轮状病毒及其胃肠炎研究进展

轮状病毒及其胃肠炎研究进展 前言

小儿腹泻病是世界性的公共卫生问题,是引起小儿死亡的主要原因,世界卫生组织把腹泻病的控制列为全球性战略。

轮状病毒（Rotavirus,RV）是小儿腹泻病最常见的病因之一。

1973年澳大利亚首次在腹泻病患儿中发现了轮状病毒我国1978年,云南省979年腹泻病患儿中发现该病毒前言 婴幼儿轮状病毒（HumanRotavirus,HRV）是引起世界范围内婴幼儿重症腹泻的最主要病因。发达国家和发展中国家20%-70%5岁以下的婴幼儿都感染过轮状病毒,发展中国家每年大约有800,000患儿死于轮状病毒腹泻。前言营养状况对HRV发病危险影响不大,改善卫生条件对轮状病毒的预防并不十分有效。对于HRV引起的腹泻,国内外尚未报道有特效治疗方法。目前,发展HRV疫苗控制HRV腹泻受到一致的重视。前言但轮状病毒流行株呈现多样性,随不同年份、不同地区可有所改变。由此,HRV流行的趋势及疫苗研究等受到了广泛的关注。RV的分子结构HRV流行的趋势NSP4研究进展发病机制治疗诊断临床表现轮状病毒及其胃肠炎研究进展疫苗的研制免疫机制一轮状病毒的分子结构 轮状病毒（Rotavirus）归类于呼肠孤病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus),病毒体呈圆球形,有三层衣壳,每层衣壳呈二十面体对称。内衣壳的壳微粒沿着病毒体边缘呈放射状排列，形同车轮辐条。注：轮状病毒（Rotavirus，在拉丁语中“Rota”的意思是车轮）在电镜下呈球形，其直径为65-75nm的20面体。轮状病毒为三层蛋白质衣壳结构，包括核心、内衣壳、外衣壳。由内、外衣壳沿病毒边缘排列，包绕形成典型的车轮辐条结构。核心内衣壳外衣壳分子结构完整病毒大小约70～75nm，无外衣壳的粗糙型颗粒为50～60nm。具双层衣壳的病毒体有传染性。病毒体的核心为双股RNA，由11个不连续的节段组成。RNA节段平均长度为660～3300个碱基对，各编码一种蛋白质，即6种结构蛋白和5种

非结构蛋白。分子结构分子结构6种结构蛋白：VP1VP2VP3VP4VP6VP7分子结构5种非结构蛋白（nonstructureproteinNSP）：NSP1NSP2NSP3NSP4NSP5分组感染对象感染特点A人和动物婴幼儿腹泻的主要病原体B人和动物水源暴发流行,主要感染青壮年C人和动物青少年中偶有流行D动物E动物F动物G动物分子结构 根据病毒主蛋白VP6抗原性的差异，可将轮状病毒分为A～G组。根据病毒糖蛋白VP4、VP7抗原性

的差异,又可将

轮状病毒分为

P血清型和G血清型。

HRV血清型是由病毒外壳蛋白VP4和VP7的抗原性不同区分的。VP7蛋白是由RV基因组的第7、第8或第9基因所编码的病毒外壳蛋白,其分子量为34kD,占毒粒蛋白总量的30%,仅次于VP6蛋白。VP7蛋白是高价免疫血清能检测到的主要中和抗原,因此决定病毒的G血清型(因为它是一种糖蛋

白Glycoprotein)。分子结构分子结构至今根据VP7蛋白中和抗原与高价免疫血清反应的差异发现了14个VP7蛋白血清型（G1-G14）。通过对这14个血清型VP7基因序列的测定及比较分析由这些核苷酸序列推断的氨基酸序列表明：同一血清型中的不同毒株间,氨基酸的同源性很高(91%-100%);

不同血清型的毒株之间,其VP7蛋白氨基酸序列的同源性则低得多(往往低于85%)。

因此,用中和试验和核酸序列测定方法来确定轮状病毒血清型的相关性是一个比较准确的

方法。分子结构VP7蛋白上有9个高变区,在同一血清型毒株之间这些区域高度保守,而不同型别的毒株之间差异较大。根据这一特点利用高变区的序列设计引物进行RT-PCR,再根据PCR产物的不同而判定毒株

的G型别（即VP7基因型）。分子结构 VP4蛋白由第4基因编码,以棘突形式分布于病毒外壳上,由于VP4蛋白能诱导产生中和抗体,而且这种抗体与VP7蛋白诱导的中和抗体无关,所以近年来又建立了VP4蛋白的血清分型系统（P血清型，

Proteasesenstive）。分子结构近年来,HRV命名工作组(RotavirusNomenclatureWorkingGroup)将基因型和血清型之间的不同型别一致起来,建议基因型写在血清型后方,并用括号表示(如Wa株为PIA[8]),若血清型没有确定,则为P[]。分子结构血清型[基因型]二婴幼儿轮状病毒流行的趋势交叉中和试验14个G血清型（G1-G14）20个P血清型（P1-P20）感染人10个G血清型:G1.G2.G3.G4.G5.G6.G8.G9.G10.G12

8

个P血清型:P1A.P1B.P2A.P3.P3B.P4.P5.P8G1-G4是世界范围内婴幼儿腹泻的主要病因

全球不同地区流行病学调查表明：P1A[8]G1、P1B[4]G2、P1A[8]G3、P1A[8]G4是人类最常见的优势株。但近年轮状病毒流行呈现出新的趋势，即轮状病毒流行呈多样性(表现为不同年度流行优势株转变、异常毒株的出现、混合感染比例增加)

和G9型毒株在全球流行。流行趋势1轮状病毒流行的多样性2G9型毒株全球流行情况3基因突变、基因重配及基因重组在轮状病毒毒株多样性中的作用4轮状病毒血清型与其临床表现和轮状病毒腹泻暴发流行的关系流行趋势（一）轮状病毒流行的多样性

大量轮状病毒流行研究显示：除了在世界范围内流行优势株(G1-G4)外,其它不常见的血清型在不同时区有报道。此外,在同一地区不同的年

度RV血清型可发生变化。流行趋势国家(地区)时间(年)流行株意大利1981-1992G1为主（未能分型毒株占27%）1990-1994P[8]G4为主,其次为P[8]G1型西非几内亚1996-1997G2P[6]为主1998G1为主，出现了一些不常见的毒株如P[9]、G3,混合感染较为突出，16%不能分型芬兰1988-1990G1到G4血清型的转变日本东京1991年以前主要为G2、G3和G41991年以后G1为主中国重庆1998-1999G1为主1999-2000G3为主孟加拉国1999G4为主,其次为G1和G2,混合感染显著。流行趋势国家(地区)时间(年)流行株尼日利亚1993-1995南部地区：G3为主，北部地区：混合感染较为突出,G2、G4、G8未检测出。巴西1997-1998P[4]G2为主,但不常见的毒株P[8]G9、P[6]G9、P[4]G9比例增加。英国1995-1999主要是P[8]G1、P[4]G2、P[8]G3、P[8]G4,不常见的毒株出现P[8]G2、P[6]G9、P[8]G9。阿根廷1996-1998出现不常见的RV株G1P[4],混合感染较前增多爱尔兰1995-1997主要为P[8]G1、P[4]G2、P[8]G4，P[4]G4为不常见株，混合感染占18.8%。流行趋势国家(地区)时间(年)流行株马拉维1997.7-1998.1P[6]G8为主，2%混合感染，9%不能分型。非洲1975-1992G1为主，未能分型达26%，提示出现了除G1-G4外的毒株。美国1996-1997依次为：P[8]G1(66.4%)、P[4]G2(8.3%)、P[8]G3(6.9%)、P[8]G4(1.4%),9.2%为不常见毒株：P[6]G9(5.5%)、P[8]G9(1.7%)、P[6]G1(1.4%)、P[4]G1(0.3%)、P[8]G2(0.3),5.5%未能分型,2.3%为混合感染。东印度1998-2000出现了不寻常的毒株：P[1]G4、P[8]G2、P[6]G2、P[4]G4、P[6]G4,且有78%不能分型。流行趋势国家(地区)时间(年)流行株中国1998-2000年依次为：G1(占72.6%)、G3(14.2%)、G2(12.1%)、G4(2.9%)、G9(0.9%)及未能确定其血清型(0.7%)，除了一些常见的RV株P[8]G1、P[4]G2、P[8]G3、P[8]G4外出现了新的RV株P[6]G9、P[6]G3、P[6]G1、P[9]G1、P[4]G3、P[4]G4、P[8]G2。昆明地区2002-2004G血清型主要是G3、G1型2002以G1型为主2003以G3型为主2004均为G3型流行趋势（二）G9型毒株全球流行情况 自1983年美国在世界范围内首次报道G9型HRV感染人以来,在1992年-1998年期间,在泰国、孟加拉国、马拉维、印度、巴西、意大利、

法国、澳大利亚发现了G9型HRV株。流行趋势国家(地区)时间(年)流行株日本1987-1996G1-G4型1995起开始出现G9型毒株泰国1996-1997出现G9型毒株,有逐年增加的趋势。加纳1999P[6]G2、P[6]G8为主要的RV流行株,但出现了过去不常见的G9型毒株尼日利亚1998.1-1999春流行的HRV株为G9、G8型,而G2、G4减少印度1996-1999G9型较为流行,可能成为常见的RV流行株韩国新加坡1998-1999G9是首居第一位的血清型，分别具有52.9%和71.4%的检出率。流行趋势目前，世界各地轮状病毒流行研究表明G9型有可能成为第五个常见的流行优势株。国家(地区)时间(年)流行株我国1994钱渊等首次报道我国有1例G9型HRV感染腹泻患儿,表明我国可能有G9型HRV存在。1999-2000方肇寅等的研究显示1999-2000年G9型HRV呈显著增长趋势,P-G结合关系鉴定为P[6]G9(92%)和P[8]G9(8%)。流行趋势

轮状病毒基因组为包含11个基因片段的双股RNA（dsRNA），由于其基因片段分节段，故在不同的毒株间易发生:基因突变（genemutation）

基因重配（genereassortment）

基因重组(generearrangement)（三）基因突变、基因重配及基因重组在

轮状病毒毒株多样性中的作用流行趋势

基因突变、基因重配和基因重组被认为是轮状病毒毒株变异性较高的三个重要因素。基因突变通常是引起轮状病毒基因多态性的主要原因。轮状病毒与其它的RNA病毒一样,基因组具有较高的突变率,因为RNA复制中会出现错配,基因突变的结果最终导致进化中的轮状

病毒发生变异。流行趋势简单的基因片段插入;可以改变轮状病毒的表现型;以基因重配介导的蛋白质的相互作用将会影响其血清型;将会引起新的轮状病毒抗原的出现。流行趋势基因重配在轮状病毒毒株多样性中起了关键性的作用,尤其是在混合感染的情况下。

基因重组主要也与轮状病毒的演变和新的毒株的出现有关，基因重组将导致RV蛋白质的某一区域结构发生改变，发生改变的蛋白质结构区域可通

过基因突变发挥作用。流行趋势

研究发现台湾10年来流行的轮状病毒株的VP1和VP7基因发生了较大变化，他们认为这是轮状病毒株之间基因重配的表现。流行趋势

研究表明英国1995-1999年流行毒株呈多样性表现，这主要是流

行度毒株之间发生了基因重配。Iturriza等Zao等巴西1996年P[8]G5型毒株的出现是Wa株和猪轮状病毒株基因重配的结果。流行趋势Ramachandran等

研究显示G9型HRV之间的较

大变化来自基因重组可能大于基因内自然突变积累作用，新发生的G9型HRV可能起源于不同国家，他们通过与当地HRV混合感染基因重组

和基因突变多年积累而产生的。

综上所述，基因突变、基因重配及基因重组在轮状病毒毒株多样性中起到了一定作用，尤其是基因重配。流行趋势（四）轮状病毒血清型与其临床表现和

轮状病毒腹泻暴发流行的关系

轮状病毒腹泻的严重程度与轮状病毒血清型的相关性研究一直是一个热点。Bern等及Yolken等人发现感染G2型的患儿的症状比感染其它型别毒株的患儿严重，但并没有对此进行

系统的统计学比较。流行趋势对Palermo地区401名急性轮状病毒性肠炎患儿进行了相关研究,结果研究发现电泳短型(亚组Ⅱ)HRV株引起的临床症状要比电泳长型(亚组Ⅰ)HRV株严重,即G2型HRV株引起的临床症状较其

它型别严重。轮状病毒胃肠炎患儿的临床的严重程度HRV毒株的毒力血清型(G或P型)可能有关可能相关流行趋势Cascio等假设昆明的研究结果发现

电泳长型（亚组Ⅰ）和短型（亚组Ⅱ）对胃肠道的影响有差异，电泳长型RV胃肠炎住院患儿多于短型，电泳长型的症状更为严重。流行趋势

认为这主要与新的毒株(G2型)的出现有关，在此10年之前Palermo地区几乎没有发

现G2型毒株，G2型毒株的出现使得Palermo地区

婴幼儿对此毫无免疫力。

越来越多的研究发现新出现的HRV流行株可引起婴幼儿腹泻暴发,其临床症状严重。流行趋势Cascio等

报道

1999年在荷兰P[6]G9型HRV导致一起医院婴幼儿腹泻暴发。此次腹泻暴发持续5个月,临床表现为急性水样便,明显脱水症状。该暴发

提示婴幼儿可能缺乏相应的免疫保护。流行趋势Marc-AlainWiddowson等

1998年引发伦敦一家医院暴发腹泻的HRV被鉴定为P[6]G9株。以往研究表明：引起新生儿隐性感染的轮状病毒无论其VP7型别是1、2、3或是4,其VP4型别都属于P2型,因此认为P2型的轮状病毒是自然减毒株,已考虑用其作为疫苗株(代表株为M37)。流行趋势

1997年首次报道在北京医院产科母婴同室病房P2型HRV株引发了一起新生儿严重腹泻的暴发流行,18例患儿中5例重度脱水,重症患儿每日大

便湿重可达120-150g。流行趋势钱渊等

发现G3P2毒株可引起少数新生儿较严重的腹泻,核苷酸分析表明：病毒基因在编码VP4、VP7、NSP4等蛋白时出现特殊的氨基酸差异,这些氨基酸差异特别稳定,可影响轮状病毒的毒力,致使新生儿和婴幼儿感染这些毒株后出现

不同的临床表现。流行趋势Kirkwood等

的研究由于无法解释电泳长型(亚组Ⅰ)感染引起的临床症状严重程度的不同,他们推测可能还与HRV毒株本身内在的因素有关,如RV的毒力肽段NSP4有关。流行趋势Cascio等

综上所述，轮状病毒腹泻的临床表现的严重程度可能与新出现的轮状病毒血清型有关，尤其是轮状病毒腹泻的暴发流行，但同时可能还与其它的因素有关。总之，轮状病毒血清型及其临床症状的严重程度是否有直接关联需进一步研究。流行趋势三轮状病毒非结构蛋白NSP4研究进展

传统的发病机制认为RV感染后破坏小肠绒毛上皮细胞的绒毛结构,从而引发渗透性腹泻和水、盐分泌及吸收失调性腹泻。然而,腹泻可发生在绒毛脱落之前,这提示早期腹泻与其它的因素相关。

1996年首次提出轮状病毒非结构蛋白NSP4可能是一种肠毒素，并认为NSP4在RV的致病机理有着重要的作用。近年来，NSP4与RV的致病性的研究已成为世界范围内的一个热点。NSP4研究进展Ball等（一）NSP4的分子结构

NSP4蛋白是轮状病毒的一个非结构蛋白,NSP4由RV基因组中的第十基因片段编码,初始产物含175个氨基酸,分子量为20kD,在氨基端糖基化后的分子量为28kD(糖基化后成为穿越内质网的穿膜蛋白)。NSP4研究进展

NSP4的氨基端含三个疏水表位，两个N型糖基化位点在第一个疏水表位，对这些糖基化的表位的生化合成研究证实，该蛋白具有一个不可切割的信号序列。NSP4的拓扑成像学研究证明，其氨基末端固定在内质网膜内，而其羧基端延伸至感染细胞的细胞浆内。病毒颗粒是通过向内质网膜出芽而成熟

的，而NSP4介导了这一病毒的成熟过程。NSP4研究进展

证实NSP4是一种跨内质网膜(endoplasmicreticulum,ER)的糖蛋白,其氨基末端固定在内质网膜内,而其羧基端延伸至感染细胞的胞浆内,可作为胞浆中的RV内层颗粒(innercapsidparticle,ICP)的细胞内受体,它能通过VP6蛋白结合病毒颗粒ICP,并将这些亚病毒颗粒通过出芽的方

式运至内质网膜内并获得暂时性包膜。NSP4研究进展Taylor等的研究的研究也证实了这一点,同时发现NSP4亲水区第114至135位氨基酸组成的肽段(NSP4114-135)具有肠毒素活性。NSP4研究进展认为NSP4亲水区第114至140位氨基酸组成的肽段具有肠毒素功能。Ball等Zhang等

目前利用缺失突变和单克隆抗体技术已确认了NSP4的两个功能区：一个是ICP结合区，另一个是VP4结合区，分别位于161-175位及132-148位

氨基酸。

NSP4研究进展NSP4研究进展O`Brien等Taylor等

采用圆二色谱法也证实该区域存在随机构型,可能与结合ICP有关。

通过有限蛋白水解(limitedproteolysis)及质谱分光测定法(massspectrometry)研究ＲVSA11株NSP4的胞浆区结构,发现C端存在28个氨基酸的蛋白敏感区。（二）NSP4与RV的致病性NSP4蛋白质在轮状病毒形态发生中的作用1NSP4与Ca2+转运在RV致病中的作用2NSP4与Na+离子和右旋葡萄糖同向转运在RV致病中的作用3NSP4与宿主细胞之间的作用4NSP4基因突变与RV毒力的关系5NSP4研究进展1、NSP4蛋白质在轮状病毒形态发生中的作用 轮状病毒的形态发生是一个独特的过程,细胞质中不成熟的病毒双层颗粒(DLPS)在穿越内质网时,内质网上定位的病毒蛋白NSP4、VP7包装到双层颗粒。NSP4研究进展V4结合结构域结合V4蛋白V2、V6结合结构域结合双层颗粒病毒粒子形成暂时的三层包膜颗粒进入内质网腔外层的暂时性脂膜和NSP4蛋白脱落，V4、V7蛋白重排形成三层膜的病毒颗粒内质网腔

细胞质内

NSP4研究进展

VP7蛋白表达的阻遏，不影响病毒蛋白的表达和分配，但病毒颗粒积累在内质网腔中，不能形成完整的病毒粒子。用RNAi技术沉寂了NSP4或VP7蛋白的表达使子代病毒颗粒数目减少了75%～80%Tomas等NSP4蛋白表达的阻遏影响了病毒蛋白在细胞内的表达和病毒蛋白在细胞中的定位，从而使病毒双层颗粒或三层颗粒很少形成。NSP4蛋白质是一个内质网定位蛋白，作为双层颗粒（DLPS）受体，驱动DLPS进入内质网VP7使病毒颗粒脱去暂时性的包膜，形成完整的三层包膜病毒粒子推测推测NSP4研究进展RV形态成熟的过程及对细胞的溶解作用RV侵入细胞2、NSP4与Ca2+转运在RV致病中的作用 钙离子（Ca2+）在RV的复制和致病中发挥着重要的作用。

病毒转录的激活病毒颗粒的释放Ca2+参与NSP4研究进展在细胞外介质中，Ca2+对RV外壳蛋白结构具有稳定作用,当病毒侵入细胞后,细胞内较低的Ca2+浓度即可使病毒外衣壳蛋白发生溶解及转录酶激活。RV蛋白的合成对Ca2+的稳态具有调节作用,而Ca2+的稳态则可促进RV形态的成熟,同时在诱导细胞死亡中也起了一定的作用。NSP4研究进展

NSP4与Ca2+转运的研究最早开始于90年代初。NSP4研究进展Tian等在昆虫细胞中表达NSP4的研究中发现NSP4除了对细胞具有细胞毒作用外，还可升高细胞内Ca2+（[Ca2+]i）浓度。

Tian等对此现象进一步的研究：用纯化的NSP4作用于昆虫细胞表面时,细胞内的Ca2+浓度显著升高,且这种调节作用可被磷酯酶C(phospholipaseC,

PLC)抑制剂所阻断,但未对此现象的产生机制进行深入的阐述,故在当时NSP4对Ca2+转运的作用未引起人们的关注。NSP4研究进展

1996年Ball等在NSP4引发新生鼠腹泻的研究中首次提出了NSP4对Ca2+转运的调节作用的机理：NSP4是通过启动一个信号转导途径引起细胞内钙离子浓度升高,Cl-离子分泌增加,最终产生腹泻。继此之后的大量相关研究一致认为NSP4通过信号转导途径调节Ca2+转运。NSP4研究进展Ball等

1nmol的外源性NSP4即可使钙离子从细胞内钙库释放并伴随细胞外Ca2+内流进入细胞,从而使细胞内Ca2+浓度升高。当NSP4的量为4.6±0.8nmol时,

NSP4对钙离子转运的调节作用最强,这提示NSP4对钙离子转运的调节作用与剂量大小有关。NSP4研究进展Dong等的研究显示

然而,细胞内钙离子升高的同时,Na+离子的浓度不受影响,表明NSP4是选择性的使细胞外钙离子进入细胞。若先用磷酯酶C的抑制剂、胰蛋白酶或糜蛋白酶作用于RV感染的细胞,NSP4升高细胞内Ca2+浓度的作用被中和。此外,NSP4能快速导致1,4,5-三磷酸肌醇（1,4,5-IP3）短暂升高。NSP4研究进展

由此，Dong等认为是通过激活磷酯酶C和增加IP3的生成这一信号转导途径来调节Ca2+转运，而且细胞外无钙离子溶液对NSP4反应无明显影响，因此细胞内钙离子浓度升高主要为细胞内钙库释放造成。NSP4研究进展增加内质网膜的基础通透性

关于内源性NSP4对钙离子转运的调节作用，各研究组一致认为内源性NSP4是通过增加内质网膜的基础通透性而使细胞内Ca2+浓度升高。

激活磷酯酶C和增加IP3的生成,细胞内钙库释放Ca2+浓度↑选择性的使细胞外钙离子进入细胞外源性NSP4内源性NSP4NSP4研究进展3、NSP4与Na+离子和右旋葡萄糖同向转运在

RV致病中的作用 有关NSP4与Na+离子转运的相关研究甚少,且部分研究一致认为NSP4对Na+离子转运无影响。最近Halaihel等在体外实验中首次发现NSP4对兔肠道上皮细胞刷状缘膜上的Na+离子和右旋葡萄糖同向转运(Na+-D-glucosesymporter,SGLT1)有抑制作用。NSP4研究进展

而且该抑制作用具有特异性和非竞争性。在Na+离子和右旋葡萄糖转运单位上有三个与NSP4肽段结合的位点。Halaihel的发现提示体内RV感染的过程中,NSP4有可能同样对SGLT1产生抑制作用，

从而导致水的重吸收障碍,NSP4研究进展

由此推测NSP4对SGLT1的抑制在RV感染所致腹泻的发病机理中起了一定的作用。该研究是RV发病机制的又一突破,但目前仍无定论,尚需进一步研究。NSP4研究进展4、NSP4与宿主细胞之间的作用 RV感染的过程是RV与宿主细胞相互作用的复杂过程。Tian等最早注意到NSP4对细胞膜具有破坏作用。Newton等在猴肾上皮细胞中表达重组RV疫苗株NSP4时也发现肾上皮细胞的胞浆膜的完整性受到损害及细胞的超微结构变化提示细胞死亡,且NSP4对肾上皮细胞的细胞毒作用与其剂量有关。NSP4研究进展

发现纯化的NSP4或NSP4114-135肽段可改变肠上皮细胞的细胞膜的形态，且NSP4的第114位氨基酸至135位氨基酸是与细胞膜结合的功能区域。NSP4与细胞膜的结合具有选择性，即NSP4仅与弯曲度较大而面积较小的单层囊泡膜发生作用，却不与弯曲度较小而面积较大的单层囊

泡膜发生作用。NSP4研究进展Huang等

在大肠杆菌中表达NSP4时发现NSP4对细菌的细胞膜有破坏作用,进一步研究发现NSP4第48位氨基酸至91位氨基酸残基组成的肽段与膜的去稳定状态密切相关,他们推测这可能与该肽段具有带负电荷的两歧性分子的螺旋结构有关，NSP4研究进展Browne等NSP4分子结构中的双螺旋低聚体化区域及NSP4114-135肽段对膜的稳定状态无直接作用,但可以提高NSP448-91肽段对膜的破坏作用。该研究结果提示NSP4在膜的去稳定状态中起着关键的作用及NSP4对哺乳类动物细胞可能具有细胞毒作用。NSP4研究进展

对NSP4与极化的上皮细胞(MDCK-1细胞)之间的相互作用进行了研究：当NSP4作用于上皮细胞的顶端而非基底侧时，可降低跨上皮电阻及重新分布丝状肌动蛋白，同时增大细胞间隙的通透性；并发现将1nmol的NSP4与极化的上皮细胞温育20-30h后，跨上皮电阻大幅度降低，当去除NSP4后，上皮组织恢复了它的完整性和跨

上皮电阻。NSP4研究进展Tafazoli等

此外NSP4在上皮细胞紧密连接过程中阻止其相关蛋白ZO-1锚定,因而影响细胞紧密连接和极化上皮形成。由此可见，NSP4可特异性地破坏上皮细胞的细胞膜及细胞间的紧密连接,导致上皮细胞的完整性受到损害及细胞通透性改变。NSP4研究进展5、NSP4基因突变与RV毒力的关系

NSP4基因易突变,而NSP4与RV的毒力密切相关,由此,NSP4基因的突变将可能导致RV株的减毒。基于这一假设,加之RV无症状感染的现象引起人们的重视及轮状病毒疫苗的开发,许多学者对此进行了大量的研究,但各研究报道不一致。最早Hoshino等在RV感染猪的模型研究中发现了RV

的毒力与NSP4基因突变有关。NSP4研究进展

经在猴肾细胞传代的减毒HRV89-12株与未传代的毒株之间只有一个碱基发生变化,导致NSP445位处的丙氨酸变为苏氨酸。由于无症状型和有症状型HRV株该位点处这两种氨基酸都存在,不能作为毒力标记,因而认为89-

12RV疫苗株的减毒与NSP4基因突变或NSP4的氨基酸序列变异无关。NSP4研究进展Ward等的研究显示：

对猪OSU株和Gottfrid株的毒力株及减毒株的NSP4氨基酸序列作了比较,提示NSP4的第131位-140位氨基酸的变异与RV的毒力至关重要,进而用杆状病毒表达系统分别表达毒力株OSU(OSU-v)和减毒株OSU(OSU-a)的NSP4,并进行比较。NSP4研究进展Zhang等若OSU-V株NSP4第130位处的脯氨酸由OSU-a株NSP4该位点上的丝氨酸取代,则OSU-v株的NSP4失了原有致新生鼠腹泻能力。Zhang等认为NSP4导致腹泻的作用可能与NSP4的第114位至140位氨基酸残基组成的肽段的C端结构有关,而不是特定

位点上的氨基酸变化,NSP4研究进展

由此推测：只有当NSP4的114位至140位处氨基酸的变异引起NSP4的分子结构发生改变时,NSP4的生物学活性才会受到影响,从而影响RV株的毒力。NSP4研究进展

对HRVWa株(Wa-v株,Wa-a株)、M株(M-v，M-a)及C组轮状病毒Cowden株(Cowden-v株,Cowden-a株)的NSP4基因进行测序,并比较其对应的NSP4的氨基酸序列。NSP4研究进展Chang等其研究结果显示：

故认为RV株毒力与NSP4基因突变所致的NSP4氨基酸变异存在一定关系。HRVNSP4氨基酸序列变异处Wa-v株与Wa-a株13，16，34位氨基酸处M-v株与M-a株53，104位氨基酸处Cowden-v株与Cowden-a株50，97位氨基酸处NSP4研究进展

发现用标准株SA11株建立的NSP4的cDNA1文库与随机获得的SA11株的NSP4的cDNA2文库之间有差异,即cDNA1文库中NSP4第47位处的天冬酰胺(Asn)被cDNA2文库中NSP4

该位点上的组氨酸(His)所代替。NSP4研究进展Tian等

进一步的研究发现NSP4-Asn和NSP4-His对钙离子转运的调节有差异,NSP4-Asn对钙离子转运的调节及细胞毒作用较NSP4-His更强。但Lee等认为无症状型和有症状型RV株的NSP4基因无差异,

提示RV减毒与NSP4基因突变无关。NSP4研究进展对南非地区新生儿病房中RV流行株G4P[6](G4P[6]-v,G4P6-a)的NSP4基因的核苷酸和对应的氨基酸序列进行比较,发现NSP4氨基酸序列有四处变异(82、114、138、169位氨基酸处),同时也发现两种RV株的VP8*、VP7蛋白的氨基酸序列也有改变,提示RV毒力不仅与NSP4有关,可

能还与VP8*和VP7有关。NSP4研究进展Pager等

2002年至2004年中的轮状病毒阳性标本中选取30份标本扩增出NSP4cDNA500bp送测序,结果显示差异为第76位,137位和139位氨基酸变异位点集中在V-I,R-S,V-I,并用MEGA软件进行分析,结果显示NSP4变异同临床流行症状相关性不大,庞伟等人做的动物研究中证实并未发现NSP4的变异同致

病毒力有明显关系。NSP4研究进展

NSP4变异与地域及VP7血清型无关,不能够根据VP7的血清型来推测NSP4的基因型。NSP4基因变异与轮状病毒腹泻临床症状严重程度不相关。

NSP4研究进展

目前没有研究证实NSP4特定位点的氨基酸突变与RV毒力的直接关系,NSP4与RV致病性有关的结构域尚未完全阐述清楚。以上的研究报道不一致,这可能与各研究中所采用的动物模型有关。NSP4研究进展此外,以上研究都仅局限于同一年龄段患儿RV无症状感染株和有症状感染株的NSP4基因的变异,而未对不同年龄段患儿RV无症状感染株NSP4基因的变异,尤其是对新生儿RV无症状感染株和年长儿无症状感染株的NSP4基因变异进行深入研究,推测以后在该领域将会有新的研究突破。NSP4研究进展四轮状病毒感染的发病机制

轮状病毒感染的发病机制目前仍不十分明确,但是通过对轮状病毒感染动物模型的实验研究,为我们认识轮状病毒的作用机理提供了一定线索。

轮状病毒感染任何动物依赖于宿主和病毒两方面的因素。

轮状病毒感染宿主后以在小肠粘膜上皮细胞复制为特点,病理学改变表现为:

绒毛变短萎缩

细胞溶解

固有层单核细胞浸润

内质网池膨胀

线粒体肿胀等。

这些组织病理学改变发生在感染后24-36小时。发病机制

早期研究认为,肠上皮细胞的破坏引起的吸收功能不良直接导致腹泻的发生。随着研究的深入,有资料表明肠上皮细胞破坏后继发的吸收功能不良,尚不足以完全解释腹泻的进展,因为在对一些动物的研究发现,腹泻可以发生在肠粘膜发

生病理改变之前；发病机制

并且在一些感染异源性轮状病毒的新生鼠中发现,这些鼠发生了腹泻,但肠粘膜组织结构没有明显变化；研究人员还发现给轮状病毒感染的幼猪口服

表皮生长因子对腹泻的病程没有明显作用。

发病机制

随着细胞分子水平研究的发展,病毒的蛋白质结构、毒力、致病性等方面的作用开始受到人们的关注。

VP4和VP7作为轮状病毒结构蛋白,在维持病毒的稳定性方面发挥着重要作用,VP4对于病毒吸附和进入上皮细胞非常重要。发病机制 NSP1、NSP2可能与轮状病毒的复制有关,但具体功能尚未阐明。

NSP4作为轮状病毒非结构蛋白在作用机制方面成为研究的热点。发病机制

研究已发现NSP4作为一种细胞内受体在病毒装配过程中,介导病毒颗粒进入内质网时获得瞬时包膜,同时NSP4刺激内质网贮存池释放钙离子(Ca2+),并且维持这一作用过程。更有研究表明NSP4作为轮状病毒诱导产生的肠毒素,在感染后24小时可能通过细胞溶解从感染的细胞中释放出来，发病机制

一方面激活细胞内的Ca2+，Ca2+浓度的升高通过磷脂酶C的信号传导，产生氯离子的跨膜转运及酶转运的激活，促进肠腔内液体的分泌及吸收的减少，从而产生腹泻；

另一方面通过改变细胞内肌动蛋白的分布和细胞内连接进一步加重腹泻。发病机制

NSP4致腹泻的方式与一些细菌毒素相似，不引起组织学改变，只影响肠道的分泌功能。给鼠注射纯化NSP4114—135氨基酸残基组成的肽段可致幼鼠腹泻，证实了NSP4在腹泻发生中的重要作用。发病机制

除了腹泻早期NSP4对粘膜的直接作用外,已有研究表明肠袢神经系统直接参与了腹泻的进展。固有的宿主介导的防御机制,可以通过病毒复制或NSP4诱导的Ca2+活化进一步激活,从而维持

腹泻的进展。发病机制

在幼鼠感染48-60小时后,局部肠粘膜可以发现典型的反应性充血的病理变化：组织水肿、血管扩张,这可能与肠袢系统粘膜神经反射的激活有关。另有数据显示66%轮状病毒诱导的肠腔液体分泌是

通过肠神经系统分泌介导的。发病机制 目前对于轮状病毒感染后，NSP4与肠袢神经系统激活以及释放神经活性物质之间是否存在联系等问题,在细胞水平上仍亟待解决,有待于进一步深入研究。发病机制五轮状病毒感染与免疫机制

轮状病毒感染人体后的免疫机制目前尚未阐明。尽管轮状病毒感染动物模型与人体有一定不同,但是对这些模型的研究能为我们提供一些轮状病毒介导的机体免疫反应的线索。感染轮状病毒后,宿

主的免疫反应包括：体液免疫细胞免疫粘膜免疫

对鼠模型研究发现在轮状病毒感染后,可以在小肠周围组织如：集合淋巴结、肠系膜淋巴结中发现轮状病毒,在这些部位最先出现的是大量不依赖于T细胞的B细胞。免疫机制Sarah等

在感染后四天，最先出现轮状病毒特异性IgM，而IgA在感染后10天排毒近乎停止时才出现。对人及兔的研究也发现，轮状病毒特异性IgM在轮状病毒感染后早期先升高(感染后7天内),随后逐

渐下降,此时IgA、IgG水平才开始升高。免疫机制

研究了IgA敲除幼鼠也发现，这类幼鼠与IgA正常幼鼠相比，清除轮状病毒的能力无明显差异，这可能通过代偿性地增强轮状病毒特异性IgM、IgG亚群生成有关。免疫机制Neal等

这些都提示了轮状病毒感染早期肠粘膜表面B淋巴细胞介导了重要的免疫反应，轮状病毒特异性IgA对于感染早期轮状病毒清除作用不大。对儿童感染轮状病毒研究显示轮状病毒特异性IgA在

预防再次感染方面具有重要作用。免疫机制免疫机制Velazquez等

动态研究了200例墨西哥从出生至2岁儿童的血清轮状病毒IgA、IgG水平,结果显示:

血清中抗轮状病毒IgA滴度>1:800时,婴儿感染轮状病毒和发生相关性腹泻的危险性均较低；

IgG滴度>1:6400时其感染轮状病毒的危险明显较低,但无抗腹泻作用。

研究表明轮状病毒特异性IgA可以作为预防轮状病毒感染及发生腹泻的免疫标志。

CD8+细胞的效应器功能和CD4+细胞的细胞毒T细胞,在动物模型中已证实参与轮状病毒清除及再感染的免疫保护作用。免疫机制 牛感染轮状病毒后,小肠粘膜淋巴细胞亚群数目增加,上皮内CD4+细胞和固有层CD8+细胞明显增加。对限菌猪的研究发现感染轮状病毒后,肠系膜淋巴结等肠道组织较早出现T细胞反应,外周血单个核细胞(PBMCs)的轮状病毒特异性T细胞反应,可以认为

是肠道T细胞反应的指标。免疫机制

肠道T细胞反应与全身T细胞反应同时在轮状病毒感染中参与重要的角色。不同T淋巴细胞亚群在轮状病毒感染后发挥各自的作用。

CD8+细胞在抑制病毒生长和控制轮状病毒感染等方面，通过充当病毒特异性细胞毒性淋巴细胞发挥作用；

CD4+细胞对产生粘膜和全身轮状病毒特异性抗体及再次感染的恢复起作用。免疫机制

对于轮状病毒腹泻患儿研究也表明急性期存在细胞免疫的异常,显示了细胞免疫在轮状病毒感染后参与了重要的免疫反应。免疫机制

抗病毒的细胞因子如白介素2(IL-2)、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(IFN)等在轮状病毒感染中也发挥重要的免疫作用,这些细胞因子是由CD4+细胞、CD8+细胞和巨噬细胞等分泌的。免疫机制

对轮状病毒腹泻患儿的PBMCs研究发现IL-2及其受体急性期反应较低,恢复期明显升高。

报道轮状病毒腹泻患儿的血清和大便IL-6水平在急性期明显升高,

表明粘膜局部分泌产生的IL-6,参与了炎症的病理过程。免疫机制姚英民等杨会锁等

对轮状病毒感染体外培养的肠上皮细胞研究,发现了IL-8mRNA的表达和其分泌的IL-8,IL-8的分泌量与病毒感染时间和感染量有关。

也报道了轮状病毒腹泻患儿急性期血清和大便IL-8均显著升高,与病情程度密切相关。免疫机制Casola等李惠民等此外有报道表明IL-12参与了轮状病毒腹泻的免疫保护作用。Azim等

对轮状病毒感染儿童及发展成迁延性腹泻的儿童研究了血清IL-10、IFN、TNF-α水平,显示IL-10、TNF-α在感染的急性期明显增高,IFN在迁延性腹泻儿童中明显升高,表明IL-10可能通过刺激轮状病毒特异性IgA分泌发挥免疫保护作用,IFN与发展为迁延性腹泻有一定联系。免疫机制

其它一些细胞因子如表皮生长因子和转化生长因子，对于轮状病毒感染后小肠上皮的恢复可能起一定作用。

报道了自然感染轮状病毒后对再发感染、腹泻、严重腹泻的保护率分别为38%、77%、87%。

尽管自然感染后仅产生部分免疫作用,但是对其免疫机制的深入研究对于轮状病毒感染的预防和治疗具有重要意义。免疫机制Velazquez等六轮状病毒感染与临床表现

轮状病毒感染与临床表现的轻重程度有关,可以表现为亚临床感染或者伴随严重脱水表现的急性腹泻。

轮状病毒感染与其它病原菌引起的腹泻相比

不同之处在于：临床表现呕吐持续时间长次数频繁脱水发生率高住院时间较长

轮状病毒感染的潜伏期约为2-4天,因此一部分病人由于机体的免疫保护机制可以表现为无症状感染,但是仍有部分病人在症状出现1-3天内,因合并严重水电解质紊乱而死亡。临床表现 轮状病毒感染机体经过短暂的潜伏期后,开始出现症状,最早表现为呕吐、腹泻，至少50%病例在腹泻之前先发生呕吐。Rodriguez等研究表明呕吐通常持续2.6天,腹泻持续约1-9天,平均5天。临床表现

大便性状为水样蛋花汤样便,每天10-20次,有时可含少许粘液,但大便镜检红、白细胞则少见。大便中轮状病毒排出高峰在病程的第三天,通常68%病人伴有发热症状,但只有40%病人体温超过39℃。临床表现 轮状病毒感染后依据呕吐、腹泻的程度决定是否合并脱水,通常合并等渗性脱水,但仍有部分病人表现为严重烦渴的高渗性脱水,可以通过血气分析、血清尿素氮水平及各种电解质指标来反映脱

水情况。临床表现轮状病毒感染后合并脱水后住院时间平均为4天,但在部分乳糖不耐受、营养不良、免疫缺陷病人可发展为迁延性腹泻,这与病毒复制周期延长和排毒时间延长有关。临床表现

尽管轮状病毒感染作为自限性疾病在大部分病人可完全痊愈,但是近年来各国研究人员发现,轮状病毒感染不仅可以引起肠道内感染,而且在肠道外其它器官可以发现轮状病毒感染,这些发现逐步引起人们的关注。临床表现

最初人们发现轮状病毒感染后会出现血清转氨酶的升高，并且在一例肝脓肿患儿的肝脓液中分离出类似轮状病毒的颗粒。随着分子生物技术的发展，轮状病毒感染引起的肠道外损伤进一步得到证实。临床表现

在一例怀疑轮状病毒脑炎的患儿的脑脊液和血清中，应用酶联免疫吸附法(ELISA)及补体结合试验发现轮状病毒特异性IgG,并且通过监测抗体浓度的变化证实轮状病毒脑炎的存在。后来他们从轮状病毒脑炎患儿脑脊液、血清、粪便中用逆转录聚合酶链(RT-PCR)方法发现相同

VP7基因序列。临床表现Ushijima等

应用核酸杂交及免疫组织化学的方法,对2例轮状病毒感染后死亡患儿进行研究,在毛细血管、小静脉、小动脉、心肌组织、大脑实质、小神经胶质、神经元、肠道、膀胱的内皮细胞中都发现了轮状病毒RNA,而且在大肠、近端小肠上皮细胞中也发现了轮状病毒RNA,两种方法结果一致,推测患儿死亡可能与轮状病毒感染引起的内皮炎有

关,特别是心脏、脑的损伤。临床表现Morrison等

研究也证实了轮状病毒存在多系统感染，并且在轮状病毒感染死亡患儿的肺泡细胞内和肝、肾组织等处检测到了轮状病毒。临床表现李宁等

从1975年到2000年,轮状病毒感染引起的中枢神经系统症状报道很多,其中19例在脑脊液中发现轮状病毒或者其特异性抗体,有的表现为高热惊厥、脑炎、瑞氏综合征、格林巴利综合征、类脊髓灰质炎综合征等。

对德国、台湾、日本、美国的调查表明大约有4%轮状病毒感染患儿会出现中枢神经系统症状。这些症状多数不需治疗,可经过几天至一月时间恢复,但少数仍有严重后遗症和死亡的报道,推测可能是通过淋巴细胞携带轮状病毒扩散,进入血脑

屏障引起的中枢神经系统感染。临床表现

有报道4例严重免疫缺陷合并轮状病毒感染患儿用直接免疫过氧化物酶的方法研究发现,在他们的肝细胞、肾集合管、近端小管胞浆及核周发现病毒的非结构蛋白,推测这些组织可能具有病毒受体,使病毒基因特异性表达,并且认为轮状病毒感染的肝趋向性并非血清特异性,轮状病毒容易通过

受损的肝细胞在肝组织中进一步复制。临床表现 对20例先天性肝外胆道闭锁的患儿研究发现，

C组轮状病毒感染可能与先天性胆管闭锁有关。

也报道了2例胰腺炎可能与轮状病

毒感染有关。临床表现Rubia等

另外有资料表明轮状病毒感染后40%伴有呼吸道症状，有的出现在轮状病毒腹泻之前，有的甚至不出现腹泻。轮状病毒感染累及呼吸道症状表现为鼻炎、咽炎、喉炎及下呼吸道炎症，在轮状病毒感染的冬春季节支气管炎患儿的支气管分泌物中也发现了轮状病毒，推测轮状病毒可能为冬春季节呼吸道感染的病原之一。临床表现

此外，轮状病毒感染引起中耳炎、颈淋巴结炎、良性肌炎、川崎病、婴儿猝死综合征、肠套叠等也有报道。

临床表现

轮状病毒感染新生儿引起肠道外症状也很多。有报道轮状病毒感染引起新生儿呼吸暂停—心动过缓发作情况，推测二者可能具有一定关系。临床表现

报道了新生儿感染轮状病毒死亡的病例，在患儿的肺组织、脑脊液、腹水中检测出RV抗原，另外轮状病毒感染引起中毒性休克、出血性坏死性小肠结肠炎也有报道。临床表现汤耀斌等轮状病毒感染引起的肠道外损伤的机制目前仍不清楚,推测可能与感染早期病毒排出高峰期发生病毒血症有关,轮状病毒通过感染淋巴细胞进入血液循环,引起中枢神经系统及其它系统症状。对于轮状病毒和肠道外感染的关系仍有待于进一步深入研究,这对预防及早期发现肠道外损伤及治疗

具有重要意义。临床表现综上所述，轮状病毒常在每年的秋冬季流行,其感染的主要部位是小肠粘膜上皮细胞,可造成细胞损伤,引起渗透性腹泻。其临床表现为发烧、呕吐、腹痛以及解黄色水样便,症状可持续3～8天。临床表现感染严重时,会发生致命性的脱水及电解质平衡紊乱。轮状病毒感染不仅可以引起肠道内感染,而且在肠道外其它器官可以发现轮状病毒的感染。临床表现七

诊断

诊断轮状病毒感染需要将临床症状与特异性实验室检查结合起来。实验室检查SDS透射电镜乳胶凝集试验核酸探针技术ELISART-PCR

PAGE和ELISA可以直接检测粪便提取物中的病毒RNA,前者可以检测出103/ml病毒颗粒。后者较前者敏感性更高,可以检测出105-106/ml的病毒颗粒,并且简便快捷,成为临床上使用广泛的检测手段。乳胶凝集试验也是比较简单经济的方法。诊断

核酸探针技术及RT-PCR技术可以直接扩增大便中轮状病毒RNA,这是通过将轮状病毒RNA逆转录为cDNA,再

将cDNA通过特异性引物扩增后进行测序分析,这种方法不但可以检测出脑脊液、血中浓度很低的轮状病毒,而且可以分析其血清型。诊断

除了这些方法外,通过监测大便中轮状病毒特异性IgA浓度变化,

可以间接观察肠道中轮状病毒复制情况。尽管有很多血清学方法检测轮状病毒感染,但是轮状病毒特异性IgM在症状出现后5-6天才表现阳性,对于轮状病毒感染的诊断意义不大。

细胞培养技术在体外已获成功,但仍局限在临床实

验室中,不适宜广泛推广使用。诊断八治疗小儿轮状病毒腹泻治疗的重点是合理喂养和纠正水电解质平衡紊乱。自从世界卫生组织推荐使用口服补液盐以来,轮状病毒感染的病死率已明显下降,但是对于严重脱水病人还需要静脉补液。 最近引起人们关注的是口服抗体治疗胃肠道感染,尽管这些抗体容易在胃肠道分解,但是分解片段仍具有中和病毒的活性。有报道单次口服γ-球蛋白可以明显缩短腹泻持续时间,减少轮状病毒排泌,缩短住院时间。治疗但是用牛免疫的轮状病毒抗体初乳治疗轮状病毒感染研究发现，虽然腹泻持续时间缩短、大便中病毒数量轻度减少，但是与对照组相比无显著差异。用含有轮状病毒抗体人乳治疗迁延性腹泻已有成功的报道。治疗现在很多研究表明一些细菌复合物可以治疗轮状病毒感染，如口服乳酸杆菌制剂可以缩短轮状病毒腹泻的时间，也有双盲安慰组研究表明亚水杨酸铋剂治疗轮状病毒腹泻有效。治疗国外有资料显示脑啡肽酶抑制剂可以减轻腹泻时间，这是通过抑制胃肠粘膜内脑啡肽分解，从而阻止CAMP水平增高，减少氯离子跨膜转运而发挥作用的。治疗

在一些体外研究也显示前列腺素A可以抑制轮状病毒复制,改变病毒肠毒素NSP4糖蛋白结构,此外其它复合物包括唾液酸衍生物和各种腺嘌呤类似物对于轮状病毒腹泻有一定作用,仍有待于进一步

研究辅助治疗效果。其它药物如干扰素、思密达及中药马蹄香等都有报道显示对于轮状病毒腹泻有一定的治疗效果。治疗八轮状病毒疫苗的研制

轮状病毒疫苗的研制始于80年代早期，经过20年的努力，目前已取得了较大的进展与突破。

然而，轮状病毒流行呈现出新的趋势：不同年度流行优势株转变异常毒株的出现G9型毒株全球流行混合感染比例增加

尤其是异常毒株的出现、G9型毒株全球流行迫切需要发展相应的疫苗。现将分别阐述目前研制的疫苗。疫苗RRV-TVVLPs疫苗DNA疫苗疫苗的研制（一）四价恒河猴-人类重配轮状病毒疫苗（RRV-TV）

RRV-TV疫苗(rhesusrotavirus(RRV)tetravalent(TV)

vaccine,RRV-TV)是通过恒河猴型轮状病毒(RRV)MNU18006株(G3)和人轮状病毒D株(G1)、DS-1株(G2)和ST3株(G4)共同感染细胞,经过交叉选择产生杂交株D×RRV、DS-1×RRV和ST3×RRV，疫苗的研制RRV的VP7基因分别被人轮状病毒VP7基因(G1、G2和G4)替换,其余10个基因保留恒河猴轮状病毒的基因,加上恒河猴轮状病毒本身为G3型,从而构成四价轮状病毒疫苗。疫苗的研制该疫苗针对世界范围内流行优势株G1-G4来预防RV腹泻,在美国、芬兰、委内瑞拉的临床试验中:

对轮状病毒腹泻的保护效率为48%-68%,

对重型轮状病毒腹泻的保护效率超过80%,

并可持续两年。疫苗的研制

美国FDA曾于1999年批准了惠氏公司研发的一种恒河猴轮状病毒与人轮状病毒重配的4价疫苗(取名RotaShield),用于预防轮状病毒感染。该疫苗是用重配技术制备的一种重配(reassortant)疫苗,由一个G3型恒河猴RV与另三个分别含有G1、G2、G4

型VP7基因的人轮状病毒重配株构成。疫苗的研制

该疫苗在美国、芬兰、委内瑞拉等腰三角形国的1万余名儿童中进行临床试验中显示很好的免疫原性,可使腹泻发病率至