pcr统一标准程序专业资料

xxxx医院检查科PCR实验室程序管理文献

撰写人：批准人：批准日期：启用日期：二零零四年贰月一日某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号:JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第1页共48页目录程序文献名称页码核酸扩增荧光检测实验室设立和管理………2实验室内务管理及清洁………5实验室人员配备及培训程序………………6仪器申请、采购、验证和管理程序…………8离心机使用、维护和校准原则操作程序………………9测量仪器设备统一管理原则程序……………11持续可调移液器操作及校准程序…………12常规仪器设备使用、操作和维护程序……14应急解决程序…………………17实验耗材购买、质检和储存程序…………19试剂质检原则操作程序……………………21实验室化学试剂管理及配制原则操作程序………………23实验室残留试剂药物、废弃物解决及生物防护程序………25标本采集、验收和保存原则操作程序……27标本唯一标记编号程序………30标本前解决原则操作程序……………………31检查成果报告程序……………33抱怨解决程序………………35实验室记录管理……………37实验室室内质量控制原则操作程序…………39实验室室间质量评价原则操作程序…………41GeneAmp5700型核酸扩增荧光检测仪操作及分析程序…42附图与附表修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第2页共48页核酸扩增荧光检测实验室设立和管理1 目：实现核酸扩增荧光检测实验室有专人负责，依照实验室管理规范实行全面质量管理，保证明验质量。2 范畴：本制度合用于所有开展核酸扩增荧光检测项目实验室及有关人员，并明确了实验室各项规章。3 操作人：4 规章4.1 实验室分区设立a）核酸扩增荧光检测实验室设立为试剂准备区、标本制备区及扩增区。每个区都设立一种缓冲区，用于更换工作服、鞋套及维持空气流向，实验室布局见附图01。进入各个工作区域工作扩增时,必要严格遵守单一方向顺序,即从第一区试剂准备区→第二区标本制备区→第三区扩增区。各区门前有醒目的志，一、二区通过排风装置保持正压，三区通过抽风装置保持负压。b）各室实验物品（含移液器、试管架、吸头盒、记录本、笔等），不得混用，须贴上不同标签予以区别。c）各区配有不同颜色工作服，一区为白色，二区为蓝色，三区为粉红色。进入实验室，必要更换本室有颜色标记工作服，穿上鞋套。4.2 试剂准备区工作制度a）实验人员进入该区须穿本区专用白色工作服。实验中须戴手套、一次性鞋套。b）记录温湿度计读数（例附表01）。c）记录冰箱温度计读数，绘制冰箱质控图（例附图02）。d）依照当天标本验收登记表，取出当天实验须配制和使用试剂，别的试剂要及时收好放回冰箱内。e）每周一清点库存试剂，看有无过期或将近到期试剂，或作报废解决或排列优先使用，避免挥霍，然后记录试剂详细保存状况。f）实验中所使用离心管、吸头等需经高压灭菌解决，使用时应在消毒有效期内。g）试剂准备工作完毕后，将使用过离心管、吸头须置于盛有10％“84”消毒液或类似消毒液废液缸中，还原实验台面。h）将准备好试剂放入传递窗中。i）其她区用品不得带入本区。j）每次实验记录，书写工整详细，应使用本室专用、带有本室标记记录本、纸和笔。k）实验完毕打开紫外灯消毒30～60分钟，记录紫外灯使用状况。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第3页共48页4.4 标本制备区工作制度a）实验人员进入该区须穿本室专用蓝色工作服。实验中须使用一次性鞋套，戴手手套，手套需常更换。b）从传递窗中取出试剂放入冰箱冷冻室试剂存储专区暂存。c）记录温湿度计读数。d）记录冰箱温度计读数，绘制冰箱质控图。e）核对标本编号、类型和标本数量。f）按试剂盒规定进行标本裂解和提取解决，在超净工作台上进行加样，递入传递窗内。g）使用本室专用通过灭活无菌解决加样器和带滤心吸头。h）使用过离心管、吸头须置于盛有10％“84”消毒液或类似消毒液废液缸中。i）使用本室专用带有本室标记记录本、纸和笔。j）患者样品应按有生物传染性危险品对待。k）标本解决完毕后，关闭所有仪器，记录仪器使用时间和运营状态。l）其她区用品不得带入本室。m）实验完毕要打开紫外灯消毒30～60分钟，记录紫外灯使用状况。4.4 扩增区工作制度a）实验人员进入该区须穿本区专用粉红色工作服。实验中须使用一次性鞋套，戴手套，手套需常更换。b）将从传递窗接受来离心后加好样反映管上机扩增。c）扩增分析完后，记录成果，打印报告。d）得到当天室内质控成果后，在室内质控图（例附图03）上描点。e）关掉扩增仪，记录仪器使用时间和运营状态。f）实验完毕要打开紫外灯消毒30～60分钟，记录紫外灯使用状况（例附表02）。本文涉及如下图表，见SOP文献末附图表：实验室平面布局示意图---附图01冰箱质控图---附图02室内质控图---附图03温度、湿度登记表---附表01移动紫外灯使用登记表---附表02修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第4页共48页修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第5页共48页实验室内务管理及清洁1目：保证明验室寻常内务管理及清洁工作顺利进行。2范畴：实验室有关人员及医院清洁工人。3内务管理及清洁制度3.1 内务管理制度b）进入实验室工作人员必要遵守实验室单一流向规定，禁止逆向走动。c）非本室工作人员未经容许不得进入实验室。d）实验人员必要熟悉仪器性能方容许操作，严格遵守操作规程。e）所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责，有使用维护记录。f）注意保持仪器卫生整洁，禁止在室内抽烟，吃零食，非仪器操作人应尽量少入。g）每天理解仪器运转状况及试剂使用状况，负责仪器整洁，安全，检查电源，水龙头，节假日应指定人员负责检查实验室仪器、设备，保证安全。3.2 内务清洁制度a）合理规划实验室内物品，做到摆放整洁、有序，无用或使用效率低物品放置到储存处，惯用物品要容易寻找到。b）抽屉、柜子、文献类物品要作好标记，以以便辨认。c）实验结束后用10%“84”d）每天对使用过移液器用优氯净进行擦拭，每2周1次对移液器进行高压消毒。e）实验过程中如发生标本或试剂外溅，应及时用10%“84”f）每天实验前通过内走廊上开关，启动各区通风系统，各区实验结束后打开该区移动紫外灯消毒实验台面，紫外灯每天启动30～60分钟。g）每天实验结束，待紫外灯消毒时间足够后，依次关闭各区紫外灯并记录。h）依次清洁三个区实验台面和地面，各区清洁消毒工具均专用，不可混用，注意按照单一方向流程原则来进行清洁。i）解决好各区废弃物，交医院集中解决。j）每周将工作服交院洗衣房洗涤消毒，不同实验区工作服隔开洗涤。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第6页共48页实验室人员配备及培训程序1目：保证明验室有足够数量合格具备开展该类实验能力实验人员。2合用范畴：本程序合用于实验室人员配备、管理、培训及考核。3程序：3.1人员规定：3.1.13.1.2实验室工作人员应参加卫生部或省临检中心举办PCR3.1.3对于新进入本室人员，如尚未获得PCR3.2人员配备：3.2.1实验室应依照工作需要配备足够工作人员，当前实验室有主任技师、主管技师、技师各13.2.23.3人员培训及考核：3.3.1实验室负责人（或委托人）参加每年卫生部PCR3.3.2实验室工作人员每1～2年至少参加1次PCR3.3.33.3.3.3.5实验室工作人员每年应提交至少修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第7页共48页3.4人员管理3.4.1实验室建立所有工作人员技术档案，涉及：学历、任职资格、刊登论文、研究成果、培训等有关材料复印件。3.4.2技术档案分文本档案和电子档案，文本档案每年更新1次，电子档案随时更新。本文涉及如下表格，见SOP文献末附图表：实验室重要负责人简历表---附表03实验室工作人员一览表---附表04人员培训筹划及培训登记表---附表05修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第8页共48页仪器申请、采购、验证和管理程序1 目：保证仪器正常购买、安装、使用，保证明验室仪器设备得到妥善管理。2 合用范畴：基因扩增检查实验室所有仪器设备。3 负责人：刘某某4 申请、采购及验证程序4.1仪器申请购买需依照实验室需要由实验室工作人员提出并向实验室负责人进行书面报告。4.2由实验室负责人填写仪器设备申购表，通过科室领导小组会议批准后，上报医院设备科统一进行购买。4.3仪器采购到货后，在医院设备科人员和实验室人员共同陪伴下由厂家到实验室进行安装。4.4仪器安装后由厂家工程师进行培训并通过设备科人员确认后，填报仪器安装表后，设备科和实验室各备份一份仪器维护使用档案后，由实验室负责人签字后方可使用。5管理程序：5.1基因扩增检查实验室重要仪器设备均需建立档案，重要仪器涉及：PE7000扩增仪、冷冻离心机、离心机、超低温冰箱、普通低温冰箱、移液器、超净工作台等。5.2设备档案涉及：设备名称、制造商名称、型号、序号、接受日期和启用日期、当前放置地点、接受时状态、校准和鉴定日期和成果以及下次校准日期、进行维护和维护筹划、故障记录等，并应有仪器使用阐明书或其他技术资料复印件。5.3仪器浮现故障应作记录和解决意见，如不能正常使用，应填写维修申请单，交医院设备维修人员或有关专门维修单位进行解决。5.4仪器应有工作状态标记，正常使用者贴绿色标签。有故障待修暂停使用者用黄色标签，不能使用者应贴红色标签。需定期作校准或检定仪器应有校准或检定日期及下次校准或检定日期记录。5.6基因扩增检查实验室仪器设备实行分区使用，不得混用。5.7本实验室所有仪器、设备均为专用不外借。本文涉及如下表格，见SOP文献末附图表：重要仪器设备一览表---附表06修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第9页共48页离心机使用、维护和校准原则操作程序1 目：保证离心机正常使用。2 合用范畴：合用于本室使用普通离心机和低温离心机。3 操作人：刘某某胡某某陈某某4 操作4.1 用法4.1.1 普通离心机a）离心机应放置在水平结实地板或平台上，并力求使仪器处在水平位置以免离心时导致仪器振荡。b）打开电源开关，将预先平衡好样品对称放置于转头样品架上，关闭机盖。c）旋动定期旋钮设定离心时间，缓慢旋转转速调节旋钮使仪器转速达到预定规定。d）离心完毕后，将转速调节旋钮调回零位，关闭电源开关。e）待离心机完全停止转动时打开机盖，取出离心样品，再次关闭机盖结束离心。4.1.2 低温离心机a）离心机应放置在水平结实地板或平台上，并力求使仪器处在水平位置以免离心时导致仪器振荡。b）打开电源开关，按功能选取键，设定离心温度、速度和时间。c）待机腔温度达到设定规定期，将预先平衡好样品对称放置于转头样品架上，关闭机盖。d）按启动键，离心机将执行上述参数进行运营，到预定期间自动关机。e）待离心机完全停止转动时打开机盖，取出离心样品。如不再使用该离心机，关闭电源，用柔软干净布擦拭转头和机腔内壁，待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。4.2 维护保养a）离心室清洁：为了避免样本等残留物污染，应经常对离心机外壳和离心室进行清洁解决。对离心室清洁，应先打开离心机盖，拨掉电源线，用专用设备将离心机转头旋下，70%乙醇去污染清洁离心室；离心室内橡胶密封圈经去污剂解决后，用水冲洗，再用甘油润滑。b）转头清洁：转头会被样本残留物污染，也也许会被某些化学试剂腐蚀，因而应对转头每月进行清洁维护。每月用中性清洁剂清洁转头一次，并在仪器使用记录本上作好记录，以延长转头寿命。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第10页共48页c）离心完毕后，应及时用干软布拭去离心室冷凝水。（此步仅合用于低温离心机）d）离心结束后，使离心机盖打开，然后关机。4.3 校准每年6月、12月请医院设备科南昌市计量局对该类仪器进行定期检修校准。应急解决如果离心时发现离心管破裂，必要先停止实验，将破裂管密封放入生物垃圾桶，再用75%酒精进行擦拭消毒，如必要需用移动紫外灯照射30～60分钟后才干开始实验。注意事项：a）离心机应始终处在水平位置，与外接电源电压匹配，并规定有良好接地线。b）开机前应检查机腔有无异物掉入。c）样品应预先平衡，使用离心机微量离心时离心套管与样品应同步平衡。d）挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖离心管，并保证液体不外漏以免侵蚀机腔或导致事故。e）每次操作完毕，应做好使用状况记录，应定期对机器各项性能进行检修。f）离心过程中若发现异常现象，应及时关闭电源，报请关于技术人员检修。g）定期清洁机腔。h）使用离心机时遵守左右手分开原则，只以右手操作仪器。i）使用冷冻离心机时，除注意以上各项外，还应注意擦拭机腔动作要轻柔，以免损坏机腔内温度敏感器。j）相对离心力于每分钟转速换算。以往离心机转速常以每分钟多少转表达，当前惯用相对离心力（RCF）表达。两者互换公式如下：N=(RCF×105)/(1.18×R)RCF=0.×R×NN表达转速，单位为转/分（r/min）；R表达离心半径，即离心管底端至轴心距离，单位为厘米（cm）；RCF表达相对离心力，单位用重力加速度g（g＝9.8m/s）本文涉及如下图表，见SOP文献末附图表：离心机使用登记表---附表07修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第11页共48页测量仪器设备统一管理原则程序1 目：保证设备仪器精准性，保证明验精确性。2 合用范畴：实验室所有测量设备（涉及移液器、温度计、湿度计、天平等）。操作人：刘某某胡某某陈某某4 操作办法依照详细仪器规定在规定期间内上报设备科，规定仪器校准。如移液器校准时间半年；温度计、湿度计1年；天平1年。b）由医院设备科联系某某省原则计量局统一校准。c）详细记录校准仪器名称型号、以及校准时间。d）某些测量设备（如温湿度计）可只校准一套，校准过测量设备可作为实验室其他该种测量设备参照。e）某些仪器设备（涉及冰箱、水浴箱等）每天都要用校准过温度计进行测定、记录，以保证其精准性，保证明验质量。本文涉及如下表格，见SOP文献末附图表：设备校正登记表---附表08冰箱温度登记表---附表09水浴箱温度登记表---附表10修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第12页共48页持续可调式移液器操作及校准程序1 目：对的使用移液器，保证移液器加样精准性和精确性。2 合用范畴：各种品牌、型号持续可调式移液器。3 操作程序3.1转动旋钮设定移液量，设定移液量不可超过该移液器规定范畴。3.2装上配套吸头（Tip）。3.3将按钮压至第一停点位置。3.4将移液管吸头浸入液面下2～3mm深处，然后慢慢松开按钮吸入液体。待移入吸头吸满液体后，将吸头撤出液面，擦掉吸头外侧所有液滴。3.5轻轻压下操作按钮至第一停点位置，放出液体。约1秒钟后，继续将操作按钮向下压至第二停点位置。待吸头液体放干净后，将吸头贴在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中，撤出吸头。3.6松开按钮使之回到起点位置。需要时，可更换吸头继续移液操作。4 校准办法4.1 校准环境和用品规定室温：20～25℃，测定中波动范畴不不不大于±0.5℃电子天平：放置于无尘和震动影响台面上，房间尽量有空调。称量时，为保证天平内湿度（相对湿度60～90％），天平内应放置一装有10mL蒸馏水小烧杯。小烧杯：5～10mL体积。测定液体：温度为20～25℃去气双蒸水。选定校准体积：a）拟校准体积；b）移液器标定体积中间体积。c）最小可调体积（不不大于拟定体积10％）。如为固定体积移液器，则只有一种校准体积。4.2 校准环节a）将移液器调至拟校准体积，选取适当吸头；b）调节好天平；c）来回吸吹蒸馏水3次，以使吸头湿润，用纱布拭干吸头；d）垂直握住移液器，将吸头浸入液面2～3mm处，缓慢（1～3秒）一致地吸取蒸馏水；修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第13页共48页e）将吸头离开液面，靠在管壁，去掉吸头外部液体；f）将移液器以30℃g）记录称量值；h）擦干吸头外面；i）按上环节称量10次；j）取10次测量值均值作为最后移液器吸取蒸馏水重量，按附表1所列蒸馏水Z因子计算体积；k）按校准成果调节移液器。备注：持续可调移液器校准由某某省原则计量局统一校准。（附表蒸馏水Z因子hPa(mbar)）温度（℃）80085390796010131067201.00261.002710.00271.00281.00291.002920.51.00271.00281.00281.00291.00301.0030211.00281.00291.00301.00301.00311.003121.51.00301.00301.00311.00311.00321.0032221.00311.00311.00321.00321.00331.003322.51.00321.00321.00331.00331.00341.0035231.00331.00331.00341.00351.00351.003623.51.00341.00351.00351.00361.00361.0037241.00351.00361.00361.00371.00381.003824.51.00371.00371.00381.00381.00411.0039251.00381.00381.00391.00391.00401.00414.3 比较校准法运用经计量局校准并颁发校准报告之同型号移液器，在移液器量程范畴高低两个档各选取一种校准点，运用电子天平称量成果与已校准移液器称量成果进行比较，完毕校准。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第14页共48页常规仪器设备使用、操作和维护程序1目：对的操作使用仪器设备，保证检测质量，保障仪器设备使用寿命，充分发挥仪器效益和效率。范畴：电热恒温水浴锅、超净工作台、冰箱等。3使用程序3.1仪器设备使用授权：a）仅有本实验室工作人员有权使用实验室仪器设备。b）仪器设备使用者在使用前一方面必要熟悉仪器设备操作使用程序并经室主任考核承认。3.2仪器使用：a）仪器设备使用严格遵守分区使用管理。b）仪器设备使用必要严格遵循仪器设备原则操作规程。c）重要仪器使用时每次工作应有相应使用记录。4操作及维护程序4.1电热恒温水浴箱4.1.1水浴箱应置于结实水平台上，电源电压须匹配。4.14.14.14.14.1.6水浴箱工作温度波动范畴应控制在：设定温度+/–4.1.7水浴箱正面外下壁贴有4.14.14.2 超净工作台4.2.1新安装或长期未使用工作台，使用前必要用超净真空吸尘器或不产生纤维物品认真进行清洁工作。4.2.2接通电源，使用前应提前15～30分钟同步启动紫外灯和风机组工作。4.2.3当需要调节风机风速时，用工作台操作面板上风速调节钮进行调节。风机、照明均由批示灯批示其工作状态，工作时，发光。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第15页共48页4.2.4工作台面上禁止存储不必要物品，以保持工作区干净气流不受干扰。4.2.5禁止在工作台面上记录书写，工作时应尽量避免作明显扰动气流动作；禁止在预过滤进风口部位放置物品，以免挡住进风口导致进风量减少，减少净化能力。4.2.6使用结束后，用消毒液清理工作台面后打开紫外灯，15～30分钟后关闭紫外灯，关闭干净台电源。4.2.7依照环境干净限度，定期将预过滤器中滤料拆下清洗，普通间隔时间为3～6个月。4.2.8每次使用干净台后，均需对干净台进行清洁。4.2.9定期（普通每半年1次）计测工作区风速，如发现不符合技术参数规定，则可调大风机供电电压。当风机组电压调到最大时，工作区风速仍达不到0.3m/s，则必要更换高效空气过滤器。（由厂家或院仪器维修人员进行）4.2.10做好维护记录。4.2.11长期不使用工作台拨下电源插头。4.3 普通冰箱4.3.1开、关机：试剂冰箱按阐明书规定放好后，插上电源线，冷藏室温度开关置于4℃，冷冻室温度开关置于-204.3.2若冰箱较长时间不用或需要送修时需按如下环节操作：a）关闭冰箱电源，并拔下电源插头。b）清空冰箱内所有贮存物，并妥善放置到其他冰箱内。打开冰箱门，等待冰箱内霜化完。c）用肥皂水擦洗干净冰箱内胆，后用消毒液擦洗一次。d）保持冰箱门打开待其自然干燥。4.3.3冰箱应放置于水平地面并留有一定散热空间。4.3.4外接电源电压必要匹配，并规定有良好接地线。4.3.5放入冰箱内所有试剂、样品、质控品等必要密封保存。4.3.6保持冰箱出水口畅通；非自动除霜冰箱应定期除霜；定期清洁冰箱，清洁时切断电源，用软布蘸水擦拭冰箱内外，必要时可用中性洗涤剂。4.3.7每日由专人负责观测冰箱内温度并记录于表中，登记表贴于门上，每月一张，一年装订成册存档。4.3.8若温度超过规定范畴，调节温控使其回到正常范畴，并进行记录。4.3.9若温控调节无效，报请设备科维修，修理后须验收合格并签字后方能正常使用。修改次数修改内容修改内容批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第16页共48页4.4 超低温冰箱4.4.1接通电源，将冰箱开关置ON位置，此时温度显示屏显示冰箱实际温度，且数字不断地闪烁。4.4.2温度设定：以调节冰箱温度为-70℃为例阐明，按SET键，温度批示显示-85℃，且“8”闪烁，按“↑”键直至“8“变为“7”；按“→”键，此时温度批示为“-75℃”，“5”闪烁，按“↑”键直至“5”变为4.4.3设定温度时应注意，普通应以10℃递减方式进行，即每次设定温度低于冰箱实际温度104.4.4如超低温度遇较长时间停电，其温度显示会不断闪烁，且报警批示灯（ALARM）也闪烁，此时应按上述办法调节。4.4.5由冰箱管理人或其委托人每工作日记录冰箱温度，冰箱温度登记表贴于冰箱门，每月更换1次，存档。4.4.6超低温冰箱由专人保管，试剂和物品应按指定位置存储。4.4.7修改次数修改内容修改内容批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第17页共48页应急解决程序目：在实际工作中，仪器设备发生故障、试剂盒发生质量问题时，为保证检查成果精确性，及时、应对的采用应急办法，最大限度上避免或减轻不利影响。范畴：合用于满足核酸扩增荧光检测实验室检测需要并也许对检查成果导致误差仪器设备和试剂盒。3职责：3.1核酸扩增荧光检测实验室工作人员在职责范畴内均有责任熟悉各种仪器和有关设备性能、规定、维护和保养、常用故障排除、特别要严格按照操作规程操作。3.2工作人员在职责范畴内均有责任故意识地注意以求及时发现并报告仪器设备和试剂盒异常状况。3.2作为应急解决，潜在着一定也许影响检测质量不拟定因素。室主任负责在第一时间检查核算应急办法有效性。4工作流程：4.1仪器设备故障：4.1.1室主任接到异常状况报警后，及时现场确认异常状况性质：观测有误、误操作、偶发现象或确属不能及时排除故障。4.1.2用红牌故障标志标示故障仪器，放置到其他实验室，以防被错误使用。4.1.3小型仪器送仪器部门维修，大型贵重仪器关闭电源开关，取下电源插头。用相应防尘罩遮蔽仪器。4.1.4有满足规定替用设备，启用替用设备（准用仪器）。借用其她部门仪器设备时，及时联系借用并核算该设备使用状态。替用、借用或备用设备使用在满足质量规定同步，必要同步满足实验室管理办法（特别是防污染）规定。4.1.54.1.64.1.7维修仪器必要经验收合格并供需双方签名后才干重新启用。去掉未校准标示牌。4.14.1.9修改次数修改内容修改内容批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第18页共48页4.2试剂盒质量问题：试剂盒质量发生问题，经核算后，及时告知供货商迅速更换另一批次试剂，使用前需先作质量检测，合格后方可使用。4.3仪器设备故障或试剂质量问题不能得到解决，预期将会影响到检测报告及时发出，可将标本送至其他实验室检查（该实验室同样应为获同类认准进行PCR检测实验室）；如已影响到报告及时发出，应在门诊取报告处向病人公示或向有关病区公示，获得病人谅解。4.4影响到检测报告发出状况，应在应急解决登记表（例附表10）作记录。本文涉及如下表格，见SOP文献末附图表：应急解决登记表---附表11修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第19页共48页实验耗材购买、质检和储存程序1 目：保证耗材使用质量，合理配用及存储。2 合用范畴：核酸扩增荧光检测实验室惯用耗材：1.5ml离心管、0.5ml离心管、带滤芯吸头。3 操作人：胡某某4 购买和储存程序4.1购买前订出筹划并定出品名、质量规格报有关部门订货及购买。4.2购买后，验收合格即领取。4.3惯用消耗品定点、定量地摆在实验台抽屉里，并标明品名及数量。特殊消耗品放在指定地方。4.5订购消耗品前，应精确查询数量。5 质检程序5.1 检测1.5ml离心管5.1.1 目测:检查离心管有无畸形、破损、不能闭盖状况。5.1.2 实验检测每批随机抽样离心管50个用于实验检测。a）将抽取50个目测合格b）离心管插在浮板上置于沸水浴锅中20分钟后取出，如发既有爆开状况发生，即以为该批离心管不符合本实验室实验规定，作退货解决。c）再将这50个离心管加半量生理盐水后，1万转/分离心20分钟，如发既有管盖爆开或漏液状况发生，即以为该批离心管不符合本实验室实验规定，作退货解决。d）经上述检测未发现不合格状况后，即启用该批耗材。5.2 检测0.5ml离心管办法、环节同上。5.3 检测带滤芯吸头5.3.1 目测检查吸头有无畸形、破损。5.3.2 实验检测:每批随后抽样吸头50个用于实验检测。a）用适配加样器配合吸取适量液体，看有无吸孔堵塞、漏气现象发生，在排除移液器因素后，如有异常发现，即以为该批吸头不符合本实验室实验规定，作退货解决。b）经上述检测未发现不合格状况后，即启用该批耗材。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第20页共48页备注：实验耗材在目测合格后基本上都可以初步通过验收。如果在目测不合格或目测合格后浮现甚至频繁浮现爆管、堵塞、漏液、漏气等状况下，再由实验人员进行实验检测。本文涉及如下表格，见SOP文献末附图表：消耗性材料验收登记表---附表12修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第21页共48页试剂质检原则操作程序1 目：保证每批用于临床实验试剂质量良好，符合规定。2 合用范畴：各种用于临床实验核酸扩增荧光检测试剂（HBV、HCV、TB、CT）。3 操作人：胡某某4 质检环节4.1 收到试剂后，目测试剂与否处在冻存状态。4.2 核对试剂品种和数量并检查包装：外包装（厂名厂址、检测项目、批准文号、批号和有效期等）；内包装（试剂瓶完整性、真空包装完整性、试剂品种完整性、使用阐明书有否等）。4.3及时将试剂转入－20℃4.4 最迟在前批次试剂存量尚可维持常规实验一周时，按如下规定对新批号试剂进行效验实验1。4.5 效验实验1：在使用前批次试剂进行常规实验同步带上少量新批次试剂。用新批次试剂做阴性对照和阳性室内质控品，重复5次实验，若阴阳性及室内质控成果均正常话，可初步通过验收。若浮现阴性涨、室内质控品不涨或成果偏差太大等状况时规定对新批号试剂进行效验实验2。4.6 效验实验2：4.6.1规定设立：空白对照、阴性对照、阳性对照各一，阳性原则品梯度（102、103、104、105、106）。4.6.2浮现如下状况中任何一种，判断为试剂不合格，不能用于临床检测：a）空白对照浮现扩增。如扩增曲线CT值不不大于27，需重复实验确证试剂污染。b）阳性对照和阳性原则品均未检出，或阳性对照未检出而阳性原则品检出率大幅下降，表达试剂失效或检测敏捷度大幅下降。4.6.3 阳性对照未检出，阳性原则品检测正常，提示样品提取液也许存在问题。重复新旧提取液阳性对照实验，拟定提取液失效问题。更换提取液后该批试剂方可使用。4.6.4 4.6.5阳性对照检出，阳性原则品未检出或扩增曲线明显系统性CT值偏大5个循环以上。提示阳性原则品存在问题。更换阳性原则品后该批试剂方可投入使用。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第22页共48页4.6.6 空白对照、阴性对照无扩增，阳性对照正常检出，阳性原则品导出原则曲线之斜率（－2.9～－3.9）、截距（26～34）、有关性（﹤4.7将实验成果归入记录。本文涉及如下图表，见SOP文献末附图表：试剂验收登记表---附表13修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第23页共48页实验室化学试剂管理及配制原则操作程序1 目：保证明验中用到各种溶液符合实验规定。2 合用范畴：核酸扩增荧光检测实验室惯用溶液：4％NaOH溶液、75％酒精、优氯净、10％84溶液等。3 操作人：刘某某胡某某陈某某4管理程序：4.1化学试剂购买或领用：每月清点一次试剂，发现试剂存量局限性时，及时领用或提交请购申请。发既有试剂过期或明显变质时要及时报废，并将报废试剂妥善解决。4.2化学试剂贮存：临床基因扩增实验室惯用化学试剂均置于避光、阴凉、干燥处保存。实验中惯用到某些化学试剂则依照规定保存于不同环境（如预冷乙醇保存于4℃）。PCR试剂一律贮存于-204.3化学试剂使用：临床基因扩增实验室惯用化学试剂均无毒性或仅有低腐蚀性，故使用时重要应注意分类、分区保存、关注失效日期和使用后及时清洁等。5 化学试剂配制：5.1 用品干燥干净200ml量桶一只，5ml量桶一只，三角烧瓶两只，天平一架，250ml、1000ml广口瓶各一只。5.2 配制环节5.2.1 配制4％NaOH溶液a）用天平称取4克分析纯NaOH固体，置于一只三角烧瓶中。b）用200ml量桶精确取100ml水，缓缓注入盛放NaOH固体三角烧瓶中。c）摇荡三角烧瓶使NaOH固体充分溶解。d）然后缓缓倾倒入250ml广口瓶中密封保存备用。5.2.2 配制优氯净a）普通桌面，器具和地面消毒只要使有效氯达到500mg/L，即可达到消毒作用。b）优氯净有效氯为60％，如配制一升优氯净溶液，则称取优氯净833mg，倒入三角烧瓶中，缓缓加入1000ml水充分溶解，备用。c）如需加大消毒力度，则有效氯溶度加大。5.2.3 配制75％酒精溶液a）普通常规消毒75％酒精由医院药剂科提供。b）RNA提取75％酒精配制，试剂盒提供DEPC水，酒精用分析纯无水酒精。c）依照当天标本数量配制。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第24页共48页5.2.4 配制a）精确量取84原液100ml倒入三角烧瓶中。b）量取900ml水，缓缓倒入三角烧瓶中，混匀备用。注意事项：每份配制好溶液保质期为14天。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第25页共48页实验室残留试剂药物、废弃物解决及生物防护程序1 目：保证明验室、实验人员和外部环境安全。2 合用范畴：核酸扩增荧光检测实验室惯用化学试剂（NaOH、EDTA、乙醇、生理盐水等）、实验室废弃物解决；实验人员和外部环境生物防护。3 操作人：刘某某胡某某陈某某4 解决办法和环节4.1 残留试剂、废弃物解决4.1.1无菌物品，如棉签、棉球、纱布等应在有效期内使用，使用后废物品应及时进行无害化解决，不得随意丢弃。4.1.2使用合格一次性实验用品(如试管、吸头、离心管等)，放入污物袋内交医院集中解决。4.1.3夹取标本工具，如钳、镊、接种环、吸管等，用后均应消毒清洁，进行微生物检查时，应重新灭菌，金属工具可烧灼灭菌或消毒液浸泡；玻璃制品干热或压力蒸汽灭菌。4.1.4污染标本容器、吸管及注射器等投入盛有“844.1.54.1.6一次性塑料痰盂，先用mg/L优氯净溶液浸泡2～4小时后，交医院集中解决。4.1.74.1.8废弃标本如血、尿、胸水、腹水、脑脊液、唾液、胃液、肠液、关节腔液等按mg/L浓度比例加优氯净干粉，搅匀后作用２～４小时后，交医院集中解决。4.1.9盛标本容器，若为一次性使用纸质容器及其外面包被废纸，应焚毁；对可再次使用玻璃、塑料或搪瓷容器，煮沸15分钟或加入mg/L优氯净溶液浸泡2～6小时，消毒液每日更换，消毒后用洗涤剂及流水刷洗，沥干，用于微生物培养采样者，用压力蒸汽灭菌后备用。4.1.10修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第26页共48页4.2生物防护办法生物防护目是在监控基本上，对各种危险因素采用有效控制办法，防止实验室中存在污染源对实验室、实验人员和环境污染。4.2.1每天更换废液缸10%“84”消毒溶液，并保证10%4.24.24.4.4.2.6有下列状况之一者，需此外消毒：手接触有传染性微生物；水龙头、水池肥皂、工作服也许同步被大量细菌污染者。消毒剂可用“4.4.4.2.9在实验过程中病人标本（血液、体液）外漏时，4.4.4.24.总之，实验室生物防护办法，从技术角度讲有三大环节：供应室灭菌保证，实验室生物防护办法、相应规章制度和实验人员防护意识，实验废弃物解决。在实行生物防护办法时，应严格遵守各种有关规定和制度，提高实验室整体生物防护水平。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第27页共48页标本采集、验收和保存原则操作程序1 目：保证所收集标本符合实验规定。保证标本保存质量。2 合用范畴：核酸扩增荧光检测验室现行检测项目：HBV、HCV、TB、CT。操作人：陈某某4 采集程序4.1标本采集由实验室第二实验员陈某某在标本接受区采集。4.2标本也可由其他各科室医护人员采集并送至实验室，但是该医护人员均需接受基因诊断实验室关于核酸扩增技术，标本采集、保存、运送知识统一培训。4.3基因诊断实验室人员依照实验室检测所需制定采集标本规定。如下：a）血液标本：用真空采集管采集血液标本，血标本采集后在2小时内送达实验室（HCV采用EDTA抗凝血浆）。离心（检查单与标本一道）后用一次性吸管吸取血清或血浆加入经消毒1.5ml离心管中，输入病人基本信息，编号。b）痰标本：用带盖无菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰标本送检。（对于无痰或少痰患者，可用45℃加温100g/LNaCl水溶液雾化吸入或变化体位以使痰液易于咳出；对于小儿可以轻压胸骨柄上方以诱导咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集标本。）标本在室温下保存不能超过24小时。c）生殖道拭子：尿道或阴道分泌物由医生用专用取样拭子（灭菌，一次性）采集样本，及时送检。采集生殖道拭子标本，规定病人在采样前2小时内不能排尿，采样时，将棉拭子伸入男性尿道及女性宫颈口2～3cm，转动一周以获得上皮细胞。d）尿液：由病人自留尿液于无菌封闭杯中送检。e）脑脊液和胸腹水：由临床医生采集后放入消毒试管中及时送检。注意：所有上述用于临床标本采集容器如试管或离心管，均应使用前高压灭菌。5标本运送程序标本采集后，密闭、标（贴）姓名，应尽量快送至检测实验室，如运送时间需2小时以上，必要用冰盒送至实验室。标本中如加入了恰当稳定剂，如用于RNA测定加入4mol/L异硫氰酸胍盐（GITC）血清（浆）标本和用于DNA测定EDTA抗凝血等，则可在室温下运送或邮寄。6 验收程序6.1 验收环节6.严格对各类样本核对和双签制度，对病房各样本及时进行验收，核对，不符合规定样本一律退回，并有书面记录。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第28页共48页6.1.6.1.2.1普通内容进入实验室样本在进行编号(或贴条码)、离心前，工作人员应再次认真核对姓名，联号，住院号，病区床号，项目等。对不符合规定者应作记录，并及时告知采样科室，对的及时地补采样，以免延误病人检测成果报告。对书写不清晰申请单，当事者要及时与病房联系(可电话)，明确受检者姓名，住院号，性别，年龄，病区，床号和检查项目等；并作相应记录。6.1.2.2按检测项目验证标本a）HBV：所需标本类型为未溶血血清或血浆，注意血浆标本所用抗凝剂，用EDTA-K2，不可使用肝素。标本为全血时及时分离出血浆保存。b）HCV：同上，但标本为血清时，要在1小时内分离出血清用于检测。c）TB：晨起第一口深部痰(不能为唾液)、胸腹水、脑脊液、脓液或穿刺液。d）CT：尿道或阴道分泌物。6.1.3 符合拒检不合格病人标本范畴实验室人员对标本进行查验，浮现其他不合规定状况，如未对的使用抗凝剂标本、严重溶血及静脉营养时严重脂血并影响检测成果血标本、采血量局限性检查需要量标本、采集标本将严重影响检查成果者（例如检测项目TB标本是唾液而不是晨痰）、采样时间过长（特别是进行RNA检测时）、经核对标本病人姓名、年龄、性别、及检查号联等不相符等等，应拒收标本，登记并告知有关科室。6.1.4 拒检程序a）对拒检不合格标本应登记在不合格标本处置记录本上。b）填写不合格标本处置单，并随同申请单送返送检科室。c）必要时电话告之有关科室医生或护士。7标本保存程序7.1解决前标本保存：a）HBV：全血样本可4℃下短期（1～2周）保存，或分离出血清（血浆），保存于-20℃下，较长期保存应在d）HCV：在1小时内分离血清，吸取200µl，加入20uRnasin，保存于-20℃c）TB：液化痰标本如果不及时用于核酸提取，可保存于-70℃下。解决后痰或胸腹水、脑脊液、脓液用于TB检测标本可置于4℃下短期保存。长期保存于修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第29页共48页d）CT：解决后沉淀标本可置于－20℃下短期保存，如不及时用于核酸提取，则需保存在-70℃下。7.2报告发出后标本保存：a）提取核酸标本当天检测可置4℃保存，如当天不检测应置-20b）原始血清/血浆样本在报告发出后放入超低温冰箱-7c）血清/血浆标本放置超低温冰箱保存时须有记录，按检测项目分类存储，并由专人负责管理。8 特殊标本解决对暂不检测项目和规定期间外收到零散样本，要随时登记和交班，以免漏检，遗失和延误检查。对特殊样本或特殊病人样本，实行“首接”负责制，所谓特殊样本是指难于采集样本，以及特殊病人样本一律实行“首接”负责制，无论那位工作人员，一旦收到样本后，均须负其责任，不得以任何借口推托，及时和正保证管和转送样本到关于实验室或关于人员，同步作交班记录和双签名。对于做长期病情动态考察病人标本一律置于-70℃本文涉及如下图表，见SOP文献末附图表：PCR扩增接受标本登记表---附表14PCR扩增拒收标本登记表---附表15标本超低温保存登记表---附表16修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第30页共48页标本唯一标记编号程序1 目：保证标本编号唯一性，也是精确发放报告基本。2 合用范畴：使用核酸扩增荧光检测实验室所开展四种检测项目：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、核结杆菌、沙眼衣原体。操作人：胡某某陈某某4 编号办法4.1基本原则4.1.1 依照标本送检日期，每天标本相应标记一种唯一代号。如当天为9月15日，则编为020915。4.1.2依照检测项目不同，每种检测项目相应标记一种唯一代号。如乙型肝炎病毒标记为B、丙型肝炎病毒标记为C、结核杆菌标记为T、沙眼衣原体为CT。4.1.3在同种检测类型验单中，按验单顺序编号。如第一种检测乙型肝炎病毒验单编为B01、第二个检测乙型肝炎病毒验单编为B02、第三个检测结核验单编为B03等。4.1.4如有特殊状况，应在标记前面增长特异字母区别开，如住院单和门诊单、其他医院送来单和本医院单要区别开等。4.2编号环节a）先记录所有当天送来标本，依照编号基本原则，给当天标本编好号，每个样本每个检测项目相应一种唯一编号（如021008T04）。b）用标记笔在每张验单和相应样品管上作好相似标记。c）在样本记录簿上作好记录，每个样本记录都应涉及如下信息：送检时间、医院、科室、医生、病人姓名、重要病史、实验成果（当天实验后填上）等。d）模仿扩增仪反映槽，在一张检查信纸上按类型、顺序排好各样本位置，同步排好阴阳性对照、阳性质控品、阳性原则品位置。e）解决好样品、点样后，按照d）排布，将反映管放入扩增仪上相应位置，开始扩增。f）扩增得到成果后，先在记录簿上填入成果，作好记录，再一一把实验成果填入相应验单。g）发放成果验单。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第31页共48页标本前解决原则操作程序1 目：保证标本解决原则化、规范化，使不规范操作因素对实验成果导致影响减至最小。2 合用待解决标本范畴：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、沙眼衣原体、结核杆菌。操作人：刘某某胡某某陈某某4 原则操作程序4.1 乙型肝炎病毒（DNA血清）a）双手戴上手套，从冰箱取出标本，将化验单和试管依次编号后，弃去手套。b）双手换上新手套，用镊子(夹取灭菌物品专用)取出1.5ml离心管，相应标本编号，置于离心管架上。c）将移液器调到40µl，先混匀DNA提取液，再吸取40µl加入到已编号离心管中。然后吸取40µl血清，加入离心管中混匀，注意每吸取一份血清标本应更换一次枪头。解决所有标本，然后将离心管插到水浴板上，用镊子放入水浴锅，沸水浴10分钟。d）水浴完毕后用镊子将水浴板取出，转至4℃静置8～12小时，然后10000转/5分钟离心，取上清液2µe）收拾台面至准备状态。4.2 丙型肝炎病毒（RNA血清）a）双手戴上手套，从冰箱取出标本，将化验单和试管依次编号后，弃去手套。b）双手换上新手套，用镊子(夹取灭菌物品专用)取出0.5ml灭菌离心管，相应标本编号，置于离心管架上。c）先用移液器混匀RNA提取液A，然后吸取10µl加入到编好号离心管中，再用移液器吸取50µl血清加入，最后用移液器加入200µlRNA提取液B，在震荡器上震荡混匀，放置5分钟，然后6000转1分钟离心。d）去上清，留沉淀。加入450µl用DEPC水配制75﹪预冷乙醇充分混匀，洗涤沉淀，然后6000转1分钟离心，去上清。相似办法再洗一次，吸干上清，65℃e）给烘干沉淀中加入18µl反映液I，混匀，再加入2µl逆转录酶，充分混匀，瞬时离心（3秒），放入温箱，37℃f）逆转录后95℃3分钟高温灭活，瞬时离心（3秒），取5µlg）收拾台面至准备状态。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第32页共48页4.3结核杆菌（痰液）a）取晨痰加入4倍体积4％氢氧化钠待其充分液化(30分钟)，液化过程中，振荡2～3次，如痰液粘稠，可延长液化时间。b）取1ml消化液加入离心管，10000转离心5分钟。c）弃上清留沉淀，加入1ml生理盐水洗涤，10000转5分钟离心。d）重复c操作，留沉淀，加入50µlDNA提取液，混匀。e）沸水浴10分钟，4℃f）10000转5分钟离心，取上清2µl点样上机。4.4沙眼衣原体（分泌物）a）向装有分泌物标本试管中加入1ml无菌生理盐水，充分振荡混匀。b）吸取液体转至1.5ml离心管中，1rpm离心5分钟。c）弃上清，沉淀用无菌生理盐水洗涤一次后，加50µlDNA提取液充分混匀。d）沸水浴10分钟，4℃静置6～8小时。e）10000rpm离心5分钟，取上清液2µl点样上机。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第33页共48页检查成果报告程序1 目：使核酸扩增荧光检测实验室检测报告及时发送，更好服务于临床以及患者。2 合用范畴：本原则合用于基因诊断实验室所有检测成果报告。负责人：刘某某4 报告程序4.1检测成果报告应精确、清晰、明确、客观和及时，杜绝虚假报告。4.2实时荧光PCR测定期其数据要经分析，避免因非特异性荧光而导致假阳性成果。依照质控品判断PCR扩增有效性，只有当质控品扩增成果符合项目SOP关于条件时，才可发出报告，否则应重新测定。4.3定性测定检测项目其成果以“阴性”或“阳性”报告；定量测定，成果报告为每毫升拷贝数（拷贝数/ml），如成果高于测定办法线性范畴上限，则对样本稀释后再测，成果乘上稀释倍数。如成果低于办法测定范畴下限，则直接报告低于检测下限即可，不能报告为“0”或“阴性”4.4每份报告均应使用科内统一打印报告专用纸打印；报告内容至少应涉及：病人姓名、性别、年龄、及测定项目、成果、参照范畴以及标题、标本号、标本类型、标本接受日期和检测日期、实验操作者和审核者签名、报告日期等。否则视为无效或虚假报告单。4.5所有检测报告均需具备检测和审核资格实验人员进行检查核对，报告单上具备检测人员和审核人员签字方可生效。4.6报告单应及时发出。门诊患者报告单送至服务台门诊报告发放处，医院采用计算机网络系统，门诊患者凭病历唯一条形码在发放处领取检测报告，住院患者报告由实验室打印后经专门人员送至病房护理部。4.7打印当天检测报告汇总表，存档，妥善保存2年以上。4.8原则上不采用电话、图文传真、电子邮件等形式传送成果。4.9如临床科室或者患者由于特殊状况且理由充分，规定以上几种特殊形式发送报告，必要确认身份后（涉及核对其所查询患者姓名、性别、年龄、检测项目、送检医生、送检日期、病区床号等状况，并提供患者ID号），经实验室负责人批准后才干发放报告。当需邮寄报告时，应由患者告知地址、邮政编码及E-Mail地址等。4.10应明确告知查询者，上述特殊状况报告均仅为临床提供参照，实验最后成果以正式检测报告单为准。特殊状况报告发放需详细登记，订立报告人姓名，实验室负责人签字。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第34页共48页4.11任何形式报告等患者资料必要遵循医院患者临床病历资料保密原则，未经允许，普通人员不可查询或复印，特殊状况时必要在科主任或本室负责人批准状况下方可查询。本文涉及如下图表，见SOP文献末附图表：核酸扩增荧光检测成果报告---附表20修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第35页共48页抱怨解决程序1目：以病人为“中心”，以质量为“核心”，优质服务。“抱怨”基于对临床和病人（涉及家属等）返馈意见注重，往往从中能发现实验室存在问题或漏洞。有利于提高检查和服务质量，减少医疗差错和事故，巩固和有效改进实验室质量体系，本程序合用于检查科权限内能解决解决问题。当科室不能妥善解决时，将移送医院医务处，遵循医院医疗纠纷解决程序。2合用范畴：来自于患者或家属，临床医护人员和/或实验室工作人员针对检测成果质量、服务质量和/或实验室管理等问题投诉和/或抱怨。3负责人：刘某某4职责a）每个实验室人员均有责任接待申诉者，室负责人对抱怨进行解决，如超过室负责人职权范畴，应会同科主任解决。b）对外部抱怨，实验室工作人员不得推卸，应负责将抱怨人领到实验室负责人处，对电话抱怨须作记录并及时报告室负责人。5解决程序5.1抱怨接受执行者在接受抱怨时应热情、和谐、礼貌、严肃和认真，应记录抱怨者姓名、地址、联系方式、抱怨内容（一方面注意稳定抱怨者情绪）。5.2抱怨解决5.2.1 患者对服务态度抱怨解决方式a）接到抱怨后，及时记录抱怨，并向科室负责人报告。b）对患者提出合理规定及时进行解决。c）调查事情原委，依照调查成果对有关负责人进行惩罚。d）记录解决成果。5.2.2 患者对成果精确性抱怨解决方式a）为患者展示原始实验数据。b）向患者解释有关实验程序和也许临床状况，协助患者解除疑虑。c）如确有实验成果不符合有效性规定或浮现错误，则应及时纠正错误，重新实验以得到精确成果。同步由室负责人向患者致歉以争获得到其谅解，按关于条例对负责人进行相应惩罚，并记录。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第36页共48页5.2.3 医生对检测成果和临床诊断符合率抱怨解决方式a）针对医生抱怨进行全程调查，查找存在影响成果因素，并形成书面报告。b）就调查发现问题进行针对性解决。c）与医生建立交流机制。解决原则：a）能及时解决抱怨应予以及时解决，记录解决成果。b）不能及时解决报怨应争取与抱怨者商定反馈时间，尽量将问题向实验室主任报告，谋求妥善解决办法，尽快答复抱怨者。c）抱怨解决以抱怨者满意为目，但必要以遵重科学，遵重事实为原则，在不违背科学原则，医疗行为规范基本上，争取抱怨者最大限度理解。5.3抱怨解决善后a）执行者对报怨作两份记录，自己保存一份。b）对抱怨审核遵循科内部审核安排执行。c）如抱怨涉及到实验室操作程序与否符合《临床基因扩增实验室管理暂行办法》、《临床基因扩增实验室工作规范》等，实验室负责人应召集实验室工作人员讨论，如实验室操作程序的确不符合关于规定，应重新修订操作规程，并报科主任批准后执行。d）实验室工作人员在向实验室主任报怨得不到满意解决时，有权向科主任提出报怨。本文涉及如下图表，见SOP文献末附图表：抱怨记录及解决反馈意见登记表---附表17修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第37页共48页实验室记录管理1 目：检查资料是实验室质量证明资料及质量体系运作根据重要构成某些。为使资料记录、保存状态在控，特制定本文献。2 合用范畴：本程序合用于实验过程中产生数据、文本资料记录和保存，重要有：病人和标本信息、实验操作记录、实验检测成果、原始检测申请单和检测报告单、仪器使用记录等，实验记录涉及电子记录和文本记录。3 操作人：胡某某陈某某4 规章4.1 电脑上记录文献管理规章a）扩增过程中由荧光扩增仪产生数据文献必要保存在非系统分区专门文献夹中（如D:\PCR），保存途径要清晰、便捷、易查找。b）文献夹目录构造规定层次感分明：一全年实验成果均保存在一种年度文献夹里，如“”文献夹；每个年度文献夹又包括12个月文献夹，如“9月”、“10月”，每天实验成果就保存在当月文献夹里。c）SDS文献保存时以当天日期命名，如9月10日保存为0910.sds。d）若某天进行了多次实验，须保存各种SDS文献，命名时在背面以a、b、c等字母标记，如9月10日做两次实验，分别保存为0910a.sds和0910b.sds。e）为了防止储存实验成果电脑发生系统崩溃、硬件故障等问题导致实验成果丢失、无法查询等状况，每月实验成果记录文献都要用移动存储设备（如软盘、USB硬盘等）拷贝到另一部PC机上做备份；一年数据要用刻录机刻制一张CD光盘备份储存，贴上标签，如“实验成果备份”。放入档案柜妥善存储。4.2 书面记录文献管理：a）检测过程中实验记录：在专用实验记录簿上记载，不同实验区记录簿不得混用。试剂贮存区记录检测所用试剂盒状况（名称、批号、数量）和自配试剂记录；标本制备区记录检测标本数及在本区内进行操作过程；在扩增及产物分析区记录质控成果和分析。b）标本原始检测申请单最后保存于扩增及产物分析区，至少1年以上；其他实验记录保存于各自实验操作区内，至少保存2年以上。c）实验记录要真实，需使用黑色墨水或圆珠笔，笔迹清晰，不得随意涂改，如确需更改，应在原更改内容上划双线，填上新内容，并签名。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第38页共48页d）实验记录须妥善保存，不得给她人借阅或复印（涉及医疗纠纷解决除外）。在记录借出时需有实验室负责人、经手人、借阅人签名方可。e）超过保存期限实验记录，由室负责人交科里统一保存。f）在接受标本后，要记录入病人和标本信息，涉及：病人姓名、性别、年龄、病人ID、检查单申请ID号、病区床号、检测项目、标本类型、标本状态、送检日期、标本接受人姓名等。连同实验得到检测成果，当天工作结束前打印出当天病人、标本信息及检测成果汇总表，存档，保存至少1年以上。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第39页共48页实验室室内质量控制原则操作程序1 目：随时理解并控制实验室检测精密度变化。2 合用范畴：核酸扩增荧光定量检测实验室。操作人：刘某某胡某某陈某某4 操作环节4.1 血清质量控制品a)质控品来源：卫生部或省临检中心b)质控品与样本同步解决，排列顺序为：原则品或校准品，阴性质控品，阳性质控品，临床样本。c)质控品解决及分析判断。d)实验成果判断：实验成果合格，即发报告；实验成果不合格，报告室主任，会同关于人员，查找因素，妥善解决。e)每次检测质控成果须有记录。f)失控因素及纠正办法须有记录。附：室内质控品制备及操作质控品制备：收集本室检测临床样本，HBVDNA定量为104copies/ml样本混匀，并分装于0.5ml离心管中，每支110µl，编号后（如Qb0201-n），-20℃操作：每次检测过程中将此分装室内质控品与样本同步检测，记录此标本检测成果；计算前5次检测成果平均值作为本批质控品靶值，并在网络电脑Lis系统中进行室内质控图制作。4.2 室内质控图用法4.2.1 描点a）图中X线为靶线，X±2s为警告线，X±3s为失控线。对于同一批号质控血清无论使用几种月，其空图均不变化。只要将图纸上方“起止日期”项填入每月实际起止日期即可。b）每天将该批号质控血清按关于规定程序复融随同病人标本同步检测。将日期、检测成果和操作者如实记录在图下方相应位置，并按前面办法画出图上相应点，用直线将该点与前一天点连接。c）月底计算当月所有质控血清检测成果X、s和CV，并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档案。4.2.2 图形分析a）如果在X±3s线以外，则为失控，应及时报告关于负责人，迅速查找因素。必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控状况、查找过程及解决成果等详细记修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第40页共48页录。b）如果在X±2s线以外，或浮现持续6点以上在一侧等规律变化，均应虽然向关于负责人反映，并积极查找因素。但当天检查成果普通可以发出。4.2.3 通过观测图形规律性变化进行误差分析，消除误差来源a）曲线漂移：提示有系统误差，精确度发生了一次性向上或向下变化。这种变化往往是由于一种新状况引起。如更换不同批号试剂，启用新批号质控血清、操作人员变换等。在找因素时，应重点注意“漂移”先后发生了那些变动因素。b）趋势性变化：向下或向上趋势性变化表白检测精确度发生了徐徐地变化。这种变化往往是由于一种逐渐变化因素导致。如质控血清降解，试剂效价减少等。c）持续多点分布在靶值一侧：当前，普通以为质控血清检测成果持续6天以上出当前靶值同一侧，则应迅速查找因素，争取尽快使之回答环绕在靶值随机分布状态。由于按照记录学原理，由纯随机误差导致这种状况也许性很小。持续6天以上出当前靶值同一侧也许性不大于1.5％。因而凡浮现持续6天以上出当前靶值同一侧者均有也许存在非随机误差因素。如成果与靶值偏离并不太大，不会给临床使用带来太大影响时，普通化验报告可以照常填发。d）其她规律变化：（周期性等）4.2.4 通过图形资料对比进行误差分析，消除误差来源a）每月月底将该月所有质控血清检测成果X和s与该批测定X和s进行比较。如果X发生了变化，阐明精确度发生了变化提示有非随机误差存在。如果当月s不同侧表白检测精密度发生了变化。b）将使用同一批号质控血清CT值X和s按月份列出。如果X逐在月上升，应考虑保存不当导致试剂效价减少或质控血清自身浮现降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，则重要提示常规工作精密度下降，应重点从操作、管理上找因素。c）在数年中，把每月CV和失控规律列成表，可用作检测质量历史性回顾及趋势分析。本文涉及如下图表，见SOP文献末附图表：室内质控登记表---附表18修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第41页共48页实验室室间质量评价原则操作程序1目：室间质评（EQA）是实验室质量控制体系中重要某些，是保证患者检查成果和其报告精确性和可靠性，以及各实验室间成果可比性重要手段。2合用范畴：卫生部或省临检中心下发PCR室间质控血清检测。3负责人：刘某某4职责：4.1实验室人员均须熟知并遵守本程序，详细项目由室负责人执行。4.2室负责人监督贯彻。5操作程序：5.1质控标本接受和验收：收到质控血清后由有关人员登记、签字，依照质控标本关于阐明对血清数量、批号、包装进行验收并将质控标本按规定置-20℃5.2质控标本检测按常规临床标本对待，若需要，检测前先依照阐明对质控物进行复溶。5.3室间质评样本必要按实验室常规工作进行，由进行常规工作人员测试，工作人员必要使用实验室常规检测办法和试剂，不得特殊对待。检测成果须在截止日期前上报。5.4实验室检测EQA样本次数必要与常规检测病人样本次数同样（即1次）。EQA样本检测在部或省临检中心规定期间内进行，检测成果上报也必要在截止日期前，通过E-mail或挂号信寄出。5.6室间质评检测成果和反馈成果均记录于室间质评登记表，依照反馈成果分析室间质评状态，如有出控应查找因素，并采用相应办法。5.7禁止与其他实验室交流室间质评检测成果。修改次数修改内容修改人批准人生效日期某某医学院第一附属医院科室管理诊断规范文献文献编号：JYYFY-PCR版序:1130生效日期:12月3日责任部门:细胞基因诊断中心页码:第42页共48页GeneAmp5700型核酸扩增荧光检测仪操作及分析程序1 目：使GeneAmp5700型核酸扩增荧光检测仪可以对的和正常使用，保证扩增及成果分析原则化、规范化。2 合用范畴：GeneAmp5700型核酸扩增荧光检测仪。3 操作人：刘某某胡某某陈某某4 操作程序4.1 用法a）依次打开电脑显示屏和电脑主机电源开关，进入WindowsNT界面。b）接着打开光源检测器和PCR仪电源开关，预热5分钟。c）按需要在电脑上设定一种新运营版