铁皮石斛嫩茎液体培育生产技术规程

DB32/T××××1DB32/T××××—2019PAGE2铁皮石斛嫩茎液体培育生产技术规程1范围本标准规定了铁皮石斛嫩茎液体培育的术语和定义、生产条件、种源培育、培育生产、规模化生产、日常管理、采收、质量等划分和包装、运输及贮存。

本标准适用于铁皮石斛嫩茎液体培育。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期引用文件，仅所注日期版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。GB5749生活饮用水卫生标准

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1铁皮石斛嫩茎液体培育（ThecultivationfortenderstemsofDendrobiumofficinaleinsubmergedculture）从铁皮石斛中分离植物愈伤组织，经诱导分化及驯化筛选，利用离体培养生物技术扩增培育的无农药残留、重金属含量较低、高醇浸出物含量铁皮石斛幼嫩茎的培育技术。4生产条件室内环境为十万级以上洁净度的洁净间。保持室温25oC~28oC。均匀柔和人工光，增补4:1红蓝光，光照强度为2000Lux，光暗周期8h:16h。空气相对湿度40%~70%。生产环境、生产用水和过滤水应分别符合GB5749和GB/T6682的规定。5种源培育与增殖5.1培养基配制采用MS培养基+0.5mg/LNAA+0.5mg/LKT+20g/L葡萄糖+10g/L琼脂固体培养基进行种源细胞固体培养。采用MS培养基+0.5mg/LNAA+0.5mg/LKT+20g/L葡萄糖培养液进行种源细胞液体培养。5.2种源细胞增殖将成熟铁皮石斛茎段插入固体培养基中培养，获得愈伤组织细胞。在相同固体培养基条件下增殖种源细胞。5.3种源细胞培育按照鲜重20g/L~30g/L接种量，采用无菌操作，将种源细胞转接至2L~5L玻璃瓶中进行液体培养。培养过程中向培养液中通入无菌空气，空气流速为0.75L/min~1L/min，培养周期为30d~45d。6培育生产6.1培养基配制采用MS培养基+0.5mg/LNAA+1mg/LKT+20g/L葡萄糖+5%麦芽糖培养基进行培养。6.2培育操作按40g/L~50g/L接种量，将种源细胞转接至10L玻璃瓶中。在培养过程中，将无菌空气通入培养瓶中，空气流速为0.75L/min~1L/min，培养周期为30d~45d。待嫩茎生长总体积至培养瓶总体积的2/3时，采收或留做下一阶段种源。7规模化生产按40g/L~50g/L接种量，将采收的种源细胞转接至50L~100L生物反应器中培养生产，其它按本标准第6章的规定执行。8日常管理一旦发现细菌或真菌的污染，立即将污染品移出培育生产间并进行湿热高温灭菌。9采收采收时剔除褐化植株，用过滤水缓慢冲洗嫩茎3min~5min，300rpm/min脱水离心3min，甩脱浮水后可直接制备成铁皮石斛嫩茎鲜品，或65℃烘干制备为干品。10质量等级划分铁皮石斛嫩茎质量等级划分要求见表1。表1铁皮石斛嫩茎质量等级划分要求等级要求特一级足干，形态规则，长度大于6mm，嫩茎分枝簇状均一排列，翠绿色。特级足干，形态基本规则，长度在3~6mm，嫩茎偶见小嫩叶，黄绿或翠绿色。一级足干，形态相似，长度在1~3mm，嫩茎混有嫩叶，黄绿或翠绿色。工业级足干，形态相似，长度小于1mm，嫩茎混有嫩叶，黄绿或翠绿色。11包装、运输、储存11.1包装分级后分别密封包装，包装上应标注品名、规格、产地、生产批号、合格标