液相色谱仪检测分析脂肪酸案例 液相色谱如何操作

第第页液相色谱仪检测分析脂肪酸案例液相色谱如何操作LC600高效液相色谱仪（等度配置）P600宝石恒流泵1台UV600紫外检测器1台7725i六通进样阀1只进口C18柱

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1套液相色谱LC600高效液相色谱仪（等度配置）P600宝石恒流泵1台UV600紫外检测器1台7725i六通进样阀1只进口C18柱

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液相色谱仪检测分析脂肪酸案例配置：样

品：未经衍生处理的亚麻酸等6组分的混合物色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，四元梯度泵，色谱工作站检测器：500型ELSDAlltech蒸发光散射检测器漂移管温度为65℃，氮气流速为2.0L/min色谱柱：AlltimaTMC18，5μm，柱长25cm，柱径2.1mm流动相：A为水，B为乙腈梯

度

时间0min10min15min20minA13%

20%20%

5%

B77%

80%80%

95%流

速：0.4mL/min进

样：20μL结

果：全部组分20min之内全部流出，各组分完全分别，组分流出次序为：峰1为亚麻酸，峰2为肉豆蔻酸，峰3为亚油酸，峰4为棕榈酸，峰5为油酸，峰6为硬脂酸。

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高效液相色谱仪的正确安装事项如下：

1、要注意防止灰尘玷污光学元件

该仪器很多检测器都是属于光学类的分析仪器，这些光学元件很简单受到灰尘玷污，光学元件一旦被玷污，就会引起很多麻烦。与光学元件受潮后效果一样，紧要是使光学元件的反射率降低，从而影响仪器的灵敏度。另外，还会使得杂散光增大，噪声增大，减低检测器的灵敏度，使得分析测试的误差增大。因此，安置本该仪器的房间要干净、通风、防尘，同时还要注意防止震动。

2、要注意防止干扰

要注意防止电、磁场的干扰。电、磁场的干扰是影响高效液相色谱仪稳定性的紧要因素。一般来讲，安置该仪器的房间，应当阔别电场、磁场干扰。

3、要注意防湿防潮

本仪器是光、机、电、计算机四位一体的、技术密集的高科技产品，它的每一个部分都不允许受潮。否则，将会使有关的元器件损坏或性能变坏，影响仪器的稳定性。

注：使用高效液相色谱仪时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质次序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判定待测物所含有的物质。高效液相色谱作为一种紧要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是接受了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。

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高效液相色谱仪操作步骤

高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分构成。与经典的液相色谱相比，具有高效液相所用的固定相粒度小（5um—10um）、传质快、柱效高的优势。近年来，在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分别测定等应用广泛。世界上约有80％的有机化合物可以用HPLC来分析测定。

高效液相色谱的分别过程HPLC，借溶质在两相间调配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分别。

高效液相色谱仪操作步骤：

1）过滤流动相，依据需要选择不同的滤膜。

2）对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。

3）打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

4）进入HPLC掌控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

5）一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。

6）调整流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000、点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，察看基线的情况。

7）设计走样方法。点击file，选取selectusersandmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，依据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2—5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading—i