石蜡包埋组织检验前过程的规范+第1部分分离rnagbt+42216.1-2022详细解读

《分子体外诊断检验福尔马林固定及石蜡包埋组织检验前过程的规范第1部分：分离rnagb/t42216.1-2022》详细解读contents目录1范围2规范性引用文件3术语和定义4通则5实验室外部5.1标本采集5.2运送要求6实验室内部contents目录6.1关于标本接收的信息6.2标本/样品的福尔马林固定6.3标本的病理学评估和样品的选择6.4冷冻样品的固定6.5脱钙6.6处理及石蜡包埋6.7贮存要求6.8RNA的分离contents目录6.9分离RNA的数量和质量评估6.10RNA的贮存附录A(资料性)基于RT-qPCR对从福尔马林固定和石蜡包埋(FFPE)组织样品分离的RNA进行质量控制参考文献011范围本标准规定了使用福尔马林固定及石蜡包埋组织进行体外诊断检验前过程的术语和定义、检验前过程要求、质量控制和样本处理。本标准适用于从福尔马林固定及石蜡包埋组织中提取的RNA，用于后续分子体外诊断检验。本标准提供了关于如何规范操作福尔马林固定及石蜡包埋组织样本的详细指南，以确保诊断结果的准确性和可靠性。本标准规定内容医疗机构、第三方检测实验室和科研机构等组织，在进行福尔马林固定及石蜡包埋组织样本的分子体外诊断检验前，应遵循本标准的规范。体外诊断试剂生产商可参考本标准，为其产品提供适当的检验前过程规范，以确保产品的性能得到充分发挥。相关监管部门在评估和管理福尔马林固定及石蜡包埋组织样本的分子体外诊断检验时，可将本标准作为参考依据。本标准适用对象022规范性引用文件引用文件的目的确保标准的一致性和准确性通过引用其他规范性文件，可以确保本标准的内容与其他相关标准保持一致，避免因信息不一致而导致的误解或混淆。提供补充和支撑引用文件可以为本标准提供必要的补充和支撑信息，使读者能够更全面地了解标准的制定背景、技术要求和实施方法等。国家标准01本标准引用了多个国家标准，包括但不限于《分子诊断检验实验室建设与管理指南》、《医疗器械生物学评价和审查指南》等，这些标准为本标准的制定提供了重要的参考依据。行业标准02除国家标准外，本标准还引用了相关的行业标准，如《医学检验实验室基本标准和管理规范》等，这些标准对医学检验实验室的建设、管理和操作等方面进行了详细规定。国际标准03为了与国际接轨，提高本标准的国际认可度，本标准还引用了部分国际标准，如ISO系列标准等，这些标准为全球范围内相关领域的操作和管理提供了统一指导。引用文件的内容针对特定领域本标准所引用的文件大多针对医学检验、分子诊断等特定领域，具有较强的专业性和适用性，能够为本标准的实施提供有力支持。适时更新与修订随着科技的不断进步和行业标准的更新，本标准所引用的文件也将适时进行更新与修订，以确保其始终与行业发展保持同步。引用文件的适用性033术语和定义福尔马林固定是指使用福尔马林溶液对组织进行固定的过程，以保持其形态和结构。福尔马林固定能够防止组织自溶和腐败，同时使组织硬化，便于后续的切片和染色操作。定义作用福尔马林固定石蜡包埋是指将固定后的组织浸入石蜡中，使其被石蜡所包围，从而形成一个固态的组织块。石蜡包埋能够保护组织免受外界环境的损害，同时为后续的切片提供稳定的支撑。石蜡包埋作用定义RNA分离是指从生物样本中提取出RNA分子的过程。定义RNA分离是分子体外诊断检验的关键步骤之一，高质量的RNA对于后续的基因检测、表达分析等至关重要。重要性RNA分离本部分规范详细阐述了福尔马林固定及石蜡包埋组织的检验前过程，包括组织的采集、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片等步骤的操作要求。规范强调了各步骤中的关键控制点，如固定的时间、温度、pH值等，以确保组织处理的质量和稳定性。同时，规范还提供了相应的质量控制方法和评估指标，以便实验室能够自行监控和改进操作流程。规范要求044通则福尔马林固定使用福尔马林作为交联剂，将组织中的蛋白质和多肽固定下来，以保持其原始形态和结构。石蜡包埋将固定后的组织浸入石蜡中，使其完全被石蜡所包围，以便后续的切片和染色操作。RNA分离从福尔马林固定及石蜡包埋的组织中提取RNA分子的过程。术语和定义0102规范性引用文件引用文件包括但不限于试剂的配制、仪器的使用、实验室安全等方面的规定。本标准引用了国内外相关文献和研究成果，确保标准的科学性和先进性。检验前过程包括样本的采集、接收、处理、保存和运输等环节。01检验前过程概述样本的采集应遵循无菌操作原则，避免污染和损伤。02接收样本时应进行严格的核对和登记，确保样本信息的准确性。03处理样本时应根据具体的实验要求进行操作，包括去除多余组织、修剪、切片等。04样本的保存和运输应满足特定的条件，以确保样本的完整性和稳定性。05010204检验前过程的质量控制实验室应建立完善的质量控制体系，确保检验前过程的准确性和可靠性。定期对实验仪器进行校准和维护，确保其处于良好的工作状态。对实验人员进行严格的培训和考核，提高其专业技能和素质水平。实施定期的室内质控和室间质评，评估检验前过程的稳定性和准确性。03055实验室外部实验室应建立明确的样本接收程序，确保样本的完整性和可追溯性。接收时应检查样本的标识、数量、状态等，并记录相关信息。样本接收为确保样本在整个检验过程中的可追溯性，实验室需对每份样本进行唯一性标识。标识应包括患者信息、样本类型、采集时间等关键数据。样本标识5.1样本接收与标识样本运输实验室应制定安全的样本运输规范，确保样本在运输过程中不受污染或损坏。运输过程中应注意温度控制、防震防漏等措施。样本储存实验室需建立合理的样本储存制度，明确各类样本的储存条件和期限。储存区域应保持整洁、有序，并定期进行环境监测。5.2样本运输与储存样本处理实验室应根据具体检验需求，对接收的样本进行适当处理，如固定、切片、染色等。处理过程应遵循标准操作程序，确保样本质量。样本准备在样本进行分子体外诊断检验前，实验室应进行必要的样本准备，包括核酸提取、纯化等步骤。准备过程中应注意防止交叉污染和样本降解。5.3样本处理与准备实验室应与其他相关部门或机构建立有效的沟通机制，及时传递样本信息、检验结果等。沟通内容应准确、完整，并符合相关法律法规要求。外部沟通实验室应建立完善的记录管理制度，确保所有与样本处理、检验相关的活动都有详细记录。记录应保存完整、易于查询，并定期进行审核和归档。记录管理5.4外部沟通与记录065.1标本采集采集工具准备确保采集工具如手术刀、剪刀、镊子等经过严格消毒，避免交叉污染。患者准备向患者详细解释采集目的、方法和注意事项，获取其同意并签署知情同意书。采集环境准备确保采集环境符合无菌操作要求，减少外界因素对标本的影响。采集前准备03采集方法采用适当的采集方法，如切除、穿刺或钳取等，以获取满足检验要求的组织标本。01采集时机根据临床需求和患者情况，选择适当的采集时机，如手术前、手术后或治疗过程中。02采集部位根据疾病类型和诊断需要，确定具体的采集部位，确保标本的代表性和可靠性。采集过程123对采集的标本进行准确标识，包括患者信息、采集时间和部位等，确保标本的可追溯性。标本标识根据检验需求，选择适当的保存方法和条件，如低温保存或添加保存液等，以保持标本的完整性和稳定性。标本保存确保标本在运输过程中得到妥善保护，避免损坏或污染，及时送达检验实验室进行后续处理。标本运输采集后处理075.2运送要求在运送前，应确保样本的标识信息完整无误，包括患者姓名、样本类型、采集时间等，以便后续追踪和识别。确认样本标识完整检查样本容器是否密封完好，无渗漏现象，确保样本在运送过程中不会受到污染或损坏。检查样本容器根据样本的特性和运送距离，选择合适的运送工具，如专用冷藏箱、冰袋等，以保持样本在规定的温度范围内。准备运送工具5.2.1运送前准备避免剧烈震动在运送过程中，应尽量避免剧烈震动，以减少对样本的潜在损伤。监控运送时间记录样本的运送起始时间和到达时间，确保样本在规定的时间内送达检测实验室。严格控制温度福尔马林固定及石蜡包埋组织对温度敏感，运送过程中应确保温度控制在规定范围内，避免组织受损。5.2.2运送过程要求5.2.3运送后处理样本接收确认在样本送达检测实验室后，应进行接收确认，核对样本数量、标识等信息是否与运送前一致。运送记录保存保存完整的运送记录，包括运送人员、运送工具、温度监控数据等，以备后续查询和追溯。086实验室内部通风与排气系统实验室应配备有效的通风和排气系统，确保空气流通，及时排除有害气体和微生物。安全设施实验室应安装必要的安全设施，如生物安全柜、应急照明、灭火器等，确保实验过程的安全性。实验室布局应合理划分区域，包括样本接收区、试剂储存区、实验操作区等，确保各区域功能明确，避免交叉污染。实验室设计与设施人员资质实验室人员应穿戴符合规定的防护用品，如实验服、手套、口罩等，确保个人安全。人员防护管理制度实验室应建立完善的管理制度，包括实验记录、样本保存、废弃物处理等，确保实验过程的可追溯性和规范性。实验室工作人员应具备相应的专业背景和技能，经过培训并考核合格后方可上岗。实验室人员与管理实验室环境与设备环境控制实验室应保持适宜的温度、湿度和光照条件，确保实验结果的准确性和稳定性。设备配置实验室应配备必要的仪器设备，如离心机、显微镜、分光光度计等，满足实验需求并保持设备的良好状态。设备维护与校准定期对实验设备进行维护保养和校准，确保设备的准确性和可靠性。

实验室安全与应急处理化学品管理实验室应建立严格的化学品管理制度，确保化学品的储存、使用和处理符合安全要求。生物安全管理针对可能涉及的生物样本，实验室应采取相应的生物安全措施，防止生物危害的发生。应急处理预案实验室应制定应急处理预案，包括火灾、化学泄漏、生物样本泄露等突发事件的应对措施，确保人员和环境的安全。096.1关于标本接收的信息03实验室应设立专门的标本接收区域，该区域应符合生物安全要求，避免交叉污染。01实验室应建立完善的标本接收流程，包括接收时间、地点、人员等要素，确保流程的顺畅进行。02接收人员需熟悉标本类型、保存要求及运输过程中的注意事项，以保证标本质量。标本接收前的准备123接收人员应对送达的标本进行仔细验收，检查标本容器是否完整、标识是否清晰、数量是否与送检单相符等。验收合格的标本应及时进行登记，记录内容包括患者信息、标本类型、送检时间等关键数据，便于后续追踪与查询。对于不符合接收要求的标本，应予以拒收，并详细记录拒收原因，及时与送检方沟通。标本的验收与登记接收后的标本应按规定条件进行储存，如温度、湿度等环境因素需严格控制，以确保标本的稳定性。实验室应建立标本保管制度，明确保管期限与处置方式，防止标本的误用或遗失。对于具有特殊保存要求的标本，如需低温保存或添加特定保存液等，接收人员应特别予以关注并执行相应操作。标本的储存与保管106.2标本/样品的福尔马林固定保存组织形态福尔马林能够迅速穿透组织，使蛋白质凝固，从而保持组织的原始形态结构不变。防止组织自溶和腐败通过固定作用，福尔马林能够有效防止组织自溶和腐败，确保后续检测的准确性。便于长期保存经过福尔马林固定的组织可以长期保存，便于后续回顾性研究和教学使用。福尔马林固定的目的在采集标本时，应避免过度牵拉或挤压组织。修剪时，应去除多余的组织，保留病变区域及周围正常组织。标本的采集与修剪根据标本的类型和大小，配制适当浓度的福尔马林固定液。将修剪后的标本放入固定液中，确保标本完全浸没。固定液的配制与使用固定时间应根据组织类型、大小以及固定液的浓度等因素进行调整。固定时间过短可能导致组织形态保存不佳，过长则可能影响后续检测。固定时间的控制福尔马林固定的操作步骤安全防护福尔马林具有刺激性和毒性，操作时应佩戴防护眼镜、手套等个人防护装备，并确保通风良好。固定液的更换与保存定期更换固定液，以确保其有效性。废弃的固定液应按照相关规定进行妥善处理。组织的处理与保存经过固定的组织应妥善保存，避免受到污染或损坏。如需长期保存，应定期进行质量检查并做好记录。福尔马林固定的注意事项116.3标本的病理学评估和样品的选择确定病变性质与程度病理学评估能够明确病变的良恶性、分化程度以及浸润范围，为后续的体外诊断提供关键信息。指导样品选择通过对标本的全面评估，可以选择最具代表性的样品区域进行分子检测，提高诊断的准确性。评估预后与治疗效果病理学评估结果有助于预测患者的预后情况，并为治疗方案的制定和调整提供依据。病理学评估的重要性所选样品应能代表整个病变区域，避免选择坏死、纤维化或炎症等非代表性区域。代表性原则根据具体检测需求，合理选择样品的数量和大小，并确保样品在处理、保存和运输过程中不受污染或降解。数量与质量控制在选择样品时，应严格遵循国家或行业相关标准和规范，以确保检测结果的可靠性和准确性。遵循相关规范样品选择的注意事项126.4冷冻样品的固定低温固定在冷冻状态下直接进行样品的固定，通常采用特定的低温固定液，以保持样品的原始结构和形态。冷冻切片固定将冷冻样品切成薄片后，使用适当的固定剂进行固定，以便后续的染色和观察。固定方法固定剂选择甲醇是一种常用的冷冻样品固定剂，它能够迅速穿透细胞并固定其结构，同时减少冰晶的形成。甲醇固定乙醇固定适用于某些特定的冷冻样品，其固定效果较好，但需注意乙醇的浓度和使用时间。乙醇固定保持样品完整性在固定过程中，应尽量避免样品的破损或变形，以保证后续分析的准确性。避免过度固定过度固定可能导致样品结构的破坏和信息的丢失，因此需严格控制固定时间和固定剂的浓度。固定后处理固定完成后，需对样品进行适当的清洗和脱水处理，以去除多余的固定剂和杂质，为后续的染色和观察做好准备。固定注意事项136.5脱钙去除组织中的钙质，以便于后续的切片和染色操作。提高组织切片的质量和可观察性，确保诊断的准确性。为分子生物学检测提供适宜的样本处理条件。脱钙的目的采用酸性溶液（如硝酸、盐酸等）进行脱钙，通过钙离子与酸根离子结合形成可溶性盐类而去除。常规脱钙法螯合剂脱钙法电解脱钙法利用螯合剂（如EDTA等）与钙离子形成稳定的络合物，从而去除组织中的钙质。通过电解作用，使组织中的钙质在电场作用下溶解并去除。030201脱钙的方法脱钙的注意事项根据组织的类型和钙化程度选择合适的脱钙方法和条件。脱钙过程中应注意安全防护，避免接触和吸入有害化学物质。脱钙过程中应确保组织的完整性，避免过度脱钙导致组织结构的破坏。脱钙后应充分冲洗组织，以去除残留的脱钙剂和其他杂质。03建立完善的脱钙操作规范和记录制度，以便追溯和质量控制。01定期对脱钙试剂进行质量检测和更换，确保其有效性和稳定性。02对脱钙后的组织进行质量评估，包括切片的完整性、染色效果等。脱钙的质量控制146.6处理及石蜡包埋通过一系列处理步骤，确保组织在包埋前保持其原有的形态结构，便于后续的切片和观察。保持组织形态处理过程中使用的化学试剂能够有效防止组织腐败，延长样本的保存时间。防止组织腐败适当的组织处理能够使组织更加均匀地渗透石蜡，从而提高切片的质量和稳定性。提高切片质量组织处理的必要性使用适当的固定剂（如福尔马林）将组织进行固定，以保持其形态结构并防止细胞自溶。固定通过一系列乙醇浓度梯度进行脱水，逐渐去除组织中的水分，为后续的透明和浸蜡步骤做准备。脱水利用透明剂（如二甲苯）将脱水后的组织进行透明处理，以增加光线的穿透性，便于观察组织内部结构。透明将透明后的组织浸入熔融的石蜡中，使石蜡充分渗透组织，然后将其包埋成块，以便进行切片。浸蜡与包埋组织处理的关键步骤根据实验需求和样本特点选择合适的石蜡类型，以确保切片的质量。选择合适的石蜡在包埋过程中要严格控制温度，避免石蜡过热导致组织变形或损坏。控制包埋温度整个包埋过程应在无尘、无杂质的环境中进行，以避免样本受到污染。保持环境清洁对包埋好的组织块进行标记，并详细记录相关信息，以便后续查找和使用。标记与记录石蜡包埋的注意事项156.7贮存要求123福尔马林固定组织应贮存在阴凉、干燥、通风良好的环境中，远离火源和易燃物品，以确保安全。避免阳光直射，以免影响组织的质量和保存期限。贮存区域应设有明显的安全警示标识，防止无关人员随意进入。6.7.1贮存环境03若需长期贮存，建议在容器外加装保护层，以减缓环境因素对组织的影响。01福尔马林固定组织应使用密封性良好的容器进行贮存，以防漏液和挥发。02容器外应贴有清晰的标签，标明组织名称、编号、固定日期等信息，便于识别和管理。6.7.2贮存容器与包装

6.7.3贮存期限与监测福尔马林固定组织的贮存期限应根据具体情况进行制定，一般不宜过长，以免影响后续检验结果的准确性。定期对贮存的组织进行质量检查，包括观察组织的外观、颜色等变化，以及检测固定液的有效成分含量等。如发现组织质量异常或固定液失效，应立即采取相应措施，如更换固定液、重新固定等，以确保组织的有效性。166.8RNA的分离RNA作为基因表达的直接产物，在分子诊断中具有关键作用。有效的RNA分离是后续基因表达分析、疾病标志物检测等研究的基础。RNA质量直接影响分子诊断结果的准确性和可靠性。RNA分离的重要性保证RNA的完整性在分离过程中应尽量减少RNA的降解和损伤。确保RNA的纯度去除可能干扰后续分析的杂质，如蛋白质、DNA等。提高RNA的得率优化分离条件，提高RNA的回收率。RNA分离的基本原则030201采用机械或化学方法破碎组织，释放RNA。组织破碎与匀浆RNA酶的抑制RNA的提取与纯化RNA的质量评估使用RNA酶抑制剂，防止RNA在分离过程中被降解。通过有机溶剂萃取、离心柱层析等方法提取和纯化RNA。采用紫外分光光度计、凝胶电泳等手段评估RNA的质量。RNA分离的方法与步骤严格控制实验条件确保实验环境的清洁度，避免RNA酶的污染。重视RNA的保存与运输在低温条件下保存和运输RNA，以保持其稳定性。选择合适的分离方法根据样本类型和实验需求选择合适的RNA分离方法。RNA分离的注意事项176.9分离RNA的数量和质量评估VS通过测定RNA溶液在特定波长下的吸光度，计算RNA的浓度，从而评估其数量。荧光定量法利用荧光染料与RNA结合后发出的荧光信号强度，来测定RNA的数量，该方法具有更高的灵敏度和准确性。分光光度法RNA数量评估方法完整性通过琼脂糖凝胶电泳等方法观察RNA的条带是否清晰、完整，以判断RNA是否发生降解。0102纯度通过测定RNA溶液中蛋白质、DNA等杂质的含量，来评估RNA的纯度，确保后续实验的准确性。RNA质量评估指标实验操作在RNA分离过程中，实验人员的操作熟练度和规范性也会对结果产生影响，因此需加强实验技能培训。仪器设备使用高质量的仪器设备和试剂，可以提高RNA分离的效果和质量评估的准确性。样本处理样本的采集、保存、处理等过程均可能对RNA的数量和质量产生影响，应严格按照规范操作。影响因素及注意事项186.10RNA的贮存贮存容器选择选用无RNase的微量离心管或PCR管作为贮存容器，确保RNA的完整性和纯度。避免使用普通塑料管或玻璃管，以减少RNA的吸附和降解。RNA应贮存于-80℃的超低温冰箱中，以保持其长期的稳定性。在合适的贮存条件下，RNA可保存数月至数年，但建议尽快使用以避免降解。贮存条件及期限在贮存前，应确保RNA的浓度和纯度达到要求，并进行必要的记录。避免反复冻融，以减少RNA的降解风险。贮存期间应定期对RNA进行检测，确保其质量满足后续实验需求。贮存过程中的注意事项R