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文档简介
1猪伪狂犬病毒gE抗体磁微粒化学发光检测方法GB/T6682分析实验室用水规格和试NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范4符号和缩略语AE:吖啶酯(AcridiniumEster)CLIA:化学发光免疫分析法(ChemiluminescenceImmunoassELISA:酶联免疫吸附试验(EnzymeLinkedImPRV:伪狂犬病毒(PseudorabiesviPPRV:猪伪狂犬病毒(PorcinePseudorabiesViru5.1磁微粒工作液25.3抗体工作液5.4抗原工作液5.9化学发光底物6.1高速冷冻离心机(最大转速:150006.32℃~8℃冰箱,-20℃冰箱3在一周内检测,可置2℃~8℃条件下保存,若超过一周检测,应置于-20℃以下冷冻保存。待检;若样品中存在沉淀或絮状物等杂质,应离心去除杂质,轻微操作,避免出现9操作步骤9.1校准曲线拟合将PPRV-gE抗体工作校准品1~工作校准品6放入样本架,按照9.2校准曲线校准9.4样本检测4取待检样本于1.5mL/2mL离心管中(样本量需300μL以上),置于专用样品架,设置测试样品信整个检测过程在全自动化学发光免疫分析仪上进行,具体检测过b)清洗:使用磁铁吸附磁微粒30s,使其聚集于管壁,弃去上清液。加入1×洗涤液300μL悬浮磁9.5结果计算检测完成后,以工作校准品抗体含量(3.125U、25U、100U、400U、1600U、6400U)为横坐标、相应检测发光值为纵坐标拟合四参数为标准曲线,四参数公式为Y=(a-d)/[1+(x/c)*b]+d,当R2高5将表A.1中的试剂依次加入烧杯中,加灭菌蒸馏水至600mL,溶解,定容至1000mL,置于2~8℃表A.120×浓缩洗液配方按表A.2中的试剂依次加入烧杯中,加灭菌蒸馏水至600mL,溶解,表A.2校准品稀释液配方6和抗体阴性,按500μg/头份剂量,颈部肌肉注射接种。可进行3~4次免疫,在初次免疫后21d进行加部静脉血,用自然析出法,3000rpm离心10min,分离血清,然后用0.22μm滤器过滤除菌,加入proclin300,使终浓度为0.05%(V/V分装,-20℃保存备用。抗体水阳性的最大稀释滴度判断PPRV-gE抗体水平。若抗体水平大于1:
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