动物细胞工程常用的技术手段

关于动物细胞工程常用的技术手段动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、单克隆抗体动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。提问：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养,植物体细胞杂交第2页,共45页，2024年2月25日，星期天动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。1、选材：

动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。第3页,共45页，2024年2月25日，星期天在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。2.分散成单个细胞第4页,共45页，2024年2月25日，星期天3.动物细胞生长特性：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：

培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。

第5页,共45页，2024年2月25日，星期天4.过程：第6页,共45页，2024年2月25日，星期天细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系5.如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？多数组织细胞固定在表面生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变第7页,共45页，2024年2月25日，星期天动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个细胞加培养液制成细胞悬浮液细胞株细胞系细胞增值无限传代去掉组织间蛋白动物细胞培养不能最终培养成生物体第8页,共45页，2024年2月25日，星期天动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和PH

36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、气体环境：

O2和CO2（95%空气和5%CO2）保证细胞顺利的生长增殖第9页,共45页，2024年2月25日，星期天动物细胞培养液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。与植物培养基相比其特点是：（1）液体培养基（2）含有动物血清（一）动物细胞培养动物体细胞大都生活在液体的环境第10页,共45页，2024年2月25日，星期天细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果获得细胞或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较第11页,共45页，2024年2月25日，星期天动物细胞培养应用大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）作为基因工程中的受体细胞培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据第12页,共45页，2024年2月25日，星期天二、动物体细胞核移植技术:将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植（难度高）受体细胞：MⅡ期的卵母细胞第13页,共45页，2024年2月25日，星期天卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵细胞第14页,共45页，2024年2月25日，星期天克隆动物的研究意义1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白2.改良动物品种3.治疗人类疾病，作为供体4.保护濒危动物体细胞核移植技术存在的问题：许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。第15页,共45页，2024年2月25日，星期天1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是--------------------（）

A．细胞系B．细胞株

C．原代细胞D．传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是------（）

A.动物细胞融合B.单克隆抗体

C.胚胎移植D.动物细胞培养

AD第16页,共45页，2024年2月25日，星期天3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）

A.容易产生各种变异

B．具有更强的全能性

C.取材十分方便

D．分裂增殖的能力强D第17页,共45页，2024年2月25日，星期天4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于------------------------------（）

A.培养基不同；

B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；

C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；

D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。A第18页,共45页，2024年2月25日，星期天植物体细胞杂交的意义：打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种第19页,共45页，2024年2月25日，星期天（二）动物细胞融合1.过程：诱导方式物理法化学法生物法：灭活的病毒仙台病毒紫外线丧失感染性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）第20页,共45页，2024年2月25日，星期天（二）动物细胞融合1.过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）第21页,共45页，2024年2月25日，星期天(三）单克隆抗体1.其由何种细胞产生？2.主要分布在哪里？3.如何得到抗体？提问？第22页,共45页，2024年2月25日，星期天(三）单克隆抗体抗体1。抗原动物体内刺激效应B抗原动物体内刺激效应B抗体抗原不纯抗体不纯筛选单一效应B细胞不能增值产生大量抗体2。特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏第23页,共45页，2024年2月25日，星期天(三）单克隆抗体设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖-化学性质单一、特异性强的抗体。杂种细胞第24页,共45页，2024年2月25日，星期天？

？诱导其融合的方法有哪些？抗原效应B细胞(三）单克隆抗体2.制备过程：第25页,共45页，2024年2月25日，星期天BBBB瘤瘤瘤瘤细胞融合后培养液中有几种细胞筛选杂种细胞已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增值，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获得杂种细胞。第26页,共45页，2024年2月25日，星期天主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较第27页,共45页，2024年2月25日，星期天除通过杂交瘤细胞产生单克隆抗体外，还有什么方法？第28页,共45页，2024年2月25日，星期天3.单克隆抗体的应用：①在基础理论研究中具有重要意义②在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性高、灵敏度高等优越性。③生物导弹(三）单克隆抗体第29页,共45页，2024年2月25日，星期天总结一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞灭活病毒杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势第30页,共45页，2024年2月25日，星期天多莉与“母亲”第31页,共45页，2024年2月25日，星期天卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵细胞第32页,共45页，2024年2月25日，星期天克隆动物的研究意义1.用于生物学和医学研究的实验动物2.改良动物品种3.治疗人类疾病4..保护濒危动物第33页,共45页，2024年2月25日，星期天6.世界上第一只克隆绵羊“多莉”的培育等程序如图所示。请仔细看图后回答问题：黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊卵腺细胞核重组细胞早期胚胎另一头母绵羊子宫克隆绵羊多莉ab电脉冲处理妊娠、出生⑴写出ａ、ｂ所指的细胞工程各称：ａ

ｂ

。⑵实施细胞工程ａ时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是

，判断依据：

。⑷继植物组织培养之后，克隆绵羊培育成功，证明动物细胞也具有

。⑸请举例说明克隆绵羊培育成功的实际意义：。第34页,共45页，2024年2月25日，星期天动物的胚胎移植解决某些妊娠时间长、每胎产子数量少的优良种畜的繁殖速度问题。第35页,共45页，2024年2月25日，星期天1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞

C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞A巩固练习第36页,共45页，2024年2月25日，星期天2..动物细胞融合的目的中最重要的是----------------（）A.克服远缘杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新品种D.生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段基本相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成杂种细胞AD第37页,共45页，2024年2月25日，星期天4.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是------（）A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成D第38页,共45页，2024年2月25日，星期天再见第39页,共45页，2024年2月25日，星期天（二）动物细胞融合1.过程：第40页,共45页，2024年2月25日，星期天2.动物细胞培养技术的应用（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。（3）用于检测有毒物质（2）