备考2025届高考生物一轮复习讲义第十一章生物技术与工程课时2微生物的培养与应用考点2　微生物的选择培养和计数

考点2微生物的选择培育和计数1.选择培育基2.微生物的选择培育——稀释涂布平板法的操作步骤（1）系列稀释操作：该操作常用在将细胞接种到培育基之前，通过[2]液体稀释的方法分散细胞，随着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数量[3]削减，细胞得以分散。操作步骤：（2）涂布平板操作3.微生物的数量测定——两种计数方法的比较活菌计数法项目间接计数法（稀释涂布平板法）干脆计数法（显微计数法）原理当样品的稀释度足够高时，培育基表面生长的一个[7]单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推想出样品中大约含有多少活菌利用特定的[8]细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下视察、计数，然后再计算确定体积的样品中微生物的数量公式每克样品中的菌株数＝（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数每毫升原液中所含的微生物数＝每小格的平均微生物数×400×104×稀释倍数缺点当两个或多个细胞连在一起时，平板上视察到的只是一个菌落不能区分死菌与活菌结果与实际值相比[9]偏小与实际值相比[10]偏大提示血细胞计数板比细菌计数板厚，常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。用细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行视察和计数。4.土壤中分解尿素的细菌的分别与计数教材补遗[选必3P18“探究·实践”]本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌，还须要借助生物化学的方法来鉴定所分别的菌种：分解尿素的细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培育基的碱性增加，在培育基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，可确定该细菌能够分解尿素。基础自测1.平板划线法和稀释涂布平板法都用固体培育基，接种工具都为接种针，都能计数。（×）2.统计菌落数目时为保证结果精确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计。（×）3.用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培育基表面形成单个菌落。（√）4.分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使培育基的pH降低。（×）5.刚果红可以与纤维素形成透亮复合物，所以可以通过是否产生透亮圈来筛选纤维素分解菌。（×）6.不含氮源的平板不能用于微生物培育[2024山东，T15A]。（×）7.利用以尿素为唯一氮源的平板能分别出合成脲酶的微生物[2024山东，T15D]。（√）8.血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定[2024江苏，T7D]。（×）深度思索1.请从主要步骤、接种工具、菌种获得等方面比较分析平板划线法和稀释涂布平板法。提示平板划线法和稀释涂布平板法的比较如表：项目平板划线法稀释涂布平板法主要步骤接种环在固体培育基表面连续划线系列稀释操作和涂布平板操作接种工具接种环涂布器菌体获得在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体从相宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体优点可以视察菌落特征、分别混合菌落可以计数、视察菌落特征、分别混合菌落缺点不能计数操作困难，平板不干燥则效果不好，简洁扩散共同点都要用固体培育基；都需进行无菌操作；都会在培育基表面形成单菌落；都可用于视察菌落特征2.在进行菌落计数时为什么要选择菌落数为30～300的平板？能否只选择一个菌落数为30～300的平板进行计数？提示（1）因为若平板中的菌落数小于30，说明稀释倍数太大，会造成误差；若平板中的菌落数大于300，则菌落的生长受到抑制，并且难以区分各个菌落，也不能精确计数，会造成误差。（2）不能。依据试验的重复性原则，为解除偶然因素对试验结果的影响，同一稀释度的菌液涂布后至少要选择三个平板进行计数。3.利用稀释涂布平板法纯化分解尿素的细菌时，经培育后发觉培育基上出现多种菌落，可能的缘由有哪些？提示出现多种菌落的可能缘由：培育基制备过程中被杂菌污染；接种过程中，无菌操作不符合要求；系列稀释时，无菌操作不符合要求等。4.为什么稀释涂布平板法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目低？提示因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上视察到的只是一个菌落。研透高考明确方向命题点1微生物的选择培育1.[2024广东]探讨者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。依据堆肥温度变更曲线（如图所示）和选择培育基筛选原理来推断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（D）A.a点时取样、尿素氮源培育基B.b点时取样、角蛋白氮源培育基C.b点时取样、蛋白胨氮源培育基D.c点时取样、角蛋白氮源培育基解析由图可知，随着堆肥时间的延长，堆肥温度先上升后保持稳定，a点时堆肥温度最低，c点时堆肥温度最高。该试验的目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，应当用以角蛋白为唯一氮源的培育基进行筛选培育，且应当在高温条件下取样，即c点时取样，D符合题意。2.[2024江苏]下列是某同学分别高产脲酶菌的试验设计，不合理的是（D）A.选择农田或公园土壤作为样品分别目的菌株B.在选择培育基中需添加尿素作为唯一氮源C.适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落D.可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌解析在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培育基的pH上升，酚红指示剂将变红，D错误。命题点2微生物的分别与计数3.[全国Ⅰ高考，15分]某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。探讨人员依据下图所示流程从淤泥中分别得到能高效降解S的细菌菌株。试验过程中须要甲、乙两种培育基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。回答下列问题：（1）试验时，盛有水或培育基的摇瓶通常接受高压蒸汽灭菌的方法进行灭菌。乙培育基中的Y物质是琼脂。甲、乙培育基均属于选择培育基。（2）试验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释104倍。（3）在步骤⑤的筛选过程中，发觉当培育基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其缘由可能是S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长（答出1点即可）。（4）若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要试验步骤：取淤泥加入无菌水中，涂布（或稀释涂布）到乙培育基上，培育后计数。（5）上述试验中，甲、乙两种培育基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长供应4类养分物质，即水、碳源、氮源和无机盐。解析（1）试验过程中，对盛有水或培育基的摇瓶进行灭菌时，常接受高压蒸汽灭菌法。据题图分析可知，乙培育基为固体培育基，与甲培育基相比，其特有的组分Y物质应是凝固剂琼脂。甲、乙培育基均只允许能利用物质S作为氮源和碳源的微生物生长，因此均为选择培育基。（2）据题意，假设至少将摇瓶M中的菌液稀释x倍，才能保证稀释后的100μL菌液中细菌细胞数不超过200个，初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL，则有200÷（100×10－3）×x＝2×107，得x＝104，因此至少应将摇瓶M中的菌液稀释104倍。（3）在筛选过程中，若培育基中S浓度过高，可能会导致细胞失水，进而抑制菌株