食用菌制种技术（食用菌生产）

母种培养基制作制种技术

纯度高、生命力强的无公害菌种是食用菌栽培取得丰产优质的先决条件。生产无公害优质的菌种首先依靠优质的当家菌株和优良的培养设备条件，此外更需要依靠具有一定水平的食用菌知识的制种人员，而且这些人员在工作中要具有严谨的工作态度和认真细致的工作作风。食用菌菌种的种型分为固体型菌种和液体型菌种两类。固体菌种生产常采用斜面琼脂培养基和以木屑、粪草、麦粒、种木等为主要原料配制而成的不同固体基质。我国目前在大面积食用菌栽培中所用的菌种是以木屑、粪草、麦粒、种木等为基质的固体型菌种。液体菌种发酵罐液体菌种（一）菌种生产的无公害化控制

根据菌种制作过程，无公害的控制环节应当按照上海市地方推荐性标准《安全卫生优质食用菌生产技术操作规范》的要求，着重抓好以下几个方面。1．原料无害化

选用无害化的原料作为培养基。杂木屑为培养基主原料时，只要在加工过程中不混入有害的物质，如油污、石灰及会影响pH的污水等，通常就是安全的原料。若采用棉籽壳、稻草之类为培养基，应当避免过高的农药残留，必要时先把原料用水冲冼或浸泡后使用，可减少原料中农药残留量。辅料麸皮、米糠只要不霉变即可；石膏、碳酸钙之类严防假冒伪劣产品。

2．水质符合饮用水标准

食用菌的菌丝是有生命的，许多对人类有害的物质对食用菌菌丝生长同样有害；同时，许多食用菌菌丝富集有害物质如重金属等能力强，更需要基质的无害化。作为食用菌菌丝生长的水质应当符合饮用水标准，特别是直接喷到子实体上的水质更需符合饮用水标准。

3．环境无公害作为菌种生产和培养环境的无害化，不仅可以提高菌种成品率，而且避免菌种的有害物质的侵害。主要控制点是菌种制作和培养场所要距离污染源50m以上，环境要卫生，水源要干净，菌种污染物应先灭菌后再销毁或掩埋。（二）菌种的级别1.母种（一级种）是指用于繁殖培养的食用菌出发菌株。生产上使用的母种，都要经过严格的栽培试验，掌握菌株的基本生物学特性后方可投入大面积使用。母种常用玻璃试管斜面培养，这种培养方法具有观察方便、容易鉴别和易于保存的优点。木耳人工栽培蛹草菌根据我国菌政管理的相关法规，菌种生产必须使用经专门技术部门鉴定或专门作物品种审定机构审定后确认的菌株。而且一级种有限制地生产销售。

2.原种（二级种）

原种是由母种扩大培养而成的菌种。这一级菌种是为了加快食用菌繁殖速度，满足大面积栽培时生产栽培种的需要而设置。原种使用基质通常与栽培基质相同或相似，原种繁殖培养过程也是生理驯化过程。在培养时应当认真检查菌丝的纯培养程度和菌丝的长势，保持纯种培养。原种制作所用容器要求使用透明度好的玻璃瓶。3.栽培种（三级种）这是指直接用于生产栽培的菌种，多由原种扩大培养而成，常以菌瓶或菌袋作为容器。（三）菌种生产的流程食用菌的固体菌种生产与液体菌种生产的设备选型和场所要求是大不相同的。固体菌种生产也因各级菌种生产所使用基质不同而操作过程的条件和步骤也有所差异，但作为一种生产工艺流程来说是大致相同的。母种培养基原料准备单孢或多孢分离组织分离基质分离菌种纯化诱变育种杂交选育细胞融合母种培养基制作高压灭菌接种培养与检验小试筛选中试筛选确定生产出发菌株母种的扩大培养接种常压高压蒸汽灭菌原种培养基制作原种培养基原料准备菌株保藏培养与检验原种接种培养与检验栽培种常压高压蒸汽灭菌栽培中培养基制作栽培种培养基原料准备灭菌灭菌葡萄糖、豆饼粉、玉米粉、无机盐、水配制装三角瓶灭菌摇瓶培养基灭菌液体菌种3基装发酵罐3基发酵罐培养液体菌种菌种生产工艺流程

（四）培养基的制作技术

1.母种培养基的制作技术

母种培养基常用马铃薯葡萄糖琼脂培养基，配方为马铃薯（去皮）200～250g，葡萄糖20～25g，琼脂18～20g，水1000ml。马铃薯要求新鲜、无霉烂，去皮、去芽点。

1）配制步骤试管培养基配制步骤（1）按配方要求称取各种营养物质。（2）将去皮的马铃薯切块加水，用文火煮沸30分钟，过滤取滤液。（3）加入葡萄糖，并补足水量。（4）搅拌均匀，自然pH值或调节至适宜的酸碱度。（5）加入琼脂，用文火加热使之熔化，并趁热分装试管或三角瓶中，分装量为试管长度的1/5～

1/4（保藏用多些，生产用少些）。（6）塞好棉塞，使棉塞表面与试管壁紧贴，2/3在管内，1/3在管外。（7）将棉塞外端用牛皮纸包扎好，即可灭菌。2）注意事项（1）培养基分装时要使漏斗导管口深插入试管内中下部，不让培养基粘在试管口，否则容易粘在棉花塞上造成污染。（2）冬季气温寒冷，注意采用延长培养基凝固的办法，如及时分装或使用保温漏斗，漏斗下的导管不宜过长等。原种和栽培种培养基的制作2.原种和栽培种培养基的制作技术

1）原料配制按培养基配方要求称取各种成分的配料，先干拌后湿拌，注意在水中预先溶解各种可溶性配料，如糖、尿素等，然后配入干料中，注意掌握含水量。2）培养基分装图1-3原种、栽培种制作方法1.装瓶2.捣木3.装料4.压平料面5.清洗瓶口、瓶壁6.打洞7.塞棉塞8.用牛皮纸包扎（1）容器原种和栽培种常用透明度良好的750ml菌瓶，栽培种也可用直径12～17cm、厚度0.04～0.06mm的聚丙烯或低压聚乙烯塑料袋。（2）机械分装选用送料筒口径与容器口径相当的装袋（瓶）机，启动马达，将配料送入料斗，容器即可接装配料。（3）手工分装锯木屑培养基的方法装瓶时，手握瓶颈，瓶底在木屑料堆上进行装料，装料过程中要上下轻轻拍打几下，使培养基向下沉实，料装至瓶肩时，料面要用T形或L形工具压平。培养基的松紧度要以下部稍松、上部稍实为好。培养基装完后用一根尖头木棒在培养基中央钻一个通达瓶底的洞，以利通气，利于菌丝繁殖。木屑培养基装瓶结束后，把瓶子内外洗净、擦干，再塞上棉塞，包上牛皮纸。（4）粪草培养基的分装粪草培养基装入瓶中的方法和木屑培养基相似。可用手或用有弹性的竹片将粪草料塞入瓶中，压实压平，然后洗净瓶内外，再塞上棉塞，包上牛皮纸。（5）谷粒培养基的分装把浸透蒸熟的麦粒，用碳酸钙拌匀至适湿（吸走麦粒表面多余的水分）装入瓶中，上方稍加压平，并填上一层发酵过的粪草料。3.生产性栽培袋的制作技术香菇、黑木耳、毛木耳、平菇、金针菇等食用菌，都可采用袋式栽培。塑料袋包括聚丙烯或聚乙烯袋，塑料袋的规格因栽培方式而异。银耳栽培多采用12cm×50cm的长袋，两头扎紧，上表面打四个接种穴。香菇栽培多采用15～17cm×55cm，厚0.04～0.06mm的长袋，两头扎紧，一面打3个接种穴，另一面打2个接种穴。黑木耳、毛木耳、平菇、金针菇多采用17cm×35cm的短袋，接种口上套颈圈、塞棉塞。图1-4栽培袋的制作方法A.短袋套颈圈装料法

1.装料

2.颈圈

3.塞棉塞、包纸B.长袋打穴贴胶布装料法

1.装料

2.打接种穴

3.贴封胶布栽培袋的制作要求：配料前，木屑必须过筛，以免杂物刺破塑料袋。装短袋时，塑料袋底部两端的边角要用手向内压进，以利摆放。装袋培养基要求偏紧，以便能固定成形。

4.生产原种、栽培种栽培袋培养基注意事项

1)除了针叶树（松、杉、柏）和某些特殊的阔叶树（樟、木荷、楠、檫）之外，绝大多数阔叶树的木屑都可以利用。针叶树木屑经堆积发酵或用1％苛性钠或碳酸钠处理后，也可和阔叶树木屑搭配使用，柳杉、红松木屑也可以利用。2)木屑不宜过细，以免培养基太湿或通气不良，加工时渗入机油较多的木屑不宜利用。3）有异味的木屑，如苦楝、槐树、黄莲木的木屑不适直接生产食用菌的子实体。分解力强的食用菌，如香菇、黑木耳宜用硬杂木的木屑；分解力弱的食用菌如银耳，应用易分解的阔叶树的木屑；平菇、金针菇要求用含单宁少的木屑。

4）米糠、麸皮、玉米粉要求新鲜，用量可以酌情增减。气温低时可多些，气温高时宜少些，一般不低于15％，不高于25％。

培养基的灭菌培养基的灭菌灭菌是指用物理或化学方法，完全杀死器物表面或培养基内的一切微生物的过程。培养基的灭菌是实现菌种纯培养的先决条件，通常采用湿热灭菌法，包括常压蒸汽灭菌(亦称流动蒸汽灭菌)和高压蒸汽灭菌两种形式。1、灭菌设备菌种培养基多在灭菌灶或灭菌锅中进行蒸汽灭菌。现将蒸汽灭菌所需设备、适用范围见表1-4。表1-4蒸汽灭菌所需设备及其适用范围灭菌方法适用设备灭菌条件适用范围高压灭菌高压蒸汽灭菌锅126℃，1.5-2小时原种、栽培种培养基灭菌常压灭菌一次灭菌灭菌灶100℃，6-8小时栽培种、栽培菌袋培养基灭菌间歇灭菌灭菌灶100℃，1-2小时25℃，24小时，重复进行2-3次栽培种培养基灭菌栽培菌袋（瓶）培养基的灭菌手提式高压蒸汽灭菌锅2、培养基蒸汽灭菌方法1）一次性常压蒸汽灭菌灶操作步骤（1）往灭菌灶内注入八分水。（2）将培养基按层次分别放人灶内，注意棉塞朝中间，且不靠灶壁排列，以利于蒸汽流动，否则影响灭菌效果，拖长灭菌时间。（3）关闭灭菌灶门，点火加温（为缩短灭菌灶使用周期，提高灭菌灶的利用率，也可适当提前加温预热水）。（4）灶门中部温度达到100℃时计算时间，保持6～8小时，注意灶内水位变化，避免干热燃烧现象发生。（5）达到灭菌时间后停止加热，微开灶门，利用余热蒸发棉塞和容器表面水分，1～2小时后打开灶门，取出灭菌物放入预先消毒的冷却室。2）高压蒸汽灭菌锅操作步骤（1）装入灭菌培养基，注意棉塞朝内不朝壁，关闭锅门，紧固螺帽。（2）缓慢将蒸汽通入夹层预热，达到压力4.9×104帕时，打开排气阀，将冷空气排出。（3）当压力升到1．47×105帕，温度达到126℃时，控制进气量和排冷气阀门，使温度压力均恒保持1．5～2小时。（4）停止送气，使温度和压力自然降低，当压力降至4．9×104帕时，缓慢打开排气阀，使压力降到零，微开锅盖，让余热把水气蒸发。（5）打开锅盖，取出灭菌物，搬入预先消毒好的冷却室。3）手提高压灭菌锅操作步骤（1）向锅内注入水到规定刻度，注意导气管要畅通。（2）将灭菌物放入锅内，棉塞一端用牛皮纸扎牢，盖锅盖，紧固锅盖螺帽。（3）通电加热，当压力达4.9×104帕时排放冷气。（4）加热至压力1．08×105帕（琼脂培养基）或1.47×105帕（木屑、粪草培养基），调整电源电压，保持上述要求到0.5小时或1.0小时切断电源。（5）当压力降到4.9×104帕时放开排气阀，压力到零时旋开锅盖螺帽，微开15分钟左右。（6）取出灭菌物，摆成斜面或搬人预先消毒好的接种室（箱）。3、常用灭菌方法的灭菌效果检验随机取灭菌过的培养基数瓶（袋），标明记号和日期，置25℃下培养3～7天，检查菌落种类、数量和出现部位。在取样过程中要注意从灭菌容器各个部位取出，以便检查灭菌容器各部位的灭菌效果。食用菌基础知识

接种方法试管种（母种）的接种在接种箱内进行。原种（瓶装）和栽培种（瓶装或袋装）可在接种箱或接种室内进行；用来直接生产子实体的栽培袋，一般在接种室内进行。1）试管种（母种）的接种接种箱经消毒之后，就可开始接种。在进行接种操作之前，先将手洗干净，然后用2％煤酚皂液将手浸洗2分钟或用75％酒精棉球擦手。接种操作：左手拿起试管，右手拿接种针，将接种针放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后，在酒精灯火焰附近拔开试管棉塞，试管口向下倾斜，用酒精灯火焰封锁，接着把冷却后的接种针伸人斜面菌种的试管内，钩取一小块带培养基的菌种块，在菌种块出入试管口时，不要接触管壁或管口，也不要过火焰，以防烫死或烧伤菌种，迅速把菌种块移接人斜面培养基的中部，把棉塞头的四周在火焰上烧一下，然后立即将棉塞塞入试管口，塞入后将棉塞旋转一两下，使之与管壁紧贴。接种图1-5

母种移接法2）原种和栽培种（瓶装或袋装）的接种此项接种要求和操作基本与母种接种相同。注意培养基灭菌取出，待冷却后才能接种，移入接种箱前必须把瓶的外壁擦干净，按无菌操作将母种用接种针移接入瓶内，一支母种可接4～6瓶原种（图1-6）。图1-6用母种繁殖原种的方法栽培种的接种是把原种转接到相同的木屑培养基上进行扩大培养。接种时，原种表面的老菌丝或菌膜要去除后再使用。接种时，按无菌操作，用接种匙、长柄镊子或接种铲取出一块蚕豆大的原种，放入栽培种培养基中。接种工作，可单人操作，也可双人配合操作。进行单人操作时，先将原种棉塞拔出，瓶口经火焰灭菌之后，平放在筐架上，并使瓶口保持靠近火焰上部，然后进行接种。进行双人操作时，各自要有一盏酒精灯，以便进行瓶口、接种工具和棉塞灭菌。其中一人手拿菌种瓶和接种工具，另一个人手拿栽培种培养基和拔塞棉花塞，两人对接。操作时，要严格认真，动作轻捷，互相配合好。不论是单人接种或双人接种，瓶口均不能朝上，要平放或略为朝下。图1-7用原种繁殖栽培种的方法3）菌袋的接种大面积栽培时，由于菌袋数量多，多在接种室内接种。长袋培养基多数采用在灭菌之前先打穴，香菇袋按一面等距离打3个穴，对应的一面打2个穴，打好穴之后，每个穴都用事先准备好的边长3.4cm方形胶布封口。为了避免胶布硬化，培养基灭菌之后，应趁热搬到消毒过的接种室中冷却，不宜放在锅内冷却，待袋温降至30℃以下方可接种。生产接种生长中菇蕾及子实体食用菌的长势一般一个接种工具配备4人，分别进行传袋、开口与贴封、接种、排放等流水作业。注意室内接种，采用甲醛熏蒸，必须排除有毒气体后方可进行接种。为了减轻人体的药物反应，室内可按每立方米空间，用25％～30％氨水溶液50毫升或用碳酸氢氨30克熏蒸，清除甲醛臭味后，再进行接种。过氧乙酸是一种新型消毒剂，用于无菌室（箱）消毒时，药效优于甲醛熏蒸法，没有刺激性气味，兼有使用方便、安全、有效、经济的特点。

（七）培养条件的控制菌种培养条件的控制主要依食用菌的生理要求而定，各种食用菌对外界环境条件的不同要求，决定培养条件有所不同。菌种培养条件的控制主要是温度、湿度、空气、光线的控制。

1、温度控制温度控制是菌种培养中最重要的措施。各种食用菌的每一品种对温度要求不同。在菌种培养中最关键的是冬季的升温保温和夏季的降温控制。

1）升温（1）常用升温方法目前在菌种培养室常用电炉