灭菌是否合格,C项正确;若试验组平板上出现形态和颜色不同的菌落,说明湖水中含有多种微生物,并不能说明湖水遭遇严峻污染,D项错误。6.B当超净工作台处于紫外灯和过滤风打开状态时,人必需离开,以免造成损害,A项正确。运用高压蒸汽灭菌锅对培育基进行灭菌时,须要将灭菌锅内的冷空气排尽后,才能关闭排气阀,以保证锅中的高压只来自水蒸气,从而能随着加热的进行将压力达到设定要求;若未将锅内冷空气排尽,则会出现锅内压力达到要求,而温度并没有达到相应要求的现象,B项错误。紫外线能破坏DNA结构,照耀前适量喷洒消毒液,可强化消毒效果,C项正确。用乙醇和次氯酸钠处理过的外植体需经无菌水多次冲洗后才可用于组织培育,D项正确。7.A未出现抑菌圈的可能缘由是该病原菌对该抗生素不敏感,A项错误;不同的抑菌药物的抑菌圈直径,因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同,故抗生素在平板上的扩散速度太慢可能会导致抑菌圈很小,B项正确;部分抑菌圈内出现零散细小的菌落,说明这些菌落对该抗生素具有抗性,可能是菌株出现了抗药性突变,C项正确;从抑菌圈边缘的菌落上挑取病原菌接着培育,连续选择几代后,菌体对抗生素的抗性越来越强,因而抑菌圈会变小,D项正确。8.C每次选取计数室四个角和中心的五个中格计数,目的是取样计数并求平均值,以减小误差,A项正确;制片时,应先将盖玻片盖上,再将培育液滴在计数板的一侧,等酵母菌全部沉降后方可计数,B项正确;每天计数酵母菌数量的时间要固定,防止由于取样时间不同造成试验误差,C项错误;在计数时,计数原则为“计上不计下,计左不计右”,题图所示的中方格中酵母菌数量为24个,则1mL培育液中酵母菌的总数为24÷16×400×104=6×106(个),D项正确。9.答案(1)无菌水水浴杀死不耐热微生物(2)分别KI-I2(3)人工诱变原生质体融合解析(1)分别产淀粉酶的枯草杆菌时,需用液体培育基扩大培育,可将土样用无菌水制成悬液,在80℃的水浴中保温一段时间,其目的是杀死不耐热微生物。(2)为提高筛选效率,可将菌种的分别过程与菌种的产酶性能测定一起进行:将上述悬液稀释后涂布于以淀粉为唯一碳源的固体培育基上培育,接受KI-I2显色方法,依据透亮圈与菌落直径比值的大小,可粗略估计出菌株是否产酶及产酶性能。(3)利用现有菌种,通过人工诱变后再筛选,或利用转基因、原生质体融合等技术均可获得高产淀粉酶的枯草杆菌。10.答案(1)动物细胞无法在固体平板培育基中正常生长显微镜计数中包含死亡菌体;稀释涂布平板时当两个或多个菌体连在一起时,平板上视察到的只是一个菌落;涂布操作可能会造成细胞死亡;涂布器可能带走小部分菌体(2)摇匀①②6×108(3)分别和纯化解析(1)由于动物细胞无法在固体平板培育基中正常生长,故接受稀释涂布平板法无法进行动物细胞数量的测定。显微镜计数法计数结果一般比稀释涂布平板法大,因为显微镜计数中包含死亡菌体,稀释涂布平板时当两个或多个菌体连在一起时,平板上视察到的只是一个菌落,涂布操作可能会造成细胞死亡,涂布器可能带走小部分菌体。(2)在用显微镜进行酵母菌细胞计数时,必需将菌液摇匀,然后盖专用盖玻片,再滴加酵母菌悬液。据题意可知,该血球计数板的规格为1mm×1mm×0.1mm、25×16,即一个大方格含有25个中方格,据图可知,一个中方格酵母菌数量为24个,因此一个大方格酵母菌数量为24×25=600(个),一个大方格内的细胞悬液体积是10-4mL,培育液稀释倍数为100倍,因此培育液中酵母菌的密度为600×104×102=6×108(个/mL)。(3)除用于计数,稀释涂布平板法还能实现对目标微生物的分别和纯化。11.答案(1)之前(2)稀释涂布平板③④(3)B(4)降低环境污染;削减化学试剂的残留;对其他动物干扰小(任答其中一点,其他合理答案也可)解析(1)配制培育基的基本过程为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板,故在配制培育基时,培育基的灭菌应当在倒平板之前。(2)图中①过程取5g土壤加入45mL无菌
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