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文档简介
第4节蛋白质工程的原理和应用对蛋白质分子的设计和改造是通过蛋白质工程来实现的。蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过改造或合成基因,来改造现有蛋白质,或制造一种新的蛋白质,以满足人类生产和生活的需求。它是在基因工程的基础上,延伸出来的第二代基因工程,是涉及多学科的综合科技工程。第一部分蛋白质工程崛起的缘由第二部分蛋白质工程的基本原理第三部分蛋白质工程的应用目录目录contents一、蛋白质工程崛起的缘由将一种生物的基因转移到另一种生物体内,后者可以产生它本不能产生的蛋白质,进而表现出新的性状,这就是基因工程的实质。1.基因工程的实质2.基因工程的不足基因工程原则上只能生产自然界中已存在的蛋白质。这些天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的,它们的结构和功能符合特定物种生存的需要,却不一定完全符合人类生产和生活的需要。一、蛋白质工程崛起的缘由玉米中赖氨酸的含量比较低赖氨酸是人体的必需氨基酸赖氨酸含量低的原因天冬氨酸赖氨酸天冬氨酸激酶二氢吡啶二羧酸合成酶抑制抑制负反馈调节对玉米是有利的对人类生成却是不利的改造一、蛋白质工程崛起的缘由天冬氨酸激酶二氢吡啶二羧酸合成酶苏第352位:苏氨酸第104位:天冬酰胺天异亮氨酸变成异亮氨酸玉米叶片和种子中游离赖氨酸的含量分别提高5倍和2倍变成………一、蛋白质工程崛起的缘由天冬氨酸激酶苏352………异352mRNA一、蛋白质工程崛起的缘由………一、蛋白质工程崛起的缘由天冬氨酸激酶苏352………异352mRNAGAUAUUDNA(基因)CTAGATTAAATT改造一、蛋白质工程崛起的缘由二、蛋白质工程的基本原理二、蛋白质工程的基本原理12345二、蛋白质工程的基本原理从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需要的蛋白质在正常人体内,血液中胰岛素的含量通常在进食后30-60分钟就达到高峰,而目前使用的基因工程生产的胰岛素制剂,注射120分钟才出现高峰。科学家研究发现,胰岛素分子容易聚合成二聚体或六聚体,皮下注射胰岛素后往往需要经历一个逐渐解聚为单体的过程。胰岛素六聚体胰岛素单体二、蛋白质工程的基本原理从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需要的蛋白质胰岛素六聚体胰岛素单体预期蛋白质的功能:科学家希望对胰岛素进行改造,从而降低它的聚合作用并得到速效胰岛素类似物产品。二、蛋白质工程的基本原理从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需要的蛋白质利用X射线晶体衍射,核磁共振等技术手段,充分了解胰岛素的空间结构。二、蛋白质工程的基本原理从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需要的蛋白质研究人员通过解析人胰岛素的晶体结构发现,人胰岛素由A链和B链构成,其中B链的第20〜29位氨基酸是胰岛素分子相互作用形成多聚体的关键区域,改变这个区域氨基酸的组成就有可能降低胰岛素分子间的作用力二、蛋白质工程的基本原理从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需要的蛋白质使B28位脯氨酸替换为天冬氨酸或者将它与B29位的赖氨酸交换位置,从而有效抑制了胰岛素的聚合二、蛋白质工程的基本原理从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需要的蛋白质脯氨酸天冬氨酸AspUGAUCCAGGTCCACTTGA改造二、蛋白质工程的基本原理从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需要的蛋白质二、蛋白质工程的基本原理从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需要的蛋白质大引物PCR定点突变二、蛋白质工程的基本原理从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因获得所需要的蛋白质三、蛋白质工程的应用天然蛋白质易形成二聚体或六聚体预期结构改造B28位脯氨酸替换为天冬氨酸或将它与B29位的赖氨酸交换位置新胰岛素基因转录mRNA折叠预期功能降低胰岛素的聚合作用改变B链第20~29位氨基酸组成推测序列翻译多肽链有效抑制胰岛素的聚合1、医药工业方面(1)研发速效胰岛素类似物设计结构行使功能三、蛋白质工程的应用天然干扰素不易保存预期结构改造一个半胱氨酸变成丝氨酸新干扰素基因转录mRNA折叠预期功能延长保存时间氨基酸替换推测序列翻译多肽链在-70℃下可以保存半年1、医药工业方面(2)延长干扰素体外保存时间设计结构行使功能三、蛋白质工程的应用1、医药工业方面(3)降低人对小鼠单抗隆抗体的免疫反应小鼠单克隆抗体会使人产生免疫反应,从而导致它的治疗效果大大降低,科学家将小鼠抗体上结合抗原的区域“嫁接”到人的抗体上,经过这样改造的抗体诱发免疫反应的强度就会降低很多。三、蛋白质工程的应用2、其他工业方面蛋白质工程被广泛用于改进酶的性能或开发新的工业用酶。例如,枯草杆菌蛋白酶具有水解蛋白质的作用,因此常被用于洗涤剂工业、丝绸工业等。迄今为止,利用蛋白质工程获得的该酶的突变体已有上百种,从中可能筛选出一些符合工业化生产需求的突变体,从而提高这种酶的使用价值。三、蛋白质工程的应用3、农业方面①改造某些参与调控光合作用的酶,以提高植物光合作用的效率,增加粮食的产量;②利用蛋白质工程的思路来设计优良微生物农药,通过改造微生物蛋白质的结构,使它防治病虫害的效果增强。三、蛋白质工程的应用项目蛋白质工程基因工程操作对象操作起点操作水平操作流程结果实质联系基因基因DNA分子水平DNA分子水平预期蛋白质功能→设计蛋白质结构→推测氨基酸序列→找到并改变对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新基因→获得所需要的蛋白质目的基因的筛选与获取→构建基因表达载体→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定可生产自然界没有的蛋白质生产自然界已有
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