【丹参中丹参总酮的提取工艺探究7100字（论文）】

Ⅱ绪论概况丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎。药性苦、微寒[4]。归心肝经本中药功效具有活血化瘀、止痛、解烦、凉血、祛瘀的作用，可用于血瘀、痛经、闭经、产后腹痛、胸痛、上腹痛、胁痛、瘀伤、疼痛、疼痛、失眠等月经不调。能抗心率失常，保护以及心肌、保护人类肝细胞造成损伤并促进患者肝细胞再生利用其中脂溶性丹参酮类化学物质文化还具有抗肿瘤药物作用。丹参酮对部分真菌有较好的抗菌效果如金黄色葡萄球菌，在长期使用、抗炎、调节内分泌的过程中不易产生耐药性，对银屑病、顽固性荨麻疹、痤疮等有较好的治疗效果。其化学组成成分分析主要含醌类成分、有机酸类物质成分和脂肪酸类药物成分，总丹参酮可以包含发现丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、异隐丹参酮等10余个丹参酮通过单体，主要包括含有二萜醌类脂溶性及酚酸类以及水溶性有效成分。目前对丹参脂溶性的研究多以丹参酮ⅡA、丹参酮等脂溶性成分为基础，以丹参酮总提取量为指标。考察液料比、提取工作时间、提取不同温度对含量的影响。药理作用及作用机制丹参酮对心脑血管的作用众多研究实验结果表明丹参酮ⅡA在多种重要途径发挥着环境保护以及心肌的作用，左心室肥大肥大往往是慢性病高血压的伴随的并发症，低浓度丹参能抑制动物心脏的心肌收缩，减少系统能量资源消耗而不损伤导致心肌[5]。丹参酮IA磺酸能抑制心肌收缩力，但能轻微增强心脏的心肌收缩力[6]。阻断实验动物冠状动脉血流后，静脉注射生理盐水使对照组左心室舒张压升高，静脉注射丹参酮ⅡA使实验组左心室舒张压显著降低说明丹参酮ⅡA可能通过降低左心室壁张力和心脏体积而降低心肌耗氧量[7]。在给大鼠口服甲状腺素粉诱导甲亢过程心肌微粒体ATP酶活性降低,丹参酮Ⅱ-A磺酸钠ATP酶活性具有保护作用,可提高心肌ATP酶活性,对心肌起到保护作用[8]。采用大鼠离体工作心脏模型，在停搏液中加入丹参酮。所以丹参酮可以通过提高抗氧化能力作用研究从而达到保护以及心肌，丹参酮IA磺酸钠离体心肌动作电位时程缩短,主要为其降低慢反应电位除极速率,而对0相上升发展速率产生影响程度较小，其结合于G蛋白偶联受体,通过丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)通路信息进行分析信号系统传导使心肌组织细胞[Ca2+]显有与维拉帕米相似的Ca2+阻滞治疗作用[9]。丹参素能显著扩张实验性急性心肌梗死犬、猫、离体猫和猪的冠状动脉，增加冠状动脉血流，并能对抗吗啡、心得安的冠状动脉收缩作用。因此，丹参素被认为是扩张冠状动脉的有效成分之一。抗菌作用丹参酮ⅡB、羟基丹参酮、隐丹参酮、甲酸酯、二氢丹参酮Ｉ及总丹参酮的其他成分均具有抑菌作用，其中隐丹参酮的抑菌作用最强，主要是对革兰氏阳性菌，与金属离子配位后抑菌作用更强。中国医学科学院医学研究所发现，丹参酮对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用[10]，对溶血性链球菌也有一定的抑制作用，其中h37rv的最小抑菌浓度(mic)为1.5mg/l结核杆菌[11]。消炎作用研究进展抗炎作用进行实验教学研究结果表明,丹参酮有明显的抗炎症作用。能明显抑制组胺引起的毛细血管通透性增加；能抑制渗出性甲醛腹膜炎。明胶对小鼠的白血球有显著的抑制作用。对亚急性甲醛性关节肿有明显的抑制影响作用。棉球肉芽肿实验无抑制控制作用。研究结果表明,当健康人白细胞与丹参酮共同进行孵育1h,可使白细胞趋化性以及发生发展明显具有抑制;而对白细胞的随机选择运动无影响。若孵育时间持续19h,则5μg/L丹参酮足以使白细胞趋化性及随机运动均有明显的抑制。抗癌作用隐丹参酮中的丹参酮ⅡA具有抑癌作用;肿瘤的恶性表型是通过诱导控制，直到其逆转为正常细胞，并恢复其大部分正常功能。隐丹参酮对癌细胞的生长周期阻碍加以调控信号转导等方式抑制癌细胞的增殖加速凋零。抑制细胞增殖的作用主要是通过阻滞G0/G1期或G2/M期[12]。丹参的化学成分丹参的化学成分主要含醌类成分:丹参酮I（C18H12O3）、II、ⅡA(C13H18O3)、ⅡB、Ⅲ、V、VI，异丹参酮I、IIA、IIB,隐丹参酮，异隐丹参酮，甲基丹参酮，羟基丹参酮，丹参新酮，左旋二氢丹参酮I等;有机酸类成分:丹酚酸A、B，丹参素，原儿茶醛，原儿茶酸，迷迭香酸，琥珀酸，紫草酸单甲酯，紫草酸二甲酯，紫草酸A、B等;脂肪酸类成分:亚油酸，亚麻酸，油酸，棕榈酸[13];按照性质的不同分为脂溶性和水溶性，丹参含有脂溶性成分和水溶性成分两大部分.脂溶性成分大多为共轭醌,酮类化合物,如丹参酮I,丹参酮IIA,丹参酮IIB,隐丹参酮等.水溶性成分有丹参素,丹参酸甲,乙,丙,原儿茶酸,原儿茶醛等[1]。脂溶性化合物脂溶性成分大多为共轭醌,酮类化合物,如丹参酮I,丹参酮IIA,丹参酮IIB,隐丹参酮等[14]。其中包括丹参酮I为丹参抑菌有效进行成分问题之一，经体外研究试验，对人体型结核杆菌H37Rv菌株有较强的抑制影响作用。药理作用为性激素样作用:子宫重量法和阴道涂片法证明该晶体具有温和的雌激素样活性。精囊和前列腺重量法证明具有抗雄激素作用。治疗痤疮，脓疱性痤疮，心绞痛。丹参酮ⅡA经磺化而得的一种水溶性物质丹参酮ⅡA磺酸钠（SodiumTanshinonⅡASilateA），能增加冠脉血流量，改善缺氧后引起的心肌代谢紊乱，从而提高心肌耐缺氧的能力。还有一个显著提高保护红细胞膜的作用。对动物进行心肌梗塞有缩小梗塞区域面积的效应。在一定剂量下，还能增强心肌收缩力。丹参酮ⅡA对抗AS的形成。对低密度指蛋白引起的血管内皮细胞损伤具有保护作用。血液中胆固醇浓度明显增高，特别是对于低密度指蛋白（LDL）含量降低胆固醇浓度不断增高可引起动脉内皮细胞功能损伤，导致中国动脉粥样硬化的发生。是评价丹参酮ⅡA对LDL引起的EC损伤的影响。丹参酮ⅡA具有抗氧化作用，可防止LDL的氧化[15]，从而保护EC，维持其分泌PGL2的正常功能，抗AS形成。丹参酮I（C18H12O3）丹参酮ⅡA(C13H18O3)水溶性化合物水溶性成分有丹酚酸A、B,丹参素，原儿茶醛，原儿茶酸，迷迭香酸，琥珀酸，紫草酸单甲酯，紫草酸二甲酯，紫草酸A、B等;脂肪酸类成分:亚油酸，亚麻酸，油酸，棕榈酸。丹参总酮的提取采用正交试验的方法设计，采用乙醇提取回流法提取丹参酮，以总丹参酮作为丹参酮总量。以总丹参酮的提取量为指标。考察了液料比、提取时间、提取温度等因素对提取物含量的影响。醇提法提取总丹参醇由于丹参酮IIA易溶于甲醇，乙醇，丙酮，乙醚，苯等有机溶剂，微溶于水。，多用乙醇进行提取，包括生产乙醇通过渗滤法和回流法。①渗滤法:采用正交实验考察四个因素甲醇的浓度、药材浸泡时间、提取时间和提取温度对丹参酮提取率的影响,药材提取温度、药材浸泡时间、提取时间、甲醇浓度(70%-90%)和甲醇用量对提取率均有影响。称取10g中药丹参粉末使用高浓度(90%)的醇溶剂、加温(60-65)、浸泡时间延长(6h)可以相对的缩短提取所需的时间,获得产物丹参总酮。但是因为丹参脂溶性成分对温度及其不稳定，贮放、回收乙醇、浓缩、干燥醇提后的这五个工序是丹参酮热降解是否能降低的至关重要的因素，所以加热时间要严格控制在2-4h的范围内。②回流法:采用乙醇加热回流法，通过单因素实验和正交实验获得提取丹参酮的最佳提取条件为:丹参粉碎后过筛，乙醇浓度为75%,提取温度为65,提取时间为2h,料液比为1：8。通过正交实验确定了最佳提取溶剂倍量、回流时间和回流次数。考察实验中，由于溶剂用量在7倍以上，丹参酮IIA的提取量没有显著差异，综合考虑人规模化生产成本和资源利用率等因素，丹参酮IIA的提取以7倍溶剂为宜。本实验使用反流法研究四个因素：液体比，提取时间、萃取温度对丹参总酮提取的影响，药材不被水浸泡，直接用干药材提取，降低药材的水分含量，避免更大的实验误差，采用甲醇加热回流法，并通过单因子实验和正交实验获得最佳提取条件，用于提取丹参酮。取10g丹参切碎，放入滤纸内包裹防止药材漏出，放置于索氏提取器内加入不同浓度的甲醇溶液60%-90%浓度间区内，实际使用70%浓度的醇溶液，液料比为124毫升醇溶液浸泡2h，65度水浴加热回流提取2小时，提取次数为2次。超声提取法提取总丹参醇超声能产生空化效应、机械效应和热效应具有破碎、搅拌、释放等特殊作用[16]。它能使丹参根植物组织的空化泡在溶剂中溃灭，使组织中的细胞瞬间完成破碎。有利于溶剂渗入植物细胞，使细胞中的有效成分进入溶剂，加速相互渗透和溶解，能够显著的提高溶解度。超声提取丹参酮，称取6份10g的中药丹参粉，并加入75%工业乙醇溶液120ml在天平上进行称重记录,水温维持在不超过60。C[17]然后分别用40KHz超声波提取10、20、30、40、50、60min。本法进行具有在实验教学设备可以简单,操作的更加方便，提取无需加热、时间短，提取率高、污染少等特点，优于其他传统的醇提法，可增加药材的利用率。索氏提取法提取总丹参醇索氏提取器法利用气压差使溶剂回流虹吸，使被萃取的物质被纯溶剂萃取，因此萃取效率被提高，用天平称取丹参粉10g用滤纸包裹后不漏粉，使用粉末增加液体浸溶的面积再次提高萃取效率，横着放入索氏提取器中，然后将固定量的有机溶剂苯放入圆底烧嘴中，在水浴中加热(80-85)使苯蒸出，通过索氏提取器冷却凝结，将热苯溶液放入索氏提取器中，用药物滤纸包装浸泡，反复操作，直到索氏提取器中的热的苯溶液无色。用旋转蒸发器蒸发溶液中的苯，剩下的残留物为我们需要的总丹参酮。微波提取法提取总丹参酮微波提取是一项新兴的技术，加热升温快、能耗低、选择性好,应用于中药提取具有穿透力强、选择性高等显著特点。称取被已粉碎的丹参药材10g,加入6倍的95%的乙醇微波提取30min以上,微波功率320W进行微波，然后进行回流提取然后离心。超临界CO2萃取提取总丹参酮超临界CO2流体萃取技术是近20年来经济发展结合起来的在分离域出现的一种社会新技术，它与常规溶剂萃取的区别是选用CO2气体与待分离物质接触也就是具有一种可以称为超临界流体(SF)的物质文化代替传统有机溶剂系统作为一个萃取剂[18]。使其有选择性将物质极性、分子量、沸点等不同依次萃取出来，即在临界点附近系统的温度和压力的微小变化可以导致材料溶解度的几个数量级的突然变化。该方法具有无毒、快速、低成本、低温操作的优点。采用超临界CO2萃取法提取了总丹参酮,其中压力、温度、时间、乙醇流量等对总丹参酮提取收率的影响至关重要。10g中药丹参粉萃取压力25MPa,萃取温度40'C，萃取时间2h,乙醇流量1.0m/min,进行超临界萃取。紫外分光光度法测定总丹参酮的含量本实验研究采用不同回流法提取法进行提取总丹参酮，然后用丹参酮ⅡA作为一个对照，使用通过紫外可见分光光度计来测定总丹参酮的含量，此方法可以低成本、操作系统简单、省时、适用且可靠性强，可作为中国中药中总丹参酮含量以及测量的一种社会适应性较强的方法。仪器与对照品日本岛津UVMmini-1240分光度计，BSA电子天平（德国赛多利斯）万分之一，丹参酮ⅡA标准品（冠晨生物货号：GC-01-341），75%乙醇溶液（武汉康宁美生物科技有限公司）、甲醇(衢州巨氏试剂有限公司)、FD-2密封式恒温可调式电炉加热器(常州市金坛科兴仪器厂有限公司)、博科台式TGL-16M型高速离心机（济南千司生物有限公司）方法供试品的制备取最终提取后得到的提取液60ml或者1/2，置于250ml容量瓶中，用甲醇稀释，到距离刻度1-2cm时用胶头滴管定容，定容后上下来回摇匀;用移液管准确称量上一步溶液的4ml，置于50ml的容量瓶中，同上，在距离刻度线1-2cm时用甲醇稀释定容至刻度线，上下均匀摇动，得到供试品溶液。对照品的制备用天平精密称取丹参酮ⅡA20毫克，置于100毫升的容量瓶中，使用甲醇将其溶解并稀释到刻度线1-2cm时用胶头滴管定容后，然后上下翻转进行摇匀后得0.2毫克每毫升的对照品溶液。标准曲线的测定精密量取丹参酮ⅡA对照品的溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml,分别置于10mL的容量瓶中,加入甲醇溶解后并稀释至容量瓶刻度，于269nm的波长处分别测出其吸光度[19]。以对照品浓度X为横坐标吸光度Y为纵坐标，进行标准曲线的绘制，最后得到回归方程为y=4.955x+0.2087[20],r=0.9993(n=5)。结果表明，丹参酮IIA的浓度在0.020042-0.10021mg/mL范围内呈现出良好的线性关系。稳定性实验把上述实验的同批供试品，分别于0、1、2、3、4、5、6小时进行吸光度检测，分别为0.215、0.214、0.217、0.218、0.215、0.215、0.214，其RSD为0.7%（此组数据为纯提法中的回流法数据，其余4组RSD均在2.0%内，在6小时内均为合格），则说明这批供试品在6小时内是稳定的[21]。实验结果与讨论提取方法的选择以上实验的提取方式都进行4次重复，并于269nm处分批次分别测出其吸光度，并进行计算其提取量，并将4次结果做一平均值[23]，可得到结果如表1所示。由下表可以得知使用醇回流法提取总丹参酮ⅡA的提取效率分别高于醇渗滤法、超声提取法、微波提取法、超临界CO2萃取法这4种方法,并且醇回流法操作简单、便利，成本也相对较低，在生产中也可以进行大规模的生产，所以选择醇回流法进行丹参酮的提取[24]。表1不同提取方法下丹参酮ⅡA含有量(mg/g，n=4)提取方法1234平均值渗滤法0.9560.9940.9191.0010.968醇回流法2.652.712.662.742.69超声法1.191.521.461.721.47微波法0.9210.8940.9110.8560.900超临界CO2萃取法82.052.10正交实验结果表2正交实验因素实验表水平因素料液比温度/。C浸泡时间/h回流时间/h11:8601.01.021:10652.01.531:12701.52.0表3正交实验设计及结果实验序号（A）液料比（B）温度/。C（C）浸泡时间/h（D）回流时间/h总丹参酮含量/（mg/g）111111.831212221.962313332.101续表421231.803522311.922623121.965731321.784832132.165933211.967K11.9261.6651.8071.860K21.8591.8421.741.896K31.8421.7961.7861.935R0.0840.1840.0670.75结论由正交实验得出当提取条件有料液比、温度（加热）、浸泡时间、回流时间四个条件时，料液比为1：8时，浸泡时间为1小时回流时间2小时时，总丹参醇的含量最高，提取的总丹参醇含量达2.165mg/g；醇回流方法操作简单、便利，成本也相对较低，能够更好更快速的去适应于生产，而不必要在漫长的生产中进行漫长的适应，在生产中也可以进行大规模的生产，能够在提高产量获得相对应的经济报酬的同时也相对环保节能。

参考文献[1]丹参中总丹参酮含量测定[J].徐艳,相延英.湖北中医杂志.

2014(07)参考论文.[2]孙学刚,贾钰华,陈育鹩.定心方及丹参酮对血小板膜粘附分子表达的影响[J].山东中医药大学学报,2001,25(1):61-63[3]张由建.丹参酮注射液对急性冠脉综合征患者Tp-ec,QTd及心功能疗效观察[J].航空航天医学杂志,2013,24(06):657-659.[4]陈芬燕,郭韧,张毕奎.丹参酮ⅡA的心血管药理作用研究进展[J].中国中药杂志,2015,40(009):1649-1653.[5]买长江,乌云阁,张明堪,等.丹参酮停跳液心肌保护作用的实验研究[J].河南医学研究,1995,4(3):236-237[6]吴焕明,尹为化.丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对低氧诱导肺血管平滑肌细胞增殖的影响[J].同济医科大学学报,2001,30(2):106-108[7]邵荣姿,曾林,付兴伦,等.丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对甲亢模型鼠心肌的保护效应[J].前卫医药杂志,2000,17(2):93-94[8]赵英鹏.丹参酮ⅡA对体外人肝癌细胞的生长抑制及诱导凋亡作用的实验研究[D].中南大学,2007.[9]王加茹,徐宛婷,刘畅,孟令旗,李金钱,张翼,罗英花,金成浩.隐丹参酮抗肿瘤药理作用机制研究进展[J].药物评价研究,2018,41(06):1160-1163.[10]梁文仪,陈文静,杨光辉,等.丹参酚酸类成分研究进展[J].中国中药杂志,2016,41(5):806-812.[11]丁建刚.丹参酮ⅡA多剂型的体内筛选和体外代谢研究[D].泰山医学院,2009.[12]朱