人白细胞分化抗原4(CD4)ELISA试剂盒说明书

第第页人白细胞分化抗原4（CD4）ELISA试剂盒说明书产品名称：人白细胞分化抗原4（CD4）ELISA试剂盒应用：用于人血清、血浆或其他相关生物液体中白细胞分化抗原CD4的测定。工作原理：本试剂盒采用的是双抗体夹心法酶联免疫吸附检测技术（ELISA）。测定样品中人白细胞分化抗原CD4水平。向预先包被了抗人白细胞分化抗原CD4抗体的酶标孔中，加入标准品和样本，温育后，加入生物素标记的抗白细胞分化抗原CD4抗体。再与HRP标记的链霉亲和素结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。最终，在450nm处测定反应孔样品吸光度（OD）值，样本中的人白细胞分化抗原CD4浓度与OD值成正比，通过绘制标准曲线计算出样本中人白细胞分化抗原CD4的浓度。试剂准备:1.使用前将全部的试剂和标本缓慢均衡至室温（1825oC）,试剂不能直接在37oC溶解。2.标准品（冻干品）:每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置约莫10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入150μL的标准品稀释液,如图所示依次倍比稀释成不同的梯度,标准品稀释液（0pg/mL）直接作为空白孔。为保证试验结果有效性,每次试验请使用新的标准品溶液。3.浓洗涤液:用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL,进行30倍稀释。试剂和样本的掌控方法:一、试剂1.试剂的选择:国家明确要求要采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关,我司严格依照国家标准进行,已获得国家承认的“三证”,每一个产品都有对应的批号,只要客户提前下单,我们就能为您供应新批次的产品,不必挂念会有过期的试剂。我司的试剂,值得您选择。2.试剂的准备:先将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置2030min后,再进行测定,使试剂盒在使用前与室温平衡,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地实现所需的温度,以满足后面的测定需求。二、样本1.内源性干扰因素:包含类因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等；类因子的掌控方法:①用F（ab）2替代完整的IgG；②标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理；③检测抗原时,可用2巯基yi乙醇加入到标本稀释液中使RF降解样本试验前准备:ELISA试剂盒液体样本:包含血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。（1）血清室温血液自然凝固1020分钟后,离心20分钟左右（20003000转/分）。认真收集上清。保管过程中如有沉淀形成,应再次离心。（2）血浆:应依据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合1020分钟后,离心20分钟左右（20003000转/分）。认真收集上清。保管过程中如有沉淀形成,应再次离心。（3）尿液:用无菌管收集。离心20分钟左右（20003000转/分）。认真收集上清。保管过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。（4）细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右（20003000转/分）。认真收集上清。（5）培养细胞检测细胞内的成份时,用PBS（PH7.27.4）稀释细胞悬液,细胞浓度实现100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（20003000转/分）。认真收集上清。保管过程中如有沉淀形成,应再次离心。（6）组织标本切割标本后,称取重量。加入肯定量的PBS,PH7.4.用液氮快速冷冻保管备用。标本溶化后仍然