医麦客：mRNA与小核酸药物发展白皮书（2023-2024）

05 061.mRNA药物分类 091.mRNA药物的临床应用 一．mRNA药物的发展现状 1.mRNA技术发展历程 2.mRNA药物市场现状及展望 4.近一年全球mRNA管线进展 二．mRNA药物产业链现状 1.mRNA药物制备流程 2.2CDMO公司 2.3mRNA技术赋能细胞疗法和基因疗法 421.国外的mRNA政策法规 1.1USP《mRNA疫苗质量分析流程》草案 2.国内的mRNA政策法规 3.建议：mRNA企业该如何应用政策法规 3.3与有经验的CDMO合作 2.2小核酸药物对CDMO需求巨大，国内领军企业已频频开展合作 与其他小分子、生物大分子药相比，核酸药物的研发不仅生产过程更加省时、便捷，更有在原理上标本兼治、更长效的显著优势。再加上随着诺贝尔奖的落归，核酸药物受到了越核酸药物的研发历经40多年的发展，从“无人问津”到“门庭若市”，其基本原理与机制的完善总体可大致分成3个阶段：第一阶段始于1956年，科学家发现双链RNA在RNA沉默中扮演了重要的角色，由此拉开了基于RNA药物研发的序幕；第二阶段约为1978年~1998年，ASO和RNA干扰机制相继被发现，多种小核酸药物逐渐进入人们的视线；第三阶段为2020年后新冠大流行期间，两款mRNA疫苗的上市正式宣告mRNA技术进入商业化时代，新冠mRNA疫苗得到广泛应用，也让越来越多的投资者关注到核酸药物的潜力。核酸药物有望成为继小分子药、抗体药物后第三大药物类型，mRNA技术进入快速发展的界前列。回顾发展史，不难发现核酸药物目前仍处于不断涌现前沿技术的发展过程之中，打好修饰与递送技术方面的优化和革新的重要根基，才能更快更好发展。在此基础上，研究核酸药物的联合用药与个性化治疗或将成为针对药加之潜在受众庞大，该领域必定会有更进一步的发展。基于目前肿瘤免疫治疗的现状以及化免疫佐剂、实施联合给药方案、简化给药方法和提高转化效率以增强靶向性，从而提高它进行编程以执行所需的任何操作，你实际非复制mRNA仅提供编码靶抗原的遗传信息，其结构包含非复制性mRNA疫苗包含编码目标抗原的开放阅读框和5′UTR和3′UTR。5′），强了递送的mRNA的稳定性，同时提高了mRNA翻译的准确性和效率。mRNA各部分结构的优化对于mRNA疫苗成功发挥作用至关重要。SAM可以提供编码靶抗原和其他基因（例如病毒RNA聚合酶）的遗传信息，以使mRNA能够自我复制。与非复制mRNA相比，每剂疫苗所需的RNA量更低，因此能够潜在降低比线性RNA更加稳定；具有更高的热稳定性。小核酸药物主要包括反义核酸(ASO)、小干扰核酸(siRNA)、微小RNA(miRNA)、核酸适配体(Aptamer)和小激活RNA(SaRNA)。与特定的RNA序列高度特异性结合，从而达到基因靶向治疗的目的。与目标基因结合后的ASO通过四种不同的作用机制来调节靶mRNA的功能:直接抑制靶mRNA翻译:ASO可与靶mRNA的翻译起始位点或其他序列结合，阻止或阻断mRNA的翻译，下调蛋白表达;降解靶mRNA:ASO与靶mRNA结合后，可招募内源性核糖核酸内切酶RNaseH，切断互补配对区域mRNA序列以沉默目的基因，下调蛋白表达;剪接调控:DNA转录生成的pre-mRNA，需由剪接体将其中的内含子剪除，再将外显子有序连接，从而加工为成熟mRNA。而剪接体识别并结合pre-mRNA需要借助于内含子上的特定RNA序列，ASO可与此特定序列结合，改变剪接行为，干扰基因表达;上调蛋白质翻译:上游开放阅读框(uORF)可通过多种机制抑制mRNA翻译，ASO能与uORF部分结合，从而上调蛋白质翻译。可通过与载体共价耦联，特异性地靶向发病组织发挥基因沉默作用。siRNA是通过RNAi机制发挥其作用:将双链RNA(dSRNA)导入体内后，会被特定的核糖核酸酶(Dicer)切割成长度为21~23个碱基对的小片段，这些小片段称为siRNA。siRNA进入细胞后，细胞质内的Ag02酶会将siRNA的正义链裂解，反义链则会被装载到RNA诱导的沉默复合体中(RISC)，与靶mRNA特异性结合使其降解，从而抑制蛋白的表达。微小微小RNA（microRNA,miRNA）是长度约22个核苷酸片段的非编码小分子RNA，主要通过抑制/裂解mRNA方式来调控基因表达。具体说来，miRNA首先在细胞核内转录出较长的初级miRNA(pri-miRNA)，然后在细胞核内由Drosha加工成前体miRNA(pre-miRNA)，而后被转运出细胞核，在细胞质中由Dicer剪切成为成熟的miRNA，随即被整合进RNA沉默复合物(RISC)中，基于与mRNA完全或不完全配对来调节基因表达。核酸适配体是一类有“核酸抗体”之称的人工合成的长度为核酸适配体是一类有“核酸抗体”之称的人工合成的长度为20-100个核苷酸的单链DNA或RNA分子，可以形成特定的三维结构，从而高选择性和特异性结合作用靶点。相比抗体药物等优点，在疾病诊断、治疗和预防中有着广泛的药物应用潜力。核酸适配体药物通小激活RNA指一段可以激活基因表达的双链RNA，其结构与siRNA相似，但作用不同。双链的saRNA（长度一般在21个核苷酸）通过内吞作用进入细胞；装载到AGO2蛋白上；载体链被降解；AGO2和活性链复合物被运输进细胞核内和启动子区域结合；通过与RNA解旋酶和RNA多聚酶联系蛋白（CTR9）的结合吸引RNA多聚酶从而激活相应基因由于saRNA的小分子量和基因特异性，saRNA可以被用来提高特定蛋白质（抑癌基因或者单倍体不足基因的产物）的表达。dsP21-322是一种提高p21表达的saRNA，在临床前试验的肿瘤模型（前列腺癌、肺癌、胰腺癌）里显示了抑制肿瘤生长的效果。在膀胱结肠癌模型里局部递送p21的saRNA脂质体也显示了抗癌效果，P53的saRNA也显示了mRNA因其技术优势，理论上能够表达任何蛋白质，可以防治多种疾病，因此mRNA可以作为一种极具潜力的通用技术平台。目前mRNA可应用于传染病预防、肿瘤免疫治疗、蛋白替代、CAR-T/M等，总体可分为三大类：预防疫苗、治疗疫苗、治疗药物，其中预以激发后续机体内的免疫反应，从作用机制上具有革命性突破意义。mRNA疫苗具备安全①mRNA本身不具备感染性，能整合入宿主细胞的基因组中，且在其完成蛋白的翻译后②mRNA不需要进入细胞核，仅需完成一次跨膜使抗原的表达更加迅速在COVID-19大流行期间,mRNA预防疫苗发挥了重要作用。mRNA疫苗的大规模临床应用也推动了mRNA疫苗技术发展,目前流感病毒、寨卡病毒、呼吸道合胞病毒以及狂犬病毒等的预防性mRNA疫苗也在研发中。国内布局国内布局RSVmRNA疫苗管线企业肿瘤疫苗是肿瘤疫苗是mRNA疗法中历史较长、较成熟的应用,目前有大量临床前和临床成果。mRNA肿瘤疫苗的研发思路包括用编码肿瘤抗原的mRNA转染离体树突状细胞(DC)并回输、直接注射裸露的或有载体包载的肿瘤抗原mRNA以及用编码嵌合抗原受体的mRNA原mRNA更能发挥mRNA药物低成本的优势,有更好的应用前景。国外mRNA肿瘤疫苗管线国外国外mRNA肿瘤疫苗管线mRNA蛋白质替代疗法是指递送mRNA,表达正常蛋白以取代患者缺失的蛋白,或额外补等向血管加压素基因缺陷的大鼠下丘脑注射血管加压素mRNA,缓解了大鼠尿崩症。以及产物具有人体中翻译后修饰形式等优点。目前mRNA蛋白替代疗法主要通过静脉注射LNP-mRNA给药。在动物实验中,mRNA药物被证明可用于治疗多种酶或其他功能蛋MRNA-3927是Moderna公司开发的一种通过静脉给药、由脂质纳米颗粒包裹的双mRNA疗法，其利用mRNA表达细胞内蛋白，作为蛋白替代疗法用于治疗罕见遗传病丙酸血症。中期临床试验结果显示，mRNA-3927表现出良好的安全性和耐受性，并且接受mRNA-脊髓性肌萎缩症是一种罕见的遗传性神经肌肉疾病，以脑干和脊髓运动神经元变性引起的进行性肌无力和肌萎缩为特征。病情轻者仅表现为轻度肌无力，预期寿命不受影响，严重者可并发危及生命的呼吸衰竭。SMA是由运动神经元1（SMN1）基因的纯合缺失或突变引起的，导致全SMN蛋白水平降低，导致近端骨骼肌优先萎缩，伴有无力和肌肉麻痹。除SMN1基因外，人类还普遍表达一种称为SMN2的密切相关的旁系同源基因。该基因同样编码全长SMN蛋白，但在外显子7中存在C到T的转变。这种变化使剪接增强子失活并引入剪接沉默子，转录本被翻译成截短的SMN（SMNΔ7）蛋白，该蛋白被蛋白酶体系统迅速泛素化和降解。因此利用小核酸药物进行治疗的机理是通过ASO调控SMN2基因的剪接，增加全功能性SMN蛋白的产生，进而完成对SMA的治疗。SMN2外显子7的剪切位点结合，降低其在剪接中被截断的机会，使得全功能性SMN数杜氏肌营养不良症是一种致命的罕见退行性神经肌肉疾病，也是最常见的致死性遗传疾病之一。这种疾病是由体内编码抗肌萎缩蛋白的基因发生变异引起的，通常是移码突变（读ASO治疗杜氏肌营养不良症的原理为针对不同位点的突变进行外显子跳跃，使突变蛋白表达为截断但仍具有功能的抗萎缩蛋白。因此目前对杜氏肌营养不良的治疗并非治愈，而的DMD患者；Viltepso是日本新药公司开发的ASO药物，针对适用于外显子53跳跃治疗的DMD患者；Vyondys53是Sarepta公司开发的ASO药物，针对适用于外显子53跳跃治疗的DMD患者；Amondys45是Sarepta公司开发的ASO药物，针对适用于外显子45跳跃治疗的DMD患者。转甲状腺素蛋白淀粉样变性是一种罕见的进行性疾病，其特征是由错误折叠的转甲状腺素蛋白（TTR）组成的淀粉样沉积在人体器官和组织中的异常堆积。ATTR可影响身体的许多器官和组织，包括周围神经系统以及心脏、肾脏、胃肠道和眼睛等器官。转甲状腺素蛋白淀粉样变性心肌病（ATTR-CM）白淀粉样变性心肌病（ATTR-CM）和转甲状腺素蛋白淀粉样变性多发性神经是该疾病的两种临床表现形式。治疗ATTR可以通过抑制TTR产生来完成，因此ASO和siRNA均可以完成ATTR的治疗。编码基因突变所引起。由脂蛋白酶（LPL）、载脂蛋白C-II（APOCII）、高密度脂蛋白结合蛋白1（GPIHBP1）基因缺陷引起，导致血浆中乳糜微粒积累和高甘油三酯血症。FCS的特征是血浆甘油三酯水平极度升高，进而可能出现复而完成疾病治疗。目前获批上市治疗家族性高乳糜微粒血症的的Waylivra（欧盟获批，FDA并未批准）;Arrowhead公司的ARO-APOC3已经被FDA授急性肝卟啉症是一种罕见的遗传疾病，患者由于肝脏中血红素生物合成途径中特定酶的缺失，导致具有神经毒性的血红素中间体氨基乙酰丙酸（ALA）与胆色素原（PBG）的积累。AHP患者大多数为女性，疾病发作时可能引起胸部、腹部、背部的严重疼痛、虚弱、呼吸衰竭等需要频繁住院治疗的症状，并且可能危及生命。目前针对急性肝卟啉症获批的siRNA药物是Alnylam的Givlaari，能够靶向降解编码ALAS1蛋白的mRNA，ALAS1是合成ALA和PBG的重要蛋白酶，每月接受Givlaari治疗能够显著持久地降低肝脏中ALAS1的水平，从而将具有神经毒性的ALA和PBG的水平降低到正常范围。醛酸盐氨基转移酶缺乏，导致草酸产生过多，临床表现为高草酸尿症和反复尿路结石。Oxlumo是目前唯一获批的治疗原发性1型高草酸尿症的药物，靶向编码肝脏中乙醇酸氧化酶(GO)的HAO1基因的mRNA。进而降低肝脏GO的水平，从而消耗生成草酸所需的由于siRNA可重复起效，可延长患者给药周期，从而达到依从性高的优势，所以小核酸药物也逐渐占领慢病领域。在siRNA降解mRNA机理中，单个siRNA可以循环进行多轮mRNA的切割，因此siRNA药物通常可以有更长的半衰期，此特性在针对慢病开发药物高胆固醇血症指血液内胆固醇超过正常范围，血脂增高易导致血液黏稠引起血管硬化成斑块从而阻塞血管，从而导致动脉粥样硬化性心血管疾病。截至2024年5月，获批上市4款的治疗高胆固醇血症的小核酸药物靶点均为PCSK9。PCSK9抑制剂主要通过以小分子肽的形式阻断PCSK9与低密度脂蛋白受体的形式起效，或是以反义核苷酸技术阻断PCSK9的合成与表达，从而仅降低血液内的“坏胆固醇”——低密度脂蛋白含量。治疗动脉粥样硬化性心血管疾病。他汀类药物服药频率为每日一次，单抗类药物每两周一次皮下注射；相比之下Leqvio每半年一次皮下注射即可达到良好的降低LDL-C效果，大于RAAS通路最上游的前体，该靶点在血压（BP）调节中的作用已得到证实，抑制AGT具有公认的抗高血压效果。AGT也是小核酸降压药物最常见的靶点之一。具有临床意义的显著降低；且与其他降压药物联用完成一次皮下注射，实现长达6个月的血压稳定的日常生活，一定程乙肝（慢性乙型病毒性肝炎，CHB）是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种传染病。全球乙肝病毒携带者约2.96亿人（WHO），国内乙肝携带者约8000万左右。乙肝早期多数无乙肝病毒凭借cccDNA持续产生病毒蛋白。乙肝病毒基因组cccDNA能够转录多个不同长度的RNA，并翻译为多种病毒蛋白，其中DR1和DR2两个片段在多个转录本中相同。因此针对该区域设计的小核酸药物可直接作用于病毒转录产生的所有mRNA，并同时诱导其降解，在病毒蛋白产生前发挥抑制作用。而经GalNAc修饰后，小核酸药物能够被高效递目前，尚无小核酸药物获批肝炎治疗。但在2023年，多款小核酸候选药物在临床II期HBsAg，强生的JNJ-3989降低HBsAg数据优异。此外还有多款其他小核酸药物产品临床mRNA从发现到首个产品上市历时约60年时间，许多关键性的研究推动了mRNA在医学上的应用。mRNA发展历程主要分为三个阶段。mRNA发展大事记第一个阶段是mRNA发现和认识阶段(20世纪60年代至90年代)。早期关于mRNA稳定性和翻译活性的研究为基于mRNA技术的疫苗和药物开发奠定基础。20世纪60年代通过对核酸的全面探索发现了MRNA分子。随后，对mRNA分子的研究主要集中在了解mRNA分子的结构和功能、在真核细胞中的代谢，以及mRNA重组工程相关工具的开发、mRNA分子中5’-帽子的发现等。20世纪80年代,通过噬菌体SP6启动子和RNA聚合酶从工程DNA模板进行体外转录，从而使在无细胞系统中产生mRNA分子。20世纪70年代，研究人员通过脂质体将mRNA分子传递到细胞中进而诱导蛋白质表达,产生了第一个用于mRNA分子传递的阳离子脂质体。第二个阶段是mRNA技术应用阶段(20世纪90年代至2019年)。20世纪90年代起，通过体外转录生成的mRNA逐渐应用于蛋白质替代、癌症研究和传染病疫苗接种等临床前评估中。1992年,美国斯克里普斯研究所的研究人员利用mRNA技术短暂改善了大鼠体内因缺少蛋白而造成的尿崩症。尽管mRNA疫苗的概念听起来相对较新,但早在1995年便首次提出了mRNA疫苗的概念，且其主要用于编码癌症抗原研究。2005年，研究人员发现了如何防止因注射mRNA导致的免疫原性不利等问题，即插入一种天然存在的修饰核苷--假尿苷2。假尿苷修饰的发明和对MRNA分子的进一步探索为2008年首次针对黑色素瘤的mRNA疫苗人体实验奠定了基础。随后,研究人员迅速完成了许多基于mRNA展基于mRNA疫苗的针对转移性黑色素瘤的免疫治疗实验。2010年，人们发现利用假尿苷修饰的mRNA分子可有效地对细胞进行重编程，进而实现其相关多功能性”。2017年，研究人员首次开展了关于mRNA的个性化癌症疫苗临床试验。第三个阶段是快速发展阶段(2020年至今)。两种针对新冠病毒急使用授权，2021年获正式批准。2021年，化脓性链球Cas9mRNA和CRISPR引导RNA组成的脂质纳米颗粒(LNPS)在多发性神经病变的转甲状腺素淀粉样变患者中得到成功应两位mRNA先驱因发现了核苷碱基修饰，突破性解决了mRNA分子进入人体后会很快被免疫系统攻击的难题，使得mRNA分子作为药物具备了技术上的可行性，从而使能开发出了有效的抗COVID-19mRNA疫苗，获得了诺贝尔生理学或医学奖，同时，也带来了人们对此领域更多的思考。现在，在新冠病毒mRNA疫苗开发过程中吸取的经验也被用于研制多价核苷修饰的mRNA流感疫苗中。mRNA疫苗的快速开发和批准展现出mRNA技术的巨大潜力，为传统疫苗和药物研究提供了一种新型的替代方案。目前mRNA技术已在疫情影响之下，mRNA疫苗成为生物药领域的黑马，在2021年全球药物销售量排行中，Pfizer和BioNTech联合开发的新冠mRNA疫苗Comirnaty®以销售额367.81亿美元排名第一；而Moderna的新冠mRNA疫苗Spikevax®以176.65亿球药物中排名第三。2022年，全球mRNA疗法市场达到了600亿美元。但自2023年起，由于新冠肺炎大流行的结束，新冠疫苗市场不再火热，与新冠疫苗解绑后，mRNA技术的应用蓝海才刚拉开帷幕：传染病疫苗、免疫疗法、蛋白质替代疗法以及基因编辑，或成为新的发力方向。根据民生证券研报预测，非新冠mRNA市场规模有望在2025年达到281亿美元，其中mRNA预防性疫苗的市场渗透率为20%，对应规模101亿美元；mRNA癌症疫苗的市场渗透率为0.5%，对应规模105亿美元；mRNA蛋白替代疗法的市场渗透率为3%，对应规模66亿美元；其他如过敏免疫治疗、基因编辑、医美等领域，对应市场规于此同时，资本市场对mRNA也十分热情。作为新兴技术，mRNA相关产品研发速度快、刚成立两年的艾博生物，一年内便完成了三轮融资，总计获得超11亿美元融资，成为当录。2022年，国内mRNA相关企业投融资有9起，涉及金额约2亿美元。2023年度，截mRNA国内企业融资情况从获得投融资的企业情况来看，具有深厚技术积累、高效研发效率、核心竞争力的企业更同时，mRNA技术的活跃发展也将带动相关产业链市场发展。比如近岸蛋白、诺维赞等上游mRNA疫苗原料供应商公司，东富龙、楚天科技等为代表的制药装备提供商。mRNA品监督管理局（FDA）批准授权在16岁及以上人群中紧急使用的新冠疫苗。该疫苗使用的是在体外合成的编码新冠病毒突刺蛋白的mRNA。这个mRNA被导入人体细胞后将被翻译成蛋白，进而激活人体的免疫反应，产生针对新冠病毒刺突蛋白的抗体和T细相较于传统疫苗，mRNA疫苗可在实验室合成，但保存条件严苛。mRNA是人体内指导蛋白质合成的临时性产物，因此并不稳定，这款辉瑞疫苗需储存于-70℃超低温下，且在尽管随着新冠疫情的逐渐结束其销售额有所下降，但mRNA技术平台在新冠疫情的磨砺相比Comirnaty，莫德纳疫苗在保存条件方面更为宽松。Moderna新冠疫苗可在-20℃的状态下运输保存，冰箱可控温度范围内保存5天疫苗仍然有效。另外，Moderna新冠疫苗用于预防新型冠状病毒感染引起的疾病(COVID-19)。SYS6006是中国首个自主研发，获得紧急授权使用的mRNA疫苗产品，证明了我国在mRNA领域的研发实力。SYS6006为石药集团自主研发涵盖OmicronBA.5突变株核心突变位点的mRNA疫苗，于加强免疫临床研究，通过超过5500人的临床研究结果证明了其安全性、免疫原性和保护SYS6006的各种不良事件发生率较低且程度较轻，主要不良事件为发热、注射部位疼痛，从海外mRNA在研管线进展来看，目前“速度”最快的是Moderna的RSV疫苗mRNA-海外mRNA临床3期管线盘点（截至2024年3月）肿瘤疫苗方面，Moderna与默沙东联合研发的mRNA-4157疫苗，被美国食品药品监督管理局（FDA）授予“突破性治疗指定”，并被欧洲药品管理局授予“优先药物（PRIME）计划”，有望成为首款上市的mRNA肿瘤疫苗，最早或将于2025年问世。mRNA-4157（V940）属于一种mRNA个体化新抗原疗法，由编码多达34种新抗原的合成mRNA组成，旨在根据患者肿瘤DNA序列的独特突变特征，产生特定的T细胞反应，来派姆单抗相比，mRNA-4157疫苗与派姆单抗联用，可显著延长Ⅲ或Ⅳ期黑色素瘤患者的无远处转移生存期。目前mRNA-4157的Ⅲ期临床试验已启动，旨在评估mRNA-4157与国内进展最快的均为新冠病毒疫苗，其中石药集团的SYS6006和二价新冠病毒mRNA疫苗（SYS6006.32沃森生物与蓝鹊生物联合开发的mRNA变异株疫苗（RQ3033）均已获批国内紧急使用。国内布局非新冠病毒mRNA疫苗且进入临床阶段的项目如下表：国内非新冠病毒mRNA疫苗且进入临床阶段管线根据上表所呈现的数据，我们可以清晰地看到，病毒性传染病依然是mRNA疫苗研发领域的重要关注点。这其中，呼吸道病毒性传染病相关的疫苗研发扎堆，显示了这些疾病在公共卫生领域的重要性和疫苗开发的迫切性。同时，肿瘤免疫治疗作为一个相对较新的领域，目前还处于蓝海市场阶段，具有巨大的发展潜力和探索空间。特别值细胞介素-12（IL-12）已成为两大mRNA行业领军企业共同看好的研究靶点，这可能预示技术的不断进步和市场的不断扩大，mRNA行业也将迎来更多的发展机遇和挑战。各企业需要密切关注市场动态和技术发展趋势，加强研发创新和市场拓展能力，以应对日益激烈2018年登陆纳斯达克。公司致力于利用mRNA技术为患者创造新一代变革药物。2020年12月18日，美国FDA为Moderna新冠疫苗颁发紧急使用授权（EUA），允许其在美国的通过的第二款新冠疫苗。凭借成功商业化新冠mRNA疫苗，Moderna已经成为一家拥有充足现金流、丰富研发管线、引领mRNA传染病联苗领域的新兴BioPharma。2024年，Moderna将推出45个治疗和疫苗项目，其中已有9个项目处于后期开发阶段。Moderna重点布局预防性mRNA疫苗，包括流感疫苗、RSV疫苗、HIV疫苗、Zika疫苗等。Moderna在抗病毒疫苗方面布局全面，拥有几乎行业规模最大的潜在成年人的RSV相关下呼吸道疾病和急性呼吸道疾病（mRNA-1345）。公司预计将于2024年上半年获得监管部门的批准。Moderna将以强大的竞争优势进入RSV市场，成为上市季节性流感疫苗：Moderna的季节性流感疫苗（mRNA-1010）在三项3期试验中表现出一致可接受的安全性和耐受性。在最近的3期试验（P303）中，mRNA-1010达到了所有免与目前获得许可的高剂量疫苗（FluzoneHD®)相比，mRNA-1010的滴度也更高或相当。季节性流感+COVID疫苗：Moderna针对季节性流感和COVID-19的联合疫苗（mRNA-巨细胞病毒（CMV）疫苗：Moderna的CMV候选疫苗（mRNA-1647）的关键3期研究已个性化新抗原治疗（INT）：Moderna将继续验证其INT项目（mRNA-4157）的潜在临床床研究扩展到其他肿瘤类型。Moderna最近公布了其为期三年的2b期研究分析结果，该研究评估了INT与默沙东的抗PD-1疗法KEYTRUDA®联合治疗切除的高危黑色素瘤患者。与单独使用可瑞达相比，该组合在无复发生存率方面继续显示出改善，将复发或死亡风险降低49%，将发生远处转移或死亡的风险降低62%。丙酸血症（PA）和甲基丙二酸血症（MMA公司预计将在2024年将其PA（mRNA-3705）和MMA（mRNA-3927）项目推进到关键研究中。BioNTech成立于2008年，位于德国美因茨。公司致力于研发个性化的免疫治疗方案，产FDA紧急授权辉瑞/BioNTech疫苗在美上市，16岁以上的人可以接种，用于预防感染新公司目前共有31个项目在研，13项进入临床阶段。BioNTech开发基于信使核糖核酸(mRNA)的候选药物，用作个性化癌症免疫疗法、传染病疫苗和罕见疾病的蛋白质替代疗BioNTech还与辉瑞、罗氏、赛诺菲、拜耳、礼来等MNC药企签订了合作协议。公司拥有FixVac和iNeST两大mRNA技术平台，其中FixVac主要靶向在肿瘤中普遍表达的抗原，优化mRNA序列以及RNA与递送系统的结合；iNeST是针对患者个体的研发平台，通过采集的患者样本确定肿瘤突变序列并预测RNA靶点，最终提供完全个性化的免疫治管线进展（mRNA相关BioNTech传染病相关mRNA疫苗管线（截与Moderna不同，本就是肿瘤免疫公司出身的BioNTech在新冠疫情落幕后回归老本行，更注重于发展肿瘤相关管线。目前BioNTech共有7款针对肿瘤治疗的mRNA个性化疫苗以及一款CARVac疫苗（使CAR-T扩增的mRNA疫苗）。其中，BNT122和BNT211为BNT122:Autogenecevumeran（BNT122）是一款基于个体化新抗原特异性免疫疗法的mRNA癌症疫苗候选药物，与罗氏（Roche）旗下的基因泰克（Genentech）合作开发。在去年ASCO大会中，BioNTech便公布此药品与抗PD-L1抗体atezolizumab和化疗联用，在治疗接受手术切除的胰腺癌（PDAC）患者的1期临床试验中获得积极结果：BNT122具有良好的安全性和诱导T细胞强烈反应，这些反应可能与延缓PDAC复发相关。公司BNT211：BNT211是一款潜在由两种研究药物组成：针对Claudin-6(CLDN6)阳性实体瘤的CAR-T细胞候选产品，以及编码CLDN6的CAR-T细胞放大RNA疫苗(CARVac)。CARVac可维持CLDN6CAR-T细胞在体内扩增，保证CAR-T细CLDN6阳性难治性/复发性实体瘤患者疾病控制率达到了95%。BioNTech计划在2024年艾博生物是最早从事艾博生物是最早从事mRNA药物研发的本土医药企业之一。其具有自主知识产权的mRNA技术平台和纳米脂球(LNP)递送技术，有效解决桎梏mRNA药物研发进程的主要技术瓶颈，使更多创新mRNA药物产品开发梦想成为可能。艾博生物的技术平台能力在应对新型冠状病其管线产品ARCOV(商品名AWcora)是首个中国研发海外获批上市的mRNA疫苗，书写本士mRNA研发“从0到1”的历史。平台1：mRNA设计、合成和修饰技术艾博生物在mRNA分子序列设计、合成和修饰纯化方面拥有丰富经验，能够自主完成从mRNA序列设计到原液制备全过程，确保产品的质量和稳定。借助AI、计算生物学、高通量筛选等手段，不断提升mRNA序列设计和优化，推动更多早期研发构思落地和进展。艾博生物自主研发的LNP系统的脂类辅料中含有自主知识产权PH敏感脂类，具有优越的递送效率，可保证mRNA在人体内的低毒性和高表达。艾博生物自主研发的动态精准混合技术，一步反应生成均一分布的纳米脂质球并完成确保质量稳定和节省生产成本。该技术用于纳米脂质球的工业化生产，生产工艺具备可放大性，混合工艺和超滤过程充分兼容GMP要求。艾博生物在传染病、肿瘤免疫、肿瘤疫苗、蛋白替换等领域建立多元化的管线，以颠覆技ARCoV艾博生物的新型冠状病毒mRNA疫苗ARCoV于2022年获印度尼西亚食品药品监督管理局颁发紧急用途许可证，用于18周岁及以上人群通过主动免疫来预防新冠病毒肺炎。成为中国首款在国际上获批临床使用的mRNA疫苗。ABO2011艾博生物的mRNA肿瘤药物ABO2011注射液于2023年获NMPA临床批准，适应症为系统化标准治疗后进展或转移的晚期实体瘤。ABO2011（编码细胞因子IL-12mRNA的脂质纳米球注射液）是一款编码人源IL-12mRNA的新型抗肿瘤药物，通过表达IL-12蛋白，专注于mRNA药物早期创新研究，开发了从mRNA合成、新靶标的早期发现到快速扩展的产品线一步式的mRNA药物开发平台。专注于mRNA疫苗和基于mRNA药物的疗法用于严重疾病的治疗。创始人团队来自哈佛大学、耶鲁大学、瑞典卡洛林斯卡医学院，蓝鹊珠海丽凡达生物技术有限公司位于珠海横琴新区粤澳合作中医药科技产业园，是由广东省领军人才、有海内外著名药企研发经历的高级药物研发科学家彭育才博士创立，并以多位行业资深技术骨干为核心的高端生物制药公司。mRNA技术是全球生物医药领域的尖端技术，被评为2019年全球十大医药创新技术。基于mRNA技术研发出来的疫苗、抗癌药物和蛋白质替代药物正被广泛的推广及应用，并展现出了良好的治疗效果和应用前景。丽凡达生物关于mRNA技术的研发工作于2017年展开，目前在药物设计、生产和制剂递送方面已申请多项发明专利。公司自主研发的MRNA新冠疫苗和狂犬病疫苗，目前都取得了启辰生生物科技有限公司（简称“启辰生”）成立于启辰生生物科技有限公司（简称“启辰生”）成立于2015年，是一家专注于mRNA核酸启辰生拥有“一体两翼”的核心技术平台。“一体”为mRNA核酸技术平台，可进行mRNA分子设计和结构修饰，独特的“TriVac”肿瘤相关抗原（TAA）修饰技术，可增强适应性免疫应答，有效增强癌症疫苗的临床疗效。启辰生核心技术平台中的“两翼”，指纳米和细胞两种mRNA递送技术平台，双通道解决个性化治疗和规模化生产的需求。纳米递送系统：启辰生拥有自主LNP-mRNA脂质纳米疫苗制备和冻干工艺，可有效解决mRNA疫苗稳定性差的问题。细胞递送系统：在mRNA-负载DC疫苗基础上进行一系列2023年1月10日，启辰生生物研发的治疗原发性脑胶质母细胞瘤的mRNA-DC疫苗—SurvivinDC细胞注射液，获得CDE的临床试验批准，成为国内首个获批开展临床试验的mRNA-DC肿瘤治疗性疫苗产品。商业化生产的RNA合成、纯化、分析质控工艺，并研发了表达效力更高的通用RNA模板(包括自复制和非自复制RNA)。借助于其高效的筛选平台，嘉晨西海开发了包括聚合物和纳米脂质体颗粒在内的一整套RNA递送系统。嘉晨西海拥有多个自主知识产权的分别适用JCXH-211：2022年3月28日，嘉晨西海自主研发的编码IL-12的自复制mRNA疫苗JCXH-211获得FDA新药临床试验批件，该款疫苗是全球首款表达细胞因子的自复制mRNA，用于晚期实体肿瘤治疗，这也是国内mRNA技术公司首次获得FDA临床批件。其于2022年11月JCXH-105：美国东部时间2023年01月06日，嘉晨西海自主研发的RNA带状疱疹疫苗(JCXH-105)新药注册临床试验申请获得美国食品药品监督管理局批准进行新药注册临床试验申请获得美国食品药品监督管理局批准进行I期多中心临床试验。JCXH-105代表着嘉晨西海首个针对潜伏病毒引起的慢性传染病的试验性疫苗进入临床试JCXH-107：美国东部时间2023年7月27日，嘉晨西海自主研发的mRNA四价季节性流感疫苗(JCXH-107)新药注册临床试验申请获得美国食品药品监督管理局批准。JCXH-107是一款基于使用修饰核苷酸的常规（非自我复制）mRNA的试验性疫苗，也是嘉晨西海重点布局的呼吸道病毒疫苗管线中的重要一环。JCXH-107是嘉晨西海第三款RNA传染病疫苗，也是中国首款获批展开临床试验的mRNA流感疫苗。JCXH-108：2024年5月21日，嘉晨西海宣布其mRNARSV疫苗JCXH-108获得FDA临床试验批件。JCXH-108使用嘉晨西海特有的非复制mRNA表达平台和RTU递送技术。JCXH-108的动物免疫原性相比较于Moderna版本(mRNA-1345)具备非常显著的优势，并且在极低免疫是国际范围内为数不多的掌握脂质纳米粒(LNP)底层技球领先的具有自主知识产权的LNP递送技术，并在全球范围内进行了专利布局。深信生物已与多家国内外生物医药公司达成合作，以共同开发或授权方式，使得更多的公●LNP递送技术平台：设计并构建了结构多样性极强的脂质体库，是全球范围内少数掌握核心脂质体底层设计技术的公司之一。在面对不同应用场景时，分析优化合成的LNP子化脂质的LNP库，可应用于多种创新疗法的开发，包括mRNA疫苗及药物、在体基因●mRNA技术平台：深信生物致力于通过合理设计和优化序列，寻找可与核糖体结合的最佳序列，以更高效和更持久地翻译出蛋白质。对于mRNA序列优化、非编码区原件的设计等也均具备自主研发的专利技术。此外，在CMC工艺开发方面也均具备专利技术及“know-how”能力，并具备GMP级别Lipid及mRNA-LNP制剂样品生产供应能力。2024年01月12日，深信生物宣布其自主研发的二价呼吸道合胞病毒（RSV）mRNA疫苗IN006获得美国食品药品监督管理局（FDA）新药临床试验申请（IND）许可。这是全球首款二价RSVmRNA疫苗获得FDA的IND许可，也是深信生物收获的第三个美国FDA的IND许可。IN006是深信生物第一款在美国进入临床的管线，用深信生物拥有自主知识产权的融合前F蛋白设计，含有编码RSV-A和RSV-B两个稳定融合前构象F蛋白的mRNA，是同时针对RSV-A和B两种亚型的二价mRNA疫苗。2023年9月23日，IN001获得美国FDA临床试验许可。IN001采用自主设计和优化的mRNA序列及自主知识产权的脂质纳米颗粒递送系统，是继Moderna和辉瑞/BioNTech之后全球第三款在同样mRNA技术路线获得美国FDA临床实验许可的带状疱疹疫苗产品。2024年5月7日，IN001新药临床试验申请(IND)获CDE受理，为深信生物第二款中美双报的mRNA疫苗。目前，深信生物共有三款mRNA疫苗在美国进入临床试验阶段（还仁景生物2021年成立于苏州生物医药产业园BioBAY，致力于开发基于mRNA技术的创新药物，以满足中国和全球重大未满足临床需求。仁景生物具备mRNA药物全链条自主研发及临床生产能力，同时拥有线状发及临床生产能力，同时拥有线状mRNA、环状mRNA、新型LNP靶向递送三大技术平台。在此基础上，公司自主开发的AI算法以及高通量筛选平台，确保在靶点发现、药物充分验证了相关药物的设计、递送以及CMC相关核心技术。伴随着技术平台及管线推进，仁景生物在功能导向性mRNA设计优化、LNP相关脂质及配方、新型高效与靶向递送、CMC及规模化生产等关键技术上拥有全面自主知识产权及相应全球专利布局。现阶段公司专注于研发肿瘤治疗性疫苗、肿瘤免疫治疗药物及蛋白替代产品。目前HPV相关肿瘤治疗性mRNA疫苗RG002已于2023年10月27日获得美国食品药品监督管理局（FDA）新药临床试验申请（IND）许可，用于治疗人乳头瘤病毒（HPV）16型和/或18的mRNA-LNP治疗性疫苗。阿法纳生物是一家专业从事mRNA技术平台下的药物研发及产业化的生物医药企业。团队以中国科学技术大学王育才教授为核心，依托中科大丰富的资源和团队的积累，在mRNA药物研发的核心环节具有丰厚的积累。创始人王育才博士专注于纳米载体、核酸递送技术研究超过15年，其他核心团队在mRNA纯化工艺、序列优化等领域拥有丰富经验，擅长mRNA序列优化、递送系统。目前，公司已建立了完善的mRNA药物生产平台，并在mRNA递送平台的底层核公司还拥有自主知识产权的AI辅助抗原与RNA序列设计、新型免疫佐剂、环状RNA等几大特色技术平台。阿法纳生物成功获得了针对奥密克戎变异株的新型冠状病毒mRNA疫苗AFN0128的临床批件；2024年4月16日，阿法纳生物研发的呼吸道合胞病毒（RSV）mRNA疫苗AFN0205IND申请获得CDE受理。mRNA疫苗生产可分为两大块，原料药(mRNA)的生产以及制剂(利用脂质微粒进行包封)阶段。mRNA生产涉及DNA原液制备和mRNA原液的制备。所以mRNA疫苗的生产可分为三大阶段，第一步DNA原液制备，第二步mRNA原液的制备，第一步:DNA模板生产，主要是质粒生产。编码抗原的DNA模板生产，常用大肠第二步:mRNA原液的制备，转录，由DNA到RNA。在无细胞的反应器内进行转录，通过T7、SP6或T3等RNA多聚酶作用，通过一步或者两步法转录成为mRNA同时加上5’的Cap及3’的PolyA尾巴,在进一步使用DNA酶将残留的DNA模板进行消除;纯化，使用离子交换等层析步骤进一步将转录形成的mRNA进行纯化，第三步:制剂阶段，利用脂质微粒进行包封。通过微流体泵精确地控制着mRNA原液和脂质流速，将他们混合成脂质纳米粒INP。最后则是成品的灌装及质量控制，mRNA药物制备流程示意图近岸蛋白质科技有限公司成立于2004年,近岸提供一系列mRNA体外合成酶及试剂，解决mRNA疫苗的关键痛点。所有产品均采用药用规格原辅料生产，严格控制宿主蛋白质残留、核酸残留及常见病原体污染，符合GMP规范的产品生产与质量管理规程，保障生产过程及所有原辅料可追溯。产品特点:GMP级mRNA诺唯赞成立于诺唯赞成立于2012年，是一家围绕酶、抗原、抗体等功能性蛋白及高分子有机材料进行技术研发和产品开发的生物科技企业，依托于自主建立的关生物科研、体外诊断、生物医药等业务领域，是国内少数同时具有自主可控上游技术开发依托自主核心技术，搭建自主可控的关键共性技术平台，可快速、高效、规模化地进行产有机化学和材料学等多领域复合型研发人员组成，其中50%以上的研发人员拥有硕士及翌圣生物成立于2014年，是一家专注于工具酶原料及抗原抗体研发与生产的高新技术型企业。公司现阶段建设有分子、蛋白、细胞和免疫四大技术平台，涵盖全面丰富的产品线，包括PCR、qPCR、高保真DNA聚合酶、逆转录相关制剂、克隆试剂盒高通量测序MaxUP系列DNA和RNA建库试剂盒、细胞培养、支原体检测/预防/去除试剂，以及体外诊断相关的酶原料、试剂和磁珠等3000多种试剂和试剂盒，服务于全国各级高校、研翌圣生物作为国内分子酶产业创新领导者，通过先进的酶)，经过GMP工艺生产获得,完全满足疫苗生产所需,并提供其他mRNA疫苗相关的酶上海兆维科技发展有限公司于2001年6月成立。公司主要从事核苷、核苷酸系列产品和分子生物学试剂的研发和生产。上海兆维是国内最大的能够生产高品质的修饰碱基，dNTP，NTP，靶向示踪剂等产品，是核酸合成领域当之无愧的隐形冠军，在国内外核酸是一种新兴的研发生产外包组织。CDMO的服务对象主要是医药生产企业和生物技术公司，特别是为创新药物提供工艺研发、制备、工艺优化、注册和验证批生产以及商业化定凯莱英生物是凯莱英医药集团旗下的全资子公司，提供成熟的mRNA药物一站式CDMO服务，拥有高效低成本的共转录加帽、转录后加帽、mRNA递送平台，可以生产高质量的mRNA原液和mRNA-LNP，致力于为客户提供从早期研究的mRNA药物合成、临床阶段的工艺开发、GMP生产到注册申报的一站式mRNA服务。凯莱英生物拥有全面的分析检测服务能力。理化分析、质谱表征、生物活性分析、质量控制和放行检测四大分析平台，可覆盖重组蛋白、mAb、ADC、mRNA和质粒等产品的方法开发，转移，验证，理化及活性表征，放行和稳定性研究等分析检测需求，保障客户项含量、完整性、纯度、杂质分析（产品相关杂质、工艺相关杂质）、安全性检测、活性检在苏州和武汉均设有研发中心和产业化基地，旨在为基因细胞治疗药物和核酸药物从产品研发、质量研究、临床应用至产业化阶段提供全产业链的一站式CDMO服务。瑞典斯德哥尔摩大学、清华大学、天津大学、中国药科大学、军事医学科学院等国内楷拓生物设有符合中国、美国和欧盟临床及商业化标准的GMP产业化基地，GMP厂房面积超10000㎡，包含4条质粒GMP生产线、2条mRNA+3条LNPGMP生产线、2条GMP无菌灌装线，配有研发实验室、技术转移场地、GMP车间、质控实验室，全套功能区覆盖。高灵活度规模化GMP质粒生产供选择，质粒GMP生产线包括1条20L-100L、1条500L、2条50L三种规模；mRNAGMP生产线包括1条2LmRNA、1条20LmRNA两中科新生命，国内最早的蛋白质组学公司之一，于近日宣布进军中科新生命，国内最早的蛋白质组学公司之一，于近日宣布进军mRNA领域，2023年7月，中科新生命顺利完成了客户mRNA-LNP首批次生产的交付，标志着公司成功建立起mRNA药物CDMO中科新生命mRNA药物CDMO平台占地2000平方米，按照cGMP质量规范建设和管理。平台拥有上游生产线、配套原液纯化生产线以及无菌灌装线；拥有EBIOSTATRM25L/50LWave反应器、全套Cytiva层析系统和相关配套设备、包封仪、无菌公司在mRNA药物分析检测平台的基础上，完成建设mRNA药物工艺开发和样品制备能公司在mRNA药物分析检测平台的基础上，完成建设mRNA药物工艺开发和样品制备能力，打造一站式mRNA-LNP的CMC研发整体解决方案，具体可提供：质粒线性化、体外转录、LNP包封、纯化制备以及无菌等工艺开发服务、基因编辑用gRNA的GMP纯化生产工作、分析方法开发和验证，关键质量属性研究以及稳定性研究、配套的IND申报药明生物具有为mRNA药物和疫苗提供广泛的工艺开发和GMP生产支持能力。提供从早期工艺开发和初始质粒DNA生产到原液和制剂灌装GMP生产的端到端服务。GMP生产服务包括高达300L发酵规模的质粒DNA生产和50L规模的mRNA体外转录和纯化。有最先进的mRNA-LNP生产系统和机器人无菌灌装系统可用于mRNA的制剂生产。序列优化、MCB/WCB建库及检定工艺开发、质粒DNA：大肠杆菌(E.coli),高密度发酵纯化、LNP：封装，超滤/渗滤，制剂和灌装、技术转移和放大、GMP生产：原液生产和制剂生产、全方位的分析方法开发和QC检测能力、全方位CMC开发和法规支持等。药明生物的服务涵盖所有关键的CMC工艺，从DNA到IND申报的时间为8个月。除了本就深耕CDMO的企业，许多mRNA企业也纷纷下海，寻求后疫情时代的新出路。随着新冠的退潮，曾经风光无两的mRNA明星背负着高额的研发费用，面对砸钱扩出的过剩产能、仍需等待的未知疗效和不知何时上市的焦急，在新冠疫苗患者突然消失后瞬间崩溃。此时，唯一的也是最好的出路便是做CDMO。比如：2023年8月24日，国产mRNA明星企业斯微生物，宣布对外提供CDMO服务。疫情期间，虽然先后有10多家创新企业入局mRNA疫苗这个细分领域，但是风头最劲、融资最多的，除了苏州的艾博生物之外，就当属位于上海的斯微生物。仅仅从2020年初到2021年6月，斯微生物就完成了超过15亿人民币的融资。今年7月，斯微生物宣布因外部客观环境发生重大变化，已无新冠疫苗需求，为降低企业运营成本，从7月21日起，天慈工厂全面停工停产，相关人员待岗，未来将把精力回归到研发上，可见现金流已经出现问题。从2023年5月拿下亿元D轮融资，7月关厂，再到8月转型做CDMO，大起大落，斯微(上海)生物科技股份有限公司于2016年成立于上海，是国内率先开展mRNA创新疫苗研发生产及纳米脂质体包裹递送技术服务的平台型创新药企，同时是国内少数掌握mRNA核酸设计、合成与修饰技术，脂质体包裹技术与规模化生产技术，以及实现生产相其中，自主研发的新型冠状病毒mRNA疫苗在老挝获得紧急使用授权(EUA)，个性化肿斯微生物拥有国际一流的CMC及产业化能力，打通了mRNA疫苗从小试研发到规模化生产的一系列平台技术，依靠平台技术成功完成3个mRNA项目在CDE的IND申报，具有丰富的mRNA药物临床前研发经验。康，称已与阿斯利康签署了《产品供应合作框架协议》，康希诺将向阿斯利康提供合同开发和生产服务以支持其mRNA疫苗项目，生产和供应特定产品，并提供相关特定服务。基于康希诺拥有研发、生产和商业化创新疫苗产品的丰富经验及技术，阿斯利康正在研发mRNA疫苗，双方于2023年8月7日签署协议，合作将专注于利用康希诺mRNA生产平协议主要内容包括预留产能，康希诺应在其生产设施中预留并向阿斯利康及其附属公司提供充足产能，使康希诺能够生产并向阿斯利康提供特定的mRNA候选疫苗产品的毒理研康希诺在公告中表示，它建立的mRNA技术平台，拥有自主设计、开发的序列优化软件，可得到影响稳定性的关键位点及有效提高抗原表达量的最优序列，CMC工艺简练，可以缩短产品开发时间，快速实现科研成果产业化；康希诺已初步完成mRNA疫苗生产基地一期项目，以支持基于mRNA平台产品的研发及商业化。本次与阿斯利康的协议签署是康希诺能力被国际医药公司认可的重要标志，肯定了康希诺在mRNA技术平台方面的研发实力及竞争优势，有利于康希诺mRNA生产平台的进一步mRNA药物递送主要有三道屏障：●胞外膜屏障-mRNA与同样带负电荷的细胞膜表面静电排斥，难以穿过；易被体内的多种酶迅速降解,因此为保证mRNA在转译前保持完整性，mRNA需要在内●胞内免疫应答-mRNA进入细胞后要从内涵体中逃逸至细胞质中才能用于编码蛋白，同时外源性的mRNA具有免疫原性，易激活人体免疫系统，还要避免被免疫系统识别才能所以，针对目前mRNA技术的关键挑战，有以下解决方案：mRNA疫苗产生的正确序列抗原蛋白以及稳定性决定了其激活的特异性免疫活性和精确性，抗原蛋白的序列和结构则由mRNA序列影响和控制。因此，mRNA序列决定了疫苗的质量，是mRNA疫苗产品的核心竞争力要素。mRNA中一部分片段是编码组成蛋白质的序列，另一个部分则控制调节蛋白质的转译效率和结构。mRNA序列中，最终被转译成为蛋白质组成序列的部分被称为编码区域，编码区域前后分别有一个非转译区。编码区域中部分密码子组合会转译成同一种氨基酸（同义密码子），但在某一密码子组的偏好即免疫原性较小的密码子组合，不易被酶类识别降解，而它的同义密码子则可能引起过敏反应。因此，mRNA疫苗需要选择近人源性的同义密码子，尽可能规非转译区调控mRNA和蛋白质的表达效率及稳定性。编码前后的非转译区（UTR）负责调控转译及蛋白表达，对mRNA的转译效率、半衰期、表达量等有影响。用转译效率计算相同单位mRNA疫苗产生抗原的速度、半衰期用来推断mRNA能够产生抗原蛋白的时间、表达累计最高水平用以推断每单位mRNA在某一时刻能产生的抗原量的最高水平。同时，UTR中的GC水平、U水平均会影响mRNA的免疫原性，对疫苗的安全性和能否3’端Poly(A)尾位于mRNA尾部，可提高mRNA的稳定性和转译效率,A指腺苷能够降低核糖核酸酶（RNases）的效率，以此减缓mRNA的降解速度。Poly(A)尾可在建立DNA质粒时直接包含于编码中，也可在DNA转录为mRNA后通过聚合酶（poly-Apolymerase）添加于mRNA尾部。另一个结构mRNA最前端的5’帽结构，对于降低mRNA免疫原性、增强稳定性和翻译效率有正面影响。在体外转录（IVT）过程中，mRNA5’端会含有三磷酸盐部分，具有很强的免疫原性。若不去除这一部分，当mRNA被递送进入人体细胞后，mRNA无法在递送系统有三大职责，一是有效包裹保护mRNA在到达目的地前维持稳定，二是携带保护mRNA有效成分进入细胞，三是在mRNA遭遇溶酶体前将其释放进细胞质中。目前，已经开发了多种递送载体用于促进mRNA疫苗（药物）的细胞摄取并保护其免于降解。主要的非病毒载体有鱼精蛋白、脂质体、树突细胞、无机纳米粒子等。其中，脂质体能够可递送不同大小片段的mRNA；作为递送载体不受宿主限制等优点，成为递送mRNA最LNP（LipidNanoparticle）是脂质微粒的总称细胞膜的组成成分相似，均由脂质分子构成。脂质分子的两条长尾原本呈平行状态为稳定的双分子层。在进入细胞质酸性环境后，部分脂质的头部质子化，呈现阳离子形态，与其他阴性离子态的脂质分子相吸引，尾部张开。原本双分子层的形式被破坏，形成头部聚集在一起的环状，这样之前包裹在内的mRNA便可逃逸出内涵体，进入细胞质待转译。mRNA药物递送载体，以LNP为例主要组合方式为可电离脂质、胆固醇、辅助脂质、聚1）基于肽的RNA递送平台：该公司专有的、基于肽的SemaPhore平台在mRNA疫苗递送方面的应用，SemaPhore平台有望代替LNP递送系统，在mRNA领域中有广泛地应用纳米颗粒的mRNA疫苗。SemaPhoreSemaPhore™（递送mRNA）使用了一种具有21个特定的氨基酸肽，可以使任何类型的RNA快速自组装成复合物，RNA复合物具有大小、电荷和其他物理特征，使其能够避免肝脏清除，从而靶向递送至肝脏以外的其他目标组织。同时RNA复合物在血液循环中保持稳定，可避免RNA有效载荷在循环中降解，并可确保只有被细胞摄取后才会在胞内释释放的肽与内体膜相互作用，使其渗透并释放RNA到细胞质中。与LNP相比，OligoPhore™主要优势如下：1）可靶向多个器官，不仅局限于肝脏；2）药物稳定性更高；3）有效的内体逃逸；4）具有靶向特异性，可全身给药，但药物仅作用于病变组织；5）更具安全性，多次连续给药后，未观察到对细胞或适应性免疫反应，也未目前，SemaPhore™递送mRNA的有效性和积极治疗结果已在各种小鼠疾病模型中得到Univercells的合作将首次探索其在递送mRNA疫苗中的潜在用途。目前在mRNA疫苗领域使用的递送载体在细胞入口时存在显著的mRNA损失率；此外，它们可能会导致局部或全身副作用。SemaPhore™减少了细胞入口时的mRNA损失，这可能允许使用更低的剂量。2）基于人体蛋白质PNMA2的RNA递送方式究论文，在这项研究中，研究团队探讨了人类PNMA蛋白质形成衣壳并包装和递送RNA的潜力。该研究发现，人类细胞分泌了许多PNMA蛋白，其中PNMA2能够有效地形成二十面体衣壳，并能够在体外从重组蛋白质中进行自组装。他们使用了冷冻电子显微镜(cryo-EM)来解析PNMA2衣壳的结构，并使用结构引导工程来修饰PNMA2蛋白衣壳以包装mRNA。结果显示，这些工程化的PNMA2衣壳可以功能性地将mRNA递送到受体细胞中。除了PNMA2，还发现了PNMA家族其他能够形成病毒样衣壳的成员，这表明它化学修饰polyA尾可增强mRNA的翻译能力：通过合成带具有多个合成polyA尾的mRNA来延长mRNA蛋白表达的持续时间并提高表达水平。2.3环状RNA和自复制RNA癌症免疫治疗、蛋白质替代治疗和基因编辑方面有着广阔的可应用空间，目前相关管线布未修饰时的免疫原性较低，可有力补足mRNA的不足，充分发挥RNA治疗的潜力。因此，化的合成方法，但它们的效率会受到基因序列（由于结构相互作用）和长度的影响，从而导致产量低下；2)纯化挑战，需要多种纯化方法才能有效分离产物；3)递送挑战，虽然靶向地递送到特定的细胞或组织；4)由于circRNA是一类新的RNA疗法，因此，它们的药代动力学和在体内的生物分布有待更多研究。这使得预测最有效的剂量和给药方案变得具有挑战性；5)免疫反应挑战，虽然未修饰的circRNA被认为比未修饰的线性RNA免疫原性低，但目前尚不清楚circRNA必须有多纯才能获得最佳治疗效果。circRNA在基于RNA的药物领域是一种有潜力的RNA形式，有望颠覆个性化治疗手段。自复制mRNA（self-amplifyingmRNA，SAM）是一种合成RNA，具有在宿主细胞内自我复制的能力，导致靶蛋白表达增加，这一特性使其成为疫苗开发和基因治疗的有前途的工具。诺贝尔奖获得者DrewWeissman博士表示：“SAM技术有望成为一种持久的疫苗选一款SAM新冠疫苗：ARCT-154，用于18岁及以上成人初次接种和加强接种。ARCT-154成为全球首款获批上市的自复制RNA疫苗。SAM由于其复制特性，仅需约1/6线性mRNA剂量的疫苗即可达到相同的蛋白表达，剂量的优势可以显著降低其生产成本以及由剂量带来的免疫目前，SAM疫苗已可用于传染性疾病、细菌病原体、寄生虫以及癌症的临床研究治疗，应用前景广泛。但其也有诸多限制因素，如复制酶的高长度严重限制了GOI的长度，进而限制了SAM的广泛应用；源于病毒的结构蛋白本身具有高度免疫原性，为疫苗的申报与注册带来了挑战；同时SAM疫苗与循环病毒的重组可能性，进一步提高了潜在的安全风险。我们期待SAM技术可以克服诸多挑战，成为mRNA技术的后起新秀。1)基于mRNA的CAR-T细胞疗法：目前临床应用中工程化CAR-T细胞的方法主要采用病毒载体，导致CAR永久表达并可能产生严重的负面影响。作为应对这些挑战的解决方案，通过递送mRNA在T细胞中短暂表达CAR已成为一种有前途的策略，在这之中，电穿孔是将编码CAR的mRNA导入T外泌体和肽转导域。这些新型递送系统的出现，为基于mRNA的CAR-T细胞疗法带来了这些递送系统可以提高mRNA的稳定性和转染效率，并且具有更低的细胞毒性和最佳地药物，也是同类首创的靶向BCMA的mRNA工程化嵌合抗原受体T细胞疗法（mRNACAR-T），可用于治疗自身免疫性疾病治疗。Cartesian专有的RNAArmory平台融合了传统基于纳米颗粒的RNA疗法与传统DNA工程细胞疗法的优势，其CAR-T方案可在门诊环境中输注，不需要预处理化疗，具有可预测的半衰期并避免基因组整合的与传统的CAR-T疗法相比，应用mRNA技术生成体内细胞疗法有望降低80%—90%的生产成本，再加上mRNA技术成药速度快、安全性高，从而有望降低CAR-T细胞治疗费用，（FAP）mRNA靶向递送至T细胞，实现体内CAR-T细胞的快速制备，以减少心脏纤维化，诺华、BMS等跨国药企旗下的风投纷纷参与这轮融资，可见大厂们均在布局和看好这一技术。据星耀研究院不完全统计，当前国内至少有11家mRNACAR-T细胞疗法开发企业（不含CXO包括博生吉、先博生物、星锐医药、百替生物、石药集团和长星生物等。大部分企业采用的是LNP递送mRNA的方式，也有企业采用电转，这两种方式也是当下的主流另外mRNA癌症疫苗不仅能够化解CAR-T疗法在单独应用时可能引发的CRS细胞因子BioNTech在AACR年会上公布了其CAR-T+CARVac联合治疗Claudin6阳性实体瘤的1/2期临床初步数据，显示出良好的安全性和令人鼓舞的初步治疗效果，这也是通过mRNA疫苗来改善CAR-T细胞的扩增和持久性的首次人体试验。去年8月，科济药业与Moderna公司达成战略合作，共同探索科济药业的实体瘤CAR-T管线CT041与Moderna2）基于mRNA的体内基因编辑疗法：传统基因治疗外，mRNA也加入了基因编辑疗法。基因组编辑通过精确插入、移除或替换基因组DNA中特定位点的DNA序列，为遗传疾病提供了有希望的治疗方法。CRISPR/Cas9系统的革命性发现导致了基因编辑的爆炸性增长。Cas9mRNA和sgRNA的共递送可到目前为止，肝脏一直是大多数基因编辑系统的主要靶标，因为这些平台在该器官中更可取地积累。为了拓宽基于mRNA的基因编辑的体内应用，Cheng等人开发了一种用于不同器官基因编辑的SORTNP平台。通过添加补充SORT分子将Cas9mRNA/sgRNA特异性递送到肺、脾脏和肝脏，并选择性编辑各种细胞类型，包括肝细胞、上皮细胞、内皮细胞mRNA疫苗作为一种新型药品，人们对其安全性和有效性至今仍存在疑虑与争议。为了建立公众对基于mRNA技术的创新产品的信任和信心，同时规范行业良性发展，监管指南国际上目前已出台了一些致力于评估mRNA质量的通用方法，将支持全世界的开发者、制造商、监管机构和国家控制实验室，并提供工具来帮助加快基于mRNA的安全有效产品的开发。目前针对mRNA疫苗这一品种的国外法规主要有2个，按照时间次序分别为：2023年2月，美药典USP出具了《mRNA疫苗质量分析流程》草案，支持mRNA疫苗和疗法的质量评估，帮助公司和监管机构更快地将创新药物推向市场，USP希望通过质量共这些指南草案包括从公开来源改编的方法，并经过USP生物制品科学专家委员会的审查，该委员会包括来自行业、政府和学术界的代表。本文件还纳入了美国药典国家处方集中本次USP的指南草案提供了评估mRNA原料特性、纯度、数量、物理状态(完整性)和安全性的质量属性的方法，对原料的质量提供了可参考的规范，可供相关研发人员参mRNA原料的质量取决于其设计、开发和在开发和制造过程中所用规范。指南草案提供了评估散装纯化mRNA原料的特性、纯度、数量、物理状态(完整性)和安全性的质量属性的方法，如下表所示。这些方法也可用于从LNP中抽提的mRNA。▲mRNA原料的质量属性（USP《mRNA疫苗质量分析流程》草案）同时，该指南草案详细介绍了鉴定、定量、RNA完整性和纯度的方法，汇总见下表。mRNAmRNA原料药的特性及释放度测试（USP《mRNA疫苗质量分析流程》草案）mRNA药品的特性及释放度测试（USP《mRNA疫苗质量分析流程》草案）mRNA疫苗或治疗产品研发投产过程中的一大难点就是各个关键步骤的质控分析和测试。此前，2020年8月，NMPA药品审评中心曾颁布《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则(试行)》，主要针对非自我扩增型mRNA疫苗，明确现阶段对mRNA1.2WHO文件WHO文件截图WHO文件提供了关于人用预防性mRNA疫苗的生产和质量控制，以及非临床和临床评估的关键方面的信息和监管考虑，特别是针对传染病的疫苗质量、安全、效力的评价，提供了建议性文件。尽管此类疫苗中最先进的疫苗是针对新冠的，但WHO明确表示，不应将文件中，对mRNA疫苗的制造和控制、关键质量控制点、疫苗结构和组成的一般信息和说明、mRNA序列和元件排列、配方和成分、起始材料、原材料和辅料的质量控制、以质粒为起始材料的线性DNA质量、原辅料放行、工艺开发和中间过程控制、产品特性、生文件还概述了在适当情况下的具体考虑，以帮助申办人开发多价mRNA疫苗或针对某些病原体改变现有疫苗株。复制子、病毒载体和RNA复制子(包装在病毒蛋白中或由质粒DNA编码)不属于文件范围。此外，文件不适用于治疗目的的mRNA和sa-mRNA产品(与主动免疫相反)。其范围还排除了表达用于疾病预防或治疗的单克隆抗体的mRNA产品。WHO建议使用监管灵活性来支持mRNA疫苗的评价，“详细的生产和控制程序,以及可能影响mRNA疫苗质量、安全性和有效性的任何重大变化”应与国家监管机构逐案讨论国内也紧跟国际步伐，随着国内的企业也大量布局此赛道新，国内也不断出台了相关政策法规，以促进和规范化此行业的发展。下面会由大到小来发展的重要力量，加快培育和发展战略性新兴产业作为我国推进产业结构升级、加快经济十四五”医药工业发展规划明确指出，1)新型疫苗研发和产业化能力建设。紧跟疫苗技术发展趋势，基于应对新发、突发传染病需求，支持建设新型病毒载体疫苗、脱氧核糖核酸(DNA)疫苗、信使核糖核酸(mRNA)疫苗、疫苗新佐剂和新型递送系统等技术平台，原则《体外基因修饰系统药学研究与评价技术指导原则发单位申报上市阶段的建议性技术要求提供指导意见，同时，也作为监管机构评价的重要参考，其中也涵盖了我们特别关注的mRNA相关部分：RNA类基因修饰系统属于非病毒载体类基因修饰系统的一种，以mRNA的制备工艺为例，该工艺一般采用DNA转录模板进行mRNA体外转录、mRNA加帽、去磷酸化、DNA酶处理、mRNA纯化等步骤。《原则》建议：对工艺参数进行研究与优化，开发稳健的工艺，确保mRNA序列正确性、结构完整性、生物学活性和不同批次间质量的一致性。制备过程中需设置合理的过程控制指标，如mRNA浓度、双链mRNA含量、不完整mRNA含量、残留DNA、无菌、细菌内毒素等；质量控制项目可以包括理化性质、纯度和杂质、生物学活性、微生物安全性等。其中，mRNA类的质量标准可以纳入外观、pH值、含量、鉴别、序列分析、mRpoly(A)长度及分布、生物学活性、无菌检测、细菌内毒素、双链RNA残留、溶剂残留等为指导我国新冠疫苗的临床研发，提供可参考的技术标准，在国家药品监督管理局的部署等5个指导原则的通告。虽然主要是针对新冠的，对于其它mRNA品种也会有较大的参指导原则明确，为加快新冠疫苗研发和上市进程，允许在确定最适宜的免疫程序和剂量前进入Ⅲ期临床试验，可以考虑在Ⅲ期临床试验过程中变更免疫保护效力，且具有可以接受的安全性，则具备获准上市的条件。疫苗上市后，应继续观察根据目前的这些政策可以看出，国内和WHO出具的指导文件，更多是关于mRNA的设计、开发、生产，最终的活性评价，以及一些临床方面的思考，因此针对的是整个开发和生产应用过程。而FDA的质量草案则更加聚焦mRNA质控的指标，为这些指标提供了更具体的分析方法以及参考标准等。这时候便需要企业思考该如何进行一些政策法规的选择和具在选择政策上，可以进行一些大的品种参考，比如mRNA就可以参考基因治疗相关标准，或参考FDA、EMA制定的其他一些易接受的标准。除了参考政策，相关的与监管层沟通和与CDMO合作也是必不可少的。可以从框架上参考国内的指导原则和WHO的原则，按照其指导性意见、流程进行。遇到一些相对模糊的指导意见时，可以一方面参考一些其它的质量草案中的分析方法；一方面疫苗是一个动态的数据更新过程，相关的指南、法规也可能会不断更新改进。因此对政策第一，要和行业最前沿的认知进行频繁的交互和共鸣，从而达成一致，这样和监管层达成第二，选择适当的沟通方式。从官方角度，在药品申报前可以通过申请人之窗的形方沟通，同时也可以进行一些线下的交流；从非了解他们的监管思路，因为有时候官方渠道的信息交互不是很集成。如果能够更好地体会除了以上方式，企业还可以与经验丰富的CDMO加强交流、合作。CDMO不仅依靠平台化的成本优势而服务于制药和医疗，同时还能够标准化地提供研究材料反哺基础科研与CRO。一个强大的CDMO不仅能够降低药物的研发生产成本，完整的供应链还能加速药不过目前CDMO市场占有份额表现非常零散，并未出现高度集中化。这是因为不同药物在探索时期，小核酸药物尚处于理论阶段，人们尚且不知故在这一阶段中，小核酸药物发展较为缓慢，从理论实践到第一款药物获批，经历了长达赛诺菲都投下重注，但谁也没有想到的是，当时的小核酸药物并不成熟。先是第一款药物线临床失败，从而导致这一新兴领域的热度迅速降至冰点，不少资金也在这一时期割肉离突破，其第二款产品Mipomersen获批用于治疗纯合子家族性高胆固醇血症，从而再次证重新获得产业认可后，小核酸药物再次成为大批MNC布局的焦点，如果一切顺利，它理然而，突如其来地疫情爆发，使得世界经济停摆；同时，因新冠疫苗声名大噪的mRNA2023年，随着新冠疫情的落幕，MNC逐渐开始将注意力重新回归到之前被冷落的小核酸药物之上。从医药产业逻辑出发，穿透蛋白质表象的小核酸药物无疑是一次技果这项技术成熟，那么极有可能突破现阶段的人类医疗极限。小核酸药物大概率会是下一降低给药剂量和降低毒副作用等方面起到重要作用。按照不同的递送技术分类，小核酸药物递送系统包括脂质类纳米递送系统、聚合物递送系统、核酸偶联递送系统、外泌体递送系统等，目前均存在一定程度的技术挑战，需要通过优化合成设计以解决递送系统自身毒从市场规模来看，随着2016年两款A