药品微生物实验室管理

药品微生物试验室------质量管理.06药品微生物实验室管理第1页微生物类别类别细菌真菌霉菌及酵母菌病毒原生动物藻类药品微生物实验室管理第2页

特点：体积小、结构简单、分布广、种类(10~20万种)、繁殖快、易变异。特点体积小结构简单分布广种类多繁殖快易变异△微生物概述药品微生物实验室管理第3页芽孢：微生物所需营养物质水分PH值温度空气碳源氮源微量元素营养物质蛋白质受热不易变性

（耐热）含水量少细菌休眠体芽孢（孢子）药品微生物实验室管理第4页△药品中微生物主要污染路径1.水系统（饮用水、纯化水、注射用水、纯蒸汽）：过滤净化后检测微生物、细菌内毒素。2.原辅料：植物性、动物性（风险最大）；版药典中药饮片增加耐热菌、沙门菌。3.包装材料：安瓿、PVC、PTP、塑料瓶。检测微生物4.药品微生物实验室管理第5页△药品中微生物主要污染路径4.生产人员（最不可控原因）：咳嗽、喷嚏、动作幅度大、皮肤掉屑；测手指、洁净服。5.气体：压缩空气、惰性气体；控制微生物或无菌。6.生产环境：洁净区密封、空气过滤、定时消毒；测沉降菌、浮游菌、悬浮粒子（A、B、C、D级）。验证和日常监测7.设备及配件：清洁、消毒、灭菌；清洁验证药品微生物实验室管理第6页△影响药品微生物检验结果原因1.样品中微生物可能分布不均匀。2.微生物检验方法误差大。3.检验方法未经过验证。4.

实验室原因：人员、培养基、试剂、菌种、环境、设备、样品。药品微生物实验室管理第7页△人员要求1.操作人员具备微生物学或相近专业知识教育背景。2.培训：职责培训、岗位操作规程培训、设备操作培训、检验技术培训（包含无菌操作、培养基制备、消毒、灭菌、注平板、菌落计数、菌种传代、菌种保藏、微生物检验方法、微生物判定基本技术）。3.试验室安全方面培训（确保本身安全、预防试验室被污染）。4.对微生物管理人员培训：试验室安全、试验室结果评定、数据偏差调查。药品微生物实验室管理第8页△培养基管理※培养基影响微生物试验结果原因1.供给商：稳定、资质合格、业内口碑好、供货能力强。2.培养基接收2.1查看培养基名称、批号、厂家、生产日期、使用期、执行标准是否符合要求。2.2在每瓶培养基瓶上贴标签、编号（唯一标识）、批号、接收日期、接收人、开瓶日期、开瓶后使用期。2.3培养基接收统计。3.培养基储存

按照供给商提供方法保留，多数是避光，个别厂家要求阴凉干燥（低于20℃）。药品微生物实验室管理第9页△培养基管理4.培养基适用性检验（药典要求）4.1假如培养基配制和灭菌程序经过验证，那么同一批脱水培养基适用性检验可只做1次。4.2假如培养基配制和灭菌程序未经过验证，那么每一批灭菌培养基均要进行适用性检验。

※培养基配制和灭菌方法验证（存放期）包含：灭菌前后PH值、外观性状；灭菌后无菌性检验、灵敏度检验；保留几周后无菌、灵敏度检验。

药品微生物实验室管理第10页△培养基管理4.3适用性检验※购置对照培养基※购置菌种枯草、白念、黑曲霉接种于计数用培养基金葡、铜绿、枯草、生孢、白念、黑曲霉接种于无菌检验用培养基※依据药典附录1105试验操作后判断是否合格。以下是三种培养基适用性检验要求（计数用培养基、无菌检验用培养基、选择性培养基）药品微生物实验室管理第11页计数用培养基适用性检验要求计数用培养基非选择性固体培养基非选择性液体培养基a被检培养基菌落数，对照培养基菌落数，在0.5~2之间b菌落形态大小与对照培养基上菌落一致c倒5块平板，培养温度与实际操作一致培养最长时间应无菌生长a被检液体培养基管与对照培养基管比较试验菌应生长良好b取最小包装2瓶放在实际利用中温度培养最长时间药品微生物实验室管理第12页无菌检验用培养基适用性检验要求无菌检验用培养基无菌性检验灵敏度检验每批取不少于5瓶培养，应无菌生长空白对照管无菌生长加菌培养基管生长良好药品微生物实验室管理第13页选择性培养基适用性检验要求选择性培养基（控制菌检验用）促生长能力测试抑制生长能力测试指示特征固体：被检培养基与对照培养基上生长菌落大小、形态一致接种试验菌不得生长被检培养基上试验菌生长菌落大小、形态特征、指示剂反应与对照培养基一致液体：要求温度、最短培养时间、与对照培养基管比较、被检管试验菌生长良好药品微生物实验室管理第14页用于环境监控培养基管理①市售：双层包装和终端灭菌②假如不能采取终端灭菌培养基，在使用前进行100﹪预培养，预防出现假阳性。

沉降菌碟暴露时间验证

△选择在换气次数大需要监控操作间，培养基加菌暴露若干小时,培养后计算菌回收率大于70﹪。

△暴露多长时间不干裂、促生长能力良好）。①包装形式：试管、三角瓶（密封）②贮存房间条件③取样计划：取样时间点、测试项目（PH值、无菌、适用性）※加菌液0.1ml，不能加1ml。药品微生物实验室管理第15页△菌种管理

菌种起源CMCC中国复活标准贮备菌株（0代）解冻转种工作菌株

（低温冷冻干燥）（不得重新冷冻）TACC美国1代：是指将活培养物接种到微生物生长新鲜培养基中培养。※工作菌株不可替换标准菌株药品微生物实验室管理第16页△菌种管理包括菌种管理统计标准菌种申购统计。从标准菌株到工作菌株操作SOP及统计。菌种传代统计。菌种检验统计（确认统计）。菌种灭活、销毁统计。药品微生物实验室管理第17页△菌种管理菌种接收1.检验外观是否完好。2.查对菌种名称、编号。3.查对接收时是否在适当环境中。4.查对菌种是否在使用期范围内。5.给每株菌一个独立编号，不能重复。药品微生物实验室管理第18页△菌种管理菌种保留1.标准菌株：超低温冷冻（低于-30℃）使用期一年；（-70℃以下冷冻保藏）使用期三年。2.斜面菌种：2~8℃冷藏，使用期3~6个月。3.菌液：室温下，2小时内使用。2~8℃，24小时内使用（黑曲霉孢子悬液2~8℃，贮存期要验证）药品微生物实验室管理第19页△菌种管理菌种使用------斜面菌种只允许一次使用菌种传代1.将微生物转接到新培养基，进行培养取得新鲜菌种过程。2.购置标准菌株必须经过传代后使用（在5代以内）。药品微生物实验室管理第20页环境管理硬件：阳性菌试验室、培养室、贮藏室（区）、试验结果观察区、培养基及试验用具准备区、灭菌区、样品接收区、标准菌株贮藏室（区）、污染物处理区。※以上区域要有标识（降低交叉污染）。※

无菌检验：B级背景下A级单向流洁净区域或隔离系统。

※

微生物程度检验：不低于D级背景下B级单向流空气区域。药品微生物实验室管理第21页△环境监测1.空调验证：高效过滤器完整性、气流组织、空气流速（平均风速）、换气次数、压差、温度和相对湿度（测试应在模拟正常检测条件下进行）

※

依据药典附录9205药品洁净试验室微生物监测和控制指导标准2.日常监测：※异常情况要进行分析，不但仅是数数而已。区域周期粒子沉降菌浮游菌表面微生物（含手套）无菌隔离系统每次试验三月每次三月每次A级每次试验三月每次每个月每次（洁净服）B级每七天一次六个月每七天三月每七天（洁净服）C级每季一次六个月三月六个月三月D级每六个月一次六个月六个月六个月六个月监测项目药品微生物实验室管理第22页△洁净区灭菌和消毒※A/B级洁净区使用无菌或经无菌处理消毒剂或清洁剂。※化学消毒剂应验证消毒效果（不止一个）。※清洁剂、消毒剂在要求效期内使用。※惯用灭菌法干热灭菌法：火焰法（酒精灯）、烘箱250℃1h。

湿热灭菌法：121℃30min。药品微生物实验室管理第23页△设备设施管理1.设备确实认、检定（校准）每年一次，注意连续性。2.设备使用日志（使用即填）3.设备定时清洁和消毒（水浴锅、培养箱、冰箱、生物安全柜）。4.无菌器具要有明确标识（已灭菌、未灭菌）。5.温度计校准。（注意量程、精度）6.天平、标准砝码校准；移液管校准。7.悬浮粒子计数器、浮游菌采集器校准。8.紫外灯消毒效果定时检测。药品微生物实验室管理第24页△操作方法注意1.操作SOP中明确检验方法要经过方法学验证，而且和验证方案汇报、省药检所方法学复核意见中描述一致2.操作方法应防止损伤供试品中污染微生物。3.对抑菌性较强供试品，尽可能选取薄