液-固吸附色谱法基础知识课件讲解

经典柱色谱技术

——液-固吸附色谱法基础知识江苏农牧科技职业学院动物药学院仪器分析技术主要内容液-固色谱定义12分离原理仪器分析技术4流动相吸附剂3经典柱色谱分类吸附柱色谱

分配柱色谱

离子交换柱色谱

分子排阻柱色谱（凝胶柱色谱）

按色谱分离原理分仪器分析技术一、液-固吸附色谱的定义该色谱法是以固定相为固体吸附剂，流动相为液体的柱色谱法。固定相流动相仪器分析技术二、分离原理吸附剂表面对不同组分吸附力的不同和流动相对各组分的溶解能力（或称解吸能力、洗脱能力）的差异，最终导致混合物中各组分流出色谱柱的先后顺序（或在色谱柱中停留的时间即保留时间）不同而达到分离。分离原理示意图仪器分析技术三、吸附剂（1）硅胶(SiO2·XH2O)

硅胶为极性吸附剂，表面主要存在着硅羟基（硅醇基）和暴露于表面的Si-O-Si键，硅羟基能与极性化合物或不饱和化合物形成氢键，而使其具有吸附能力。硅羟基也能与水结合和后失去活性。自由型硅醇基硅氧烷型

硅氧交联结构，存在于内部，形成多孔结构硅醇基，存在于表面，吸附活性中心仪器分析技术硅胶吸附特性：随着含水量的增大，活度逐渐增大，活性逐渐减小，吸附能力减弱。硅胶含水量%活度级活性0I大小5II15III25IV38V仪器分析技术活化

铺好的硅胶板自然晾干后，在烘箱中于105～110℃烘干0.5-1h，其中的水可逆的被去除，使其吸附能力增大，此过程为活化。

硅胶具有微酸性，适用于分离酸性及中性的化合物。高温500℃烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力仪器分析技术（2）氧化铝

吸附机制氧化铝一般是由氢氧化铝脱水制得，其表面具有铝羟基（Al-OH）的氢键作用而有吸附作用。其吸附能力与含水量有关。氧化铝含水量%活度级活性0I大小5II15III25IV38V随着含水量的增大，活度逐渐增大，活性逐渐减小，吸附能力减弱。仪器分析技术

分类根据制备时pH值的不同，将色谱用氧化铝分为以下三种。氧化铝种类pH应用范围碱性氧化铝9～10分离碱性和中性化合物，如生物碱。中性氧化铝7.5分离酸性、中性和碱性化合物，如生物碱、挥发油、萜类、甾体以及在酸碱中不稳定的酯类、苷类等化合物。酸性氧化铝4～5分离酸性和中性化合物，如氨基酸、酸性色素。仪器分析技术（3）聚酰胺吸附机制聚酰胺是一类有酰胺聚合物而形成的高分子化合物，通过分子内的酰胺基与酚、酸、硝基、醌类化合物形成氢键而产生吸附作用。聚酰胺的吸附原理示意图仪器分析技术

吸附强弱决定因素吸附的强弱取决与各种化合物与之形成氢键缔合的能力：形成氢键的基团越多，则吸附力越强；化合物易形成分子内氢键，则吸附力减弱；芳香核、共轭双键多者吸附力大；仪器分析技术（4）大孔吸附树脂吸附机制大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，粒度为20-60目。因其具多孔性结构而具筛选性，又通过表面吸附、表面电性或形成氢键而具吸附性。仪器分析技术适用范围主要用于水溶性化合物的分离及纯化，如皂苷、其它苷类物质等。仪器分析技术四、流动相流动相又称洗脱剂，主要是对样品组分起着洗脱作用，其选择主要考虑以下三个方面因素。

1、被测物质的结构和性质①基本母核相同，分子中基团的极性越强，整个分子的极性也越强。②分子中双键越多，吸附能力越增，共轭双键多吸附力亦增大。③化合物基团的空间排列对吸附性也有影响。如能形成分子内氢键的要比不能形成分子内氢键的相应化合物的极性要弱，吸附能力也弱。仪器分析技术2、吸附剂的性能吸附剂的活性越大，对被测组分的吸附能力越强强极性物质——选择弱吸附剂弱极性物质——选择强吸附剂仪器分析技术3、流动相的极性流动相极性越大，对被测组分的洗脱能力越大，根据极性“相似相溶”原则：强极性物质——选择极性较大流动相弱极性物质——选择极性较小流动相常用的流动相极性递增的次序是：石油醚＜环已烷＜四氯化碳＜苯＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水。仪器分析技术选择方法兼顾被测物的性质、吸附剂的活性、流动相的极性