血液分析仪器-袁汀

血细胞分析仪器血细胞的起源、分化、成熟PSC白细胞从原始细胞到成熟，变化是核算含量从多到少，从疏松到致密。一、 发展史手工计数仪器简单计数两分群三分群五分群五分群＋网织红20世纪40年代末，电阻抗法微粒子计数专利。50年代，CoulterModelA型用于临床60年代，测定参数达7项。70年代，全血细胞计数（CBC）。80年代，双通道、白细胞两分群、三分群、五分群。90年代以来，多功能、多参数。二、血细胞分析仪分类按自动化程度：半自动、全自动BCA；按检测原理：电阻抗型、联合检测型、干式检测型BCA；按对白细胞的分类水平：二分群、

三分群、五分群、五分群＋网织红BCA。三、血细胞分析仪检测原理一、库尔特原理：①

血细胞与电解质溶液相比,为相对的不良导体，其阻值大于稀释液；②细胞通过检测器的微孔时，内外电极之间的恒流源电路上，电阻值瞬间增大，产生一个电压脉冲信号；③脉冲信号数，等于通过的细胞数，脉冲信号幅度大小与细胞体积大小成正比。二、电阻抗基本原理

根据血细胞的非传导性的性质，以对电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础，这一原理的应用实现了血细胞计数的自动化，此方法称为库尔特原理。电阻抗基本原理电阻抗法白细胞分群从电阻抗的原理可以看出不同体积的白细胞通过小孔时，产生的脉冲大小不同，而不同类型的白细胞(如淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞)经溶血作用后有明显的差异，因此根据脉冲的大小，即可人为地将血中的白细胞分成几群电阻抗法白细胞分类原理经过溶血剂处理后的白细胞根据体积大小可以初步确认其相应的种类：第一群〔小细胞群)是淋巴细胞(LYM)，第二群是单个核细胞区(MONO)，也被称为中间细胞(MID)；相当于粒细胞的细胞群(GRAN)位于第三群(大细胞群)35-90fl的颗粒被计数为淋巴细胞，90-160fl的颗粒计数为单个核细胞，160fl以上的颗粒计数为粒细胞红细胞计数原理原理同白细胞检测，红细胞通过小孔时，形成相应大小的脉冲，脉冲的多少即红细胞的数目，脉冲的高低代表单个脉冲细胞的体积血红蛋白测定原理被稀释的血液加入溶血剂后，红细胞溶解，释放血红蛋白，后者与溶血剂中有关成分结合形成血红蛋白的衍生物，进入血红蛋白测试系统，在特定波长(一般在530—550nm）下比色，吸光度变化与液体中血红蛋白含量成正比血小板测定原理血小板随红细胞一起在一个系统中进行检测根据不同的阈值、计算机分别给出血小板与红细胞数目检测流程联合检测型血细胞分析仪一、容量、电导、光散射（VCS）体积电阻抗血细胞计数、体积测量电导性电磁探针内部结构光散射激光器颗粒的构型、质量容量、电导、光散射（VCS）检测VCS计数技术可使血细胞未经任何处理，在与体内形态完全相同的自然状态下得出检测结果。首先在标本中加入只作用红细胞的溶血剂使红细胞溶解，然后加入抗溶血剂起中和前溶血剂的作用，使白细胞表面、胞质及细胞大小等特征仍然保持与体内相同状态，接受VCS三种技术同时检测检测原理体积（V）测量使用的是电阻抗法，脉冲峰大小决定细胞体积，脉冲的数量决定于细胞数量电导性（C）根据细胞壁能产生高频电流的性能采用高频电磁探针，测量细胞内部结构，细胞核、细胞质的比例，细胞内质粒大小和密度光散射（S）在10°~70°对每一个细胞扫描分析，提供细胞结构（核分叶、核形态），特别是对细胞颗粒的构型和质量的鉴别VCS检测VCS

运用V、C、S三种探针,在流式通道的某一位点,对通过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检测，以及三维分析,以确定其亚群性质。激光---分析细胞的颗粒特性低频波---分析细胞体积高频波---分析细胞核型三维分析技术将检测过的8,192个细胞分布到一个以V、C、S为三维坐标的空间内，显示出细胞群特征。高智能的计算机软件分析细胞群的位置、相对密度、轮廓和大小。三维坐标的数据分析位点多过16×106个。DIFF通道散点图WBC-D幼稚细胞有核红细胞联合检测型血细胞分析仪二、电阻抗、射频嗜酸性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统淋巴、单核和粒细胞检测系统幼稚细胞检测系统淋巴、单核和粒细胞检测系统

采用电阻抗与射频联合检测直流电及射频两种电流．直流电不能透过细胞浆，仅能测量细胞大小，而射频可透入细胞内，测量核大小及颗粒的多少，因此细胞进入小孔时产生两个不同的脉冲信号脉冲的高低分别代表细胞的大小(Dc)和核及颗粒的密度(RF)，以DC信号为横坐标，RF为纵坐标，就可根据两个信号作为一个细胞定位于二维的细胞散射图电阻抗与射频法（能透入细胞内，测量核的大小及颗粒的多少）。RF:射频电流细胞内部结构信息DC:直流电细胞大小的信息幼稚细胞检测系统原理幼稚细胞膜上脂质较成熟细胞少，在细胞悬液中加入硫化氨基酸，结合在幼稚细胞上的氨基酸较成熟细胞多，且对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂，成熟细胞溶解，而幼稚细胞不受破坏联合检测型血细胞分析仪三、多角度激光散射、电阻抗

检测细胞在多个角度的散射光的强度，反映细胞的大小、核形、核质比以及颗粒的性质多角度激光反应细胞分类原理采用半导体激光及流式原理从两个角度分析白细胞，低角度（1°~6°）散射光分析白细胞体积大小，高角度散射光（8°~20°）分析白细胞的内部结构--0/10/90/90D内部1°-6°

8°-20°DIFF通道FSC：前向散射光：体积SSC：侧向散射光：复杂程度SFL：侧向荧光：DNA/RNA含量多角度激光反射原理白细胞分类通道全血在加入溶血剂(FD-I)作用后，嗜酸性粒细胞内颗粒染色，而且除嗜酸性粒细胞外其他白细胞有些皱缩，仪器从低角度及高角度分析白细胞，获得白细胞四个亚群（LYM、MONO、EO、NEU+BASO）白细胞分类通道WBC/BASO通道STROMATOLYSER-FB嗜碱细胞保持原状除嗜碱细胞以外的白细胞溶解为裸核完全溶解红细胞、血小板嗜碱其他WBC纵坐标：前向散射光（FSC），反映细胞大小横坐标：侧向散射光（SSC），反映细胞复杂程度DIFF通道WBC-B四、激光与细胞化学检测原理

BayerADVIA120利用激光散射和过氧化物酶染色技术白细胞计数及分类嗜碱性粒细胞/分叶核粒细胞测量红细胞/血小板测量血红蛋白测量联合检测型血细胞分析仪ADVIA120过氧化物酶通道：由于嗜酸性细胞有很强的过氧化物酶活性，中性粒细胞有较强的过氧化物酶活性，单核细胞次之，而淋巴细跑和嗜碱性粒细胞无此酶。将血液经过过氧化物酶染色，胞质即出现不同酶化学反应血小板检测原理根据同质性球体光散射的Mie理论，当球形化的血小板通过激光照射区时，在两个角度测定激光的散射强度：高角度（5°~15°）测细胞的折射指数，与细胞密度有关；低角度（2°~3°）测量细胞大小血小板检测原理网织红细胞检测原理1.非荧光染料：新亚甲蓝对RET染色，使红细胞内Hb溢出后变为“影细胞”，减少对RET的干扰，采用VCS计术测定。2、荧光染料染色法：聚次甲基染RNA、噁嗪染DNA法，氧氮杂己750染RNA法，非对称菁染RNA法，噻唑橙染RNA法等。以氧氮杂芑750为染料，与网织红细胞中的RNA结合，激光（670nm）以低角度和高角度散射测量一个网织红细胞，分别测定网织红细胞的体积和总数及血红蛋白，同时在测量染色后网织红细胞发出的荧光网织红细胞检测原理血红蛋白测定原理

除干式、无创型外，各型BCA对血红蛋白测定都采用光电比色原理血细胞悬液中加入溶血剂后，红细胞溶解释放出血红蛋白，后者与溶血剂中有关成分结合形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统特定波长(530～550nm)下进行光电比色二、仪器分型检测原理基本结构四、仪器基本结构机械系统电学系统血细胞检测系统血红蛋白测定系统计算机键盘控制系统二、仪器分型检测原理基本结构

1.机械系统包括机械装置（如全自动有进样针、分血器、稀释器、混匀器、定量装置等）和真空泵，以完成样本的定量吸取、稀释、传送、混匀，以及将样本移入各种参数的检测区二、仪器分型检测原理基本结构

2.电学系统包括主电源、电压元器件、控温装置、自动真空泵电子控制系统，以及仪器的自动监控、故障报警和排除等二、仪器分型检测原理基本结构

3.血细胞检测系统国内常用的血细胞分析仪，使用的检测技术可分为电阻抗检测技术和光散射检测技术两大类二、仪器分型检测原理基本结构电阻抗检测技术：由检测器、放大器、甄别器、阈值调节器、检测计数系统和自动补偿装置组成流式光散射检测技术：由激光光源、检测装置和检测器、放大器、甄别器、阈值调节器、检测计数系统和自动补偿装置组成二、仪器分型检测原理基本结构4.血红蛋白测定系统由光源、透镜、滤光片、流动比色池和光电传感器等组成。

5.计算机和键盘控制系统

二、仪器分型检测原理基本结构仪器的性能指标、评价与调校（一）血细胞分析仪的性能指标

1.测试参数

2.细胞形态学分析

3.测试速度

4.样本量

5.精密度与示值范围

6.打印

（二）血细胞分析仪的评价

ICSH公布了电子血细胞分析仪的评价方案：在细胞计数、血红蛋白测定方面，要评价仪器测试样本的总变异、携带污染率、线性范围、可比性和准确性等三、仪器的性能指标、评价与调校（三）血细胞分析仪的调校

出厂前已经过厂方技术鉴定合格，但由于运输振动或因故障维修后或长时间停用后再启用等原因，以及正常使用半年以上或认为有必要时，都必须对仪器进行调校及性能测试，这对了解仪器性能，发现问题，确保检验质量有重要意义三、仪器的性能指标、评价与调校五、血细胞分析仪的维护与常见故障处理

（一）血细胞分析仪的维护1.仪器的保养（1）日保养（2）周保养（3）月保养2.仪器的维护（1）检测器维护（2）液路维护（3）机械传动部件维护（4）其他维护1.仪器的保养（1）日保养★检查废液桶，去除废液★在准备菜单下按保养程序★关机过夜1.仪器的保养（2）周保养★在准备状态下进入保养程序菜单，对进入检测器的阀门和检测器进行彻底清洗。★查看废液桶，将废液桶中的废液全部倒出，清洗废液桶；若有问题，应及时更换新的废液桶。1.仪器的保养（3）月保养★在准备状态下进入保养程序菜单，对检测器和废液容器进行彻底清洗★清洗左右进样池、分析通道、进样架。2.仪器的维护（1）检测器维护全自动血细胞分析仪：只需在管理菜单中双击“保养”键，即可完成仪器的自动保养。另外，还要在光学检测部件中清除流动室气泡和清洗流动室。2.仪器的维护（1）检测器维护半自动血细胞分析仪：①每天关机前必须将小孔管浸泡于新的稀释液中；②每日工作完毕，需用清洗剂清洗检测器至少3次；③需定期卸下检测器，用专用毛刷，蘸取3%～5%次氯酸钠溶液旋转清洗，必要时浸泡清洗，再用放大镜观察微孔的清洁度。2.仪器的维护（2）液路维护★在样品杯中专用加酶清洗液，按动几次计数键，使比色池和定量装置及管路内充满清洗液，停机浸泡一夜，再换用稀释液反复冲洗后使用。★仪器如长期不用，应将稀释液导管、清洗剂导管、溶血剂导管等置于去离子水或纯水中，按数次计数键，冲洗掉液体管道内的稀释液，充满去离子水后关机。2.仪器的维护（2）液路维护2.仪器的维护（3）机械传动部件维护先用细毛刷将机械传动装置周围的灰尘和污物去除，再按要求加润滑油，防止机械疲劳、磨损。机械传动部位的维护2.仪器的维护（4）其他维护★清洗进样槽★清洗清洗杯★如果分析标本数达万次时，应按照要求清洗标本旋转阀。（二）血细胞分析仪的常见故障处理1.开机时常见故障（1）开机指示灯及显示屏不亮（2）“WBC”或“RBC”吸液错误（3）“WBC”或“RBC”电路错误（4）“测试条件需设置”常见故障故障原因处理方法开机指示灯及显示屏不亮一般属于电源问题应检查电源插座是否插好、电源引线是否完好、保险丝是否熔断。应将电源插座插好，若保险丝熔断，应更换新的保险丝“WBC”或"RBC"吸液错误①稀释液量不足

②进液管连接错误①及时补充稀释液。

②正确连接进液管“WBC”或“RBC”电路错误一般为计数电路中的故障应参照使用说明书检查内部电路，必要时联系厂家工程师更换电路板测试条件需设置一般为备用电池没电或电路断电，导致系统储存的数据丢失时有该信息提示应更换电池，重新设置定标系数或其他条件开机时常见故障、原因及处理方法2.测试过程中常见的错误信息（1）堵孔（2）气泡（3）噪音（4）温度异常（5）试剂池错误（6）进样错误（7）溶血剂错误（8）样本分析错误（9）质控错误（10）其他错误常见故障故障原因处理方法堵孔（包括完全堵孔和不完全堵孔）1.仪器长时间不用，试剂中的水分蒸发、盐类结晶堵孔1.对于盐类结晶，可用去离子水浸泡，待结晶完全溶解后，按“CLEAN”键进行清洗2.末梢采血不顺或用棉球擦拭微量取血管2.对于其他原因造成的堵孔，一般按“CLEAN”键进行清洗即可3.抗凝剂量与全血不匹配或静脉采血不顺，有小凝块3.若以上方法不行，需小心卸下检测器进行进一步的清理：①用特制的专用小毛刷轻轻反复刷洗微孔去除堵塞物；②将检测器加水后用洗耳球从其顶端加压，从而将堵塞物冲走。若无效果，应先用粗细合适的细丝对着微孔来回穿入拉出几次，再用洗耳球加压冲出堵塞物；③若以上两种方法均不行，需用3%～5%的次氯酸钠溶液清洗，将检测器内装入该溶液浸泡5～10分钟，取出，再用洗耳球从其顶端加压去除堵塞物，最后用蒸馏水将检测器冲洗干净，小心装上，按“CLEAN”键清洗4.小孔管微孔蛋白沉积多，需清洗5.样品杯未盖好，空气中的灰尘落入杯中4.若以上三种方法均无效，说明“堵孔”是由泵管损坏造成，应联系厂家工程师进行更换血细胞分析仪的常见故障、原因及处理方法血细胞分析仪的常见故障、原因及处理方法常见故障故障原因处理方法气泡多为压力计中出现气泡按“CLEAN”键进行清洗噪音由于接地线不良或泵管较脏引起清洗泵管或小孔管，确认接地良好，并且与其他噪音大的仪器设备分开温度异常1.仪器所在房间温度不合适1.将房间温度设定在18～25℃2.其他原因2.若其他原因造成，应联系厂家工程师进行维修血细胞分析仪的常见故障、原因及处理方法常见故障故障原因处理方法试剂池错误1.一般是由于试剂不足造成的1.需尽快补足试剂2.由于浮动开关缺陷或者液压系统不正常造成的2.联系厂家工程师进行维修进样错误一般是由于标本操作中血量太少未被吸入造成的重新采集标本或手工法进行计数溶血剂错误一般为溶血剂与样本未充分混合造成的重新测定新的样本血细胞分析仪的常见故障、原因及处理方法常见