医学微生物实验专家讲座

第五次试验课内容1、细菌代谢产物检验，数码判定（示教）2、肠道杆菌在选择判别培养基生长情况（示教）

EMB、SS平板、双糖铁培养基、半固体培养基3、肥达试验（结果示教）4、肉汤增菌结果血平板接种（操作，每组一份）5、病例二讨论医学微生物实验专家讲座第1页原理：染色镜检普通琼脂平板中菌落形态不能判别能够判别试验一细菌代谢产物检验，数码判定细菌代谢产物分解代谢产物合成代谢产物生化反应?医学微生物实验专家讲座第2页细菌菌落色素观察金黄色葡萄球菌：产生只局限于菌落脂溶性金黄色色素。铜绿假单胞菌：产生带荧光水溶性色素，该色素可扩散至菌落周围，使培养基呈亮绿色。金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌医学微生物实验专家讲座第3页细菌菌落溶血现象观察乙型溶血性链球菌:透明无色溶血环。SLOorSLS？医学微生物实验专家讲座第4页一、糖发酵试验原理：不一样细菌分解糖类能力和分解代谢产物不一样应用：惯用于肠道细菌判定医学微生物实验专家讲座第5页结果判定培养基变红色阳性，记为+

培养基变红色，试管内有气泡阳性，记为+

指示剂不变色阴性，记为-葡萄糖乳糖伤寒沙门菌糖发酵试验大肠埃希菌糖发酵试验痢疾志贺菌糖发酵试验副伤寒沙门菌糖发酵试验糖发酵试验医学微生物实验专家讲座第6页IMViC是吲哚（indole）、甲基红（methylredtest）、V-P（Voges-Prokauertest）和枸橼酸盐利用（citratetest）四个试验缩写，用于快速判别大肠杆菌和产气杆菌（卫生细菌学检验）细菌代谢产物检验，数码判定医学微生物实验专家讲座第7页二、靛基质（吲哚）产生试验(I)原理：分解蛋白胨内色氨酸形成靛基质（无色）靛基质与靛基质试剂中对二甲基氨基苯甲醛结合而显红色(玫瑰吲哚)材料：蛋白胨水培养基（氯化钠、蛋白胨、蒸馏水）医学微生物实验专家讲座第8页方法：约0.3ml靛基质试剂渐渐加入细菌蛋白胨水培养物注：加入吲哚试剂后切勿摇摆结果：大肠埃希菌(﹢)红色产气杆菌(﹣)黄色红色吲哚大肠杆菌产气杆菌医学微生物实验专家讲座第9页葡萄糖丙酮酸甲酸、乙酸、乳酸pH<4.5甲基红指示剂培养基呈红色（+）乙酰甲基甲醇（中性）pH>5.4培养基呈橘黄色（-）脱羧大肠埃希菌和产气杆菌都能发酵葡萄糖，产酸产气……产气杆菌能使丙酮酸脱羧大肠杆菌三、甲基红试验（M）医学微生物实验专家讲座第10页材料：葡萄糖蛋白胨水（葡萄糖、蛋白胨、K2HPO4、蒸馏水）方法：结果：大肠埃希菌，红色——＋产气杆菌，黄色——

－医学微生物实验专家讲座第11页葡萄糖丙酮酸甲酸、乙酸、乳酸乙酰甲基甲醇红色化合物（+）脱羧四、VP试验（Vi）大肠埃希菌和产气杆菌都能发酵葡萄糖，产酸产气……产气杆菌能使丙酮酸脱羧大肠杆菌在碱性溶液中被氧化VP试剂（李氏试剂）不能反应（-）反应30min二乙酰+精氨酸胍基医学微生物实验专家讲座第12页材料：葡萄糖蛋白胨水李氏试剂（硫酸铜、浓氨水、NaOH、蒸馏水）方法：暴露于空气中结果:大肠埃希菌，不出现红色（﹣）产气杆菌，红色（﹢）大肠杆菌产气杆菌医学微生物实验专家讲座第13页五、枸橼酸盐利用试验（C）枸橼酸盐铵盐碳酸盐氨培养基pH下降溴麝香草酚蓝呈碱性变色培养基变蓝培养基产气杆菌能利用铵盐作为唯一氮源，利用枸橼酸盐作为唯一碳源医学微生物实验专家讲座第14页材料：枸橼酸盐培养基（枸橼酸钠、NH4H2PO4、MgSO4、K2HPO4、NaCl、琼脂、蒸馏水、0.5%溴麝香草酚兰酒精溶液）方法：结果：大肠埃希菌，绿色（﹣）产气杆菌，深蓝色（﹢）产气杆菌大肠杆菌有没有菌落？医学微生物实验专家讲座第15页用于肠杆菌科属间判别大肠杆菌产气杆菌

IMViC试验总结医学微生物实验专家讲座第16页

分解六、硫化氢产生试验原理：材料：醋酸铅培养基（普通琼脂培养基、硫代硫酸钠溶液、醋酸铅溶液）含硫氨基酸硫化氢遇铅盐或亚铁盐黑褐色沉淀医学微生物实验专家讲座第17页方法：结果：变形杆菌，黑褐色——＋大肠埃希菌，不变色——－

变形杆菌大肠杆菌医学微生物实验专家讲座第18页对蛋白质发酵吲哚试验硫化氢试验对糖发酵糖发酵试验甲基红试验VP试验其它枸橼酸盐利用试验医学微生物实验专家讲座第19页

试验原理该试剂条是由20个含干燥底物小管所组成，用细菌悬浮液接种。培养一定时间后，经过代谢作用产生颜色改变，或在培养后加入试剂后变色而观察结果。肠道杆菌数码判定（API20E）医学微生物实验专家讲座第20页判读结果：每三项为一组，每组分值为124分）将阳性反应分值相加，得出数据编码，从API20E编码手册中查细菌名称。

数码判定（API20E）医学微生物实验专家讲座第21页（21）半固体培养基(动力试验)

大肠埃希菌

志贺菌伤寒沙门菌医学微生物实验专家讲座第22页材料：1、EMB培养基、SS琼脂平板、双糖铁培养基2、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、志贺菌选择培养基肠道杆菌在选择判别培养基生长情况判别培养基医学微生物实验专家讲座第23页

伊红美蓝培养基（EMB）EMB平板基质肉汤基础培养基抑制物伊红、美蓝底物乳糖指示剂伊红、美蓝碱性无色半透明菌落酸性→紫黑色或紫红色，且有金属光泽菌落持点＋为紫黑色或紫红色菌落－为无色半透明菌落抑制作用抑制G＋菌用途分离沙门菌和志贺菌属弱选择培养基医学微生物实验专家讲座第24页原理：（EMB平板)非致病菌：致病菌：美蓝

分解乳糖伊红结合紫黑色或紫红色化合物不分解乳糖，菌落呈无色、半透明。其它类似培养基？医学微生物实验专家讲座第25页SS培养基（SalmonellaShigellaAgarMedium）SS平板基质肉汤基础培养基抑制物胆盐、煌绿、枸橼酸钠、硫代硫酸钠底物乳糖指示剂中性红pH（6.8—8.0）碱性→黄色酸性→红色菌落持点＋为粉红色菌落－为无色半透明菌落抑制作用抑制大肠杆菌及G＋菌用途分离沙门菌和志贺菌属强选择培养基医学微生物实验专家讲座第26页原理：（SS平板）非致病菌：致病菌：胆盐

分解乳糖乳酸胆酸中心浑浊粉红色菌落不分解乳糖，菌落呈透明无色；枸橼酸铁能指示硫化氢产生，使菌落中心呈黑色注意：非致病菌并非被杀灭，故挑病原菌菌落时，尽可能挑取菌落中心部分医学微生物实验专家讲座第27页大肠埃希菌痢疾志贺菌大肠埃希菌与伤寒沙门菌医学微生物实验专家讲座第28页双糖铁培养基（DoublesugarIronMedium）成份含酚红指示剂pH7.6蛋白胨水500mL

琼脂(1.3%)6.5g

乳糖(1%)5g葡萄糖(0.1%)0.5g

硫酸亚铁铵(0.02%)0.1g

硫代硫酸钠(0.02%)0.1g用途

初步判别肠道杆菌医学微生物实验专家讲座第29页原理：只分解葡萄糖：产少许酸上层培养基酸+O2→CO2+H2O蛋白胨代谢产物下层培养基不接触空气→培养基呈酸性→显黄色葡萄糖、乳糖都分解硫酸亚铁铵：用以检验细菌分解蛋白质后是否产生硫化氢。只产酸产酸&产气培养基略变碱指示剂变红医学微生物实验专家讲座第30页

肠道杆菌生长结果

SSEMB双糖铁大肠埃希菌粉红色大菌落紫黑色或紫红色黄色痢疾志贺菌无色细小无色、半透明上红下黄半透明菌落伤寒沙门菌无色细小无色、半透明上红下黄半透明菌落黑色沉淀医学微生物实验专家讲座第31页特异性抗体（血清中）诊疗菌液肉眼可见凝集现象检测试剂成份病人体内反应伤寒或副伤寒病人O抗原H抗原含有伤寒沙门菌O抗原伤寒沙门菌H抗原甲型副伤寒沙门菌H抗原肖氏沙门菌H抗原肥达试验（Widaltest）医学微生物实验专家讲座第32页方法：1、每孔加0.5mlN.S2、倍比稀释病人血清，第7孔不加做对照3、每孔加0.5ml抗原4、轻轻振荡混匀后，37℃孵育过夜医学微生物实验专家讲座第33页结果观察++++清澈透明，菌体形成凝块于管底

+++较透明，大部分菌体形成凝块于管底

++稍浑浊，较多细小凝集

+较浑浊，有细小凝集－浑浊，无凝集血清凝集效价：(抗体滴度)

与定量Ag产生显著凝集（++）血清最高稀释倍数医学微生物实验专家讲座第34页结果分析（1）

伤寒沙门菌“O”效价≥1：80“H”效价≥1：160

副伤寒沙门菌“H”效价≥1：80◆O、H效价＞正常值，肠热症可能性大＜正常值，可能性小◆O高H不高：感染早期or交叉反应◆O不高H高：预防接种、非特异性回想反应有诊疗价值医学微生物实验专家讲座第35页O抗原沙门菌属间有交叉反应IgMH抗原种特异性--伤寒沙门菌IgG甲型副伤寒沙门菌肖氏沙门菌希氏沙门菌结果分析（2）医学微生物实验专家讲座第36页肉汤增菌结果血平板接种1、观察肉汤增菌结果2、接种视细菌培养条件而用不一样平板血标本肉汤增菌血平板分离培养革兰染色血浆凝固酶+触酶试验病例1医学微生物实验专家讲座第37页病例二患者：男性，19岁。恶心、腹痛4h，伴水样腹泻3次入院就诊。无呕吐、寒颤。腹痛呈阵发性。既往体检无过敏史。体检：T38.5℃，BP134/75mmHg，P100次/分，R16次/分。心肺正常。上腹压痛，而无反跳痛。肝脾未触及。试验室检验：粪便镜检可见中性粒细胞，偶见红细胞。血象正常。尿正常。问题：1．该患者可能患了什么疾病？需与哪些疾病作判别诊疗？2．怎样进行微生物学检验？

医学微生物实验专家讲座第38页1、病例分析：感染中毒引发腹痛和腹泻可能原因有哪些？肿瘤食物过敏炎症性肠病溃疡腹外疾病肠易激综合征医学微生物实验专家讲座第39页主诉：阵发性腹痛、腹泻肠道感染细菌病毒寄生虫真菌?肠杆菌科：大肠埃希菌、志贺菌属、沙门菌属弧菌科：霍乱菌、副溶血性弧菌弯曲菌属：空肠弯曲菌球菌科：金黄色葡萄球菌等轮状病毒、Norwork病毒和肠腺病毒等溶组织阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、隐孢子虫等念珠菌、曲菌、毛霉菌等医学微生物实验专家讲座第4