猪附红细胞体病诊断与防治措施研究

目录TOC\o"1-3"\h\u28603摘要 引言猪附红细胞体是一种在猪血液中存在的微物，会导致猪出现发热、贫血、黄疸等症状。长期以来，由于多为隐性感染，且发病率不高，因此一直没有被重视。猪附红细胞体病是一种严重的传染病，严重影响着我国的畜牧生产。但目前尚无较好的诊断和防治手段。与此同时，关于猪的形态学特征、分类地位、诊断精确度和有效预防等问题，在国内外尚属空白。因此，要想有效地防治本病，就必须对本病作进一步的研究。附红细胞体病进入我国已经四十多年，该病临床症状比较明显，检测技术比较成熟，预防和治疗结果也比较理想，对于规模猪场基本不存在威胁，但是对于中小型家庭农场和散养户来说，由于缺乏经验和检测设备等，往往会造成经济损失，而且目前非洲猪瘟常态化的情况下，猪只感染附红细胞体很容易让养殖户产生恐慌情绪，和非洲猪瘟混淆，做出错误判断。目前，对于附红细胞体病的研究仍有很多问题有待解决，如：尚无准确、快速的诊断方法，对附红细胞体病的防治尚无很好的方法。尽管蚊子等在这种疾病的传播中扮演了重要角色，但其他的传播途径尚未查明。本试验旨在对可疑的附红血球体病进行诊断，并对其抗原蛋白进行检测，并对其进行特异的筛选。一、猪附红细胞体概述（一）猪附红细胞体流行病学特点该病是一种常见的传染病，主要发生在夏季，在人体、牛、猪、羊等多种动物身上，具有很高的传染性。有人对不同时期的猪进行了调查，结果表明，猪的感染率在80%到90%之间；在人类中，感染率高达86%；而在鸡中，阳性率较高，达到90%以上。但猪以外的其他动物发病率并不高，所有年龄段的猪都有这种病，尤其是仔猪的发病率和病死率高，肥育和病死率低。通常，只有免疫力低下的猪才会发病，如分娩、拥挤、长途运输、天气恶劣、饲养管理不善、更换圈舍、喂料、以及其他疾病，都有可能引发该病。该病主要是通过接触传播，与吸血虫有一定的关系，其次是注射针交叉注射，打耳标，阉割等。（二）相关病理学1.病原学附红细胞体是一种寄生于人和动物血液和骨髓中的病原菌。1928年，席林和丁格在啮齿动物中发现了类似的球状血虫（Schilling,1928）。此后，在绵羊，老鼠，猫，狗，鸡，马，驴，骡，骆驼，兔子等大约16种。附红血球的分类历来有争论。起初，它被归为原虫，因为它曾经被称为“类边虫病”。1984年，国际上根据《伯杰氏细菌鉴定手册》将其归为立克次氏体目的无浆体科的附红血球体属。16个SrRNA基因为原核生物细胞所共有的，在漫长的演化中，它的作用基本维持不变，甚至在某些位置发生了很小的改变，从而保存了远古祖先的某些序列。因此16SrRNA基因的遗传多样性和遗传多样性的特征可以为生物系统的发生和发展提供重要的线索。2.流行病学（1）地理分布地理分布附红血球体病在欧亚，美洲，大洋洲，美国，南非，巴西，阿尔及利亚，肯尼亚，法国，英国，日本，俄罗斯等30多个国家和地区。我国首次在江苏，广东，广西，云南等地发现了这种疾病，之后又向新疆，内蒙古，东北等地进行了研究。该病受影响的动物种类较多，分布范围较广，对畜牧业和人体健康造成了极大的经济损失和危害。（2）传播途径目前，对附红细胞的传播途径还不十分清楚。目前，国内外已广泛接受以吸血昆虫为主要传播媒介，另一种则认为可通过接触、体液传播、垂直传播和食用动物食物传播。主要有：①吸血性昆虫和节肢动物。夏季、秋季是多雨的季节，是吸血虫的主要活动和繁殖时期。常见的吸血性昆虫和节肢动物有猪虱、蚊虫、蜱等。②垂直的蔓延。2009年，杜海霞对97头母羊和46头隐性感染的母羊进行了感染调查，结果显示，共生产92窝213只羔羊全部感染，发病200只，43窝498头仔猪全部感染，372头发病。研究也确认了人类也可以经由胎盘传播（YangD,etal,2003）。③血液传染。动物之间可通过采食血液、含血食物、咬尾、粪便等途径传染（刘小燕，2004年）。此外，在阉割、断尾或打耳号的过程中，使用被污染的注射器或阉割工具也有可能导致感染。④通过接触传染。人和动物间的传染。二、临床症状由于附红细胞主要存在于人体或动物血液中，常见疾病有：红细胞数减少、血红蛋白浓度下降、红细胞压积下降、黄疸、贫血、发热等疾病的共同症状（郭定宗，2002）。由于该病常伴有其他疾病，所以在临床上有很大差别。猪附红细胞体病是由“血虫病”和“红皮猪”引起的。不同品种、不同年龄组均可发生感染，其中以哺乳和断奶仔猪最为突出。根据疾病的轻重，可划分为三型：①急性型。临床上比较罕见，一般在40~42度之间，病猪突然死亡，口、鼻出血、全身发红，手指按压不退。有的人突然全身麻痹，胃口大开，呼吸困难，肌肉颤抖。②亚急性感染。发病初期表现为大便呈圆形，伴有粘液或粘膜，后期腹泻，病猪耳朵、四肢内侧、腋下等处变得青紫色，病猪后腿麻痹，不能站立，不能动弹，有些病猪会流口水，呼吸困难。病程3~7日，或转变成慢性期。③缓慢的人。病猪的体温在39度上下，表现为食欲减退、贫血、黄疸。全身灰白色，有时皮肤呈现橘红色，被毛又粗又乱，没有光泽。粪便呈干巴巴的球形，有时还伴有粘液或粘膜。新生仔猪的主要表现为贫血、呼吸困难等。断奶仔猪发育迟缓，肥育母猪出栏延迟，雄性无明显临床表现，主要表现为性欲下降、精子活力下降。病猪容易感染其他疾病，使病死率明显提高。羊附红细胞体病是一种典型的阴性感染，其早期症状为进食量减少，食欲下降，症状逐渐加重，临床症状包括体温升高、贫血、黄疸、卧地不愿走动、四肢无力等。三、病理变化（一）组织学变化部分肝细胞发生空泡变性、颗粒变性，只剩外形，肝细胞在肝小叶中央区损害较大，可见淋巴和单核细胞浸润；脾脏内有铁血黄素沉淀、淋巴细胞增殖、红髓积聚、脾小体中央动脉扩张、充血、出血、局部形态不规则、肺间质充血、水肿。肺泡壁毛细血管扩张充血，肥浆膜下水肿，部分肺泡腔扩张，肺泡中可见少量的纤维浆渗出和肺泡上皮脱落；肾间质内有血黄素沉淀，肾小管间质充血、出血、炎性细胞浸润；部分上皮细胞出现空泡变性和颗粒变性；肾小管的官腔缩小，肾小球增大，囊腔缩小（严丽华，2009).（二）致病机理动物感染附红细胞病，可导致体液反应和免疫反应，但大多数都是阴性。有人认为，随着细胞数目的周期性变化和T细胞的免疫功能的变化，附红细胞在各个发展时期表现出不同的抗原，从而逃脱了宿主的免疫监控（魏金忠，2004）。研究表明，移植了脾脏的动物有很高的复制率（HoelzleLE,2008）。附红体在细胞表面堆积，会降低细胞的运载氧和养分，增加糖代谢，增加乳酸，造成低血糖、酸中毒、酸碱失衡、身体代谢紊乱，出现呼吸、心跳加快、体温上升等症状（PrullageJB,2003）。四、诊断该病以猪体温过高、皮肤发红、贫血、黄疸为主要特征，多见于耳后、肩、腹部等部位的出血点，发生率较高，死亡率较低。病理学检查发现，胃粘膜呈淡黄色，脾脏增大、胆囊增大、淋巴结肿大、心包、胸腔、腹腔积液等改变。尤其是在非瘟流行的情况下，要根据实验室的检测结果作出正确的结论，以免造成不必要的损失。附红细胞体可根据流行病学、临床表现、解剖观察等方面的改变来作出初步诊断。近年来，随着分子生物学的发展，新的实验室诊断手段层出不穷，其主要应用于实验室诊断：（一）显微镜检测目前，对附红细胞体病的主要检查方法有：血液标本的涂片染色镜检和直接镜检（黄光红，1997）。鲜血悬滴镜检查：该检查方法简单，是目前临床上应用较多的一种检查方法。采用静脉血抗凝后，将一滴于载玻片上，再加入适量的生理盐水，于400~1000倍的显微镜下，观察其表面的不规则锯齿、星形。有的能在血管里自由地游动、翻腾、扭动（张汝勇，1983).血涂片染色镜检：常用的染色方法及染色结果为：吉姆萨染色，瑞士染色为浅蓝，吖啶黄染色（斯特劳，2000)，附红细胞表面附着的附红细胞体数量不同，形态多样。瑞氏染色法观察到的附红球表面呈紫红色、黄褐色、深棕色和部分折光现象；吉姆萨染色后的附红细胞大小、形态、排列等与瑞氏染色相同，但色泽略有不同。电子显微镜下可见附红细胞为各种不同形态的球形小体。附红细胞较大，有纤维，外有凸起（赵丽颖等，2001）。扫描电镜观察发现，大部分的附红细胞都是球状的，有时会有棒状、单一或多个附着于红细胞表面。红细胞表面多为局部凹陷，少部分为孔隙，高电子密度粒子分布于胞浆中（侯成功等1999）。（二）血清学诊断方法对于附红细胞体的血清学诊断方法国内研究较少，国外研究相对较多。目前报道的主要方法有：1.间接血凝抑制实验（IHA）：Smith等人（1975）采用抗凝血法和分离附红细胞体作为检测用抗原，从恢复猪体中提取抗体作为检测抗体，采集IgM和IgG，采用双向琼扩技术对其抗原抗体进行特异性分析，结果表明，在对猪进行免疫应答时，免疫球蛋白的免疫应答为1:40；该方法可对可能受到感染的猪进行某种程度的检测。2.补体结合实验（CFT）：斯普利特于1958年首次报告了用补体结合试验对猪的粘红细胞病的诊断。本法治疗急性期疗效好，但长期治疗无效（方武等，2002）。3.酶联免疫吸附实验（ELISA）：Lang等建立了将附红体与红细胞分开，制备抗原的方法（HaelSM,etal，1988），用去掉红细胞的E.ovis抗原对羊进行ELISA与间接血凝试验(IHA)的对比，认为ELISA比IHA敏感性高8倍，Hsu等人用ELISA及CFT检查E.suis感染猪，ELISA敏感性明显高于CFT,而且证明E.suis抗原与猪的其他病感染的血清无交叉反应。因此ELISA是一种敏感、快速、特异的诊断方法。但此法不适用于小猪及公猪的诊断，也不适用于急性病例诊断（GwaltnetSM,1993）。五、防治与措施（一）预防目前还没有针对猪吸血细胞病毒暴发的特殊疫苗，因此，要防止这种疾病的发生，还需要进行更多的研究。①用药。采用抗虫类药物、砷制剂、重要药物等进行预防；②采用无菌性方法收集耐药猪的血样，用2000-3000/毫升的长效土霉素分离血清，通过肌肉注射可以预防感染；③坚持自繁自养，引进外来种猪时，必须严格把关，并对其进行为期一个月的隔离观察。④保持饲养环境的良好。夏季和秋季应及时清除蚊蝇和其他有害生物，并定期给猪群驱虫。在接种几种疫苗、治疗疾病时，必须确保每个猪都有一根针。做手术时要注意对所用的设备进行消毒，如打耳号、断尾、阉割等。加强饲养管理，减少压力。（二）治疗常用的有四环素、四环素、土霉素、砷制剂、贝尼尔、四环素、四环素等。1972年，科学家首次从菊科植物黄竹中分离出一种具有抗疟疾活性的单体，并命名为青篙素。只有青杆在碱性溶液中溶解，其余的则难以溶解。青篙素作为一种具有低毒性、抗疟疾作用的新型抗疟疾药物，在世界范围内已经被世界卫生组织公认为世界范围内治疗脑炎和恶性疟疾的首选药物。华修国等人（1997）对犬附红细胞体病的治疗效果明显，治愈率在90%以上。近年来，已有研究表明，青篙素还具有抗弓形虫、抗球虫病、抗狗附红血球菌等其它功效（黄学文等，2003）。杨秀玲等对牛附红细胞体病进行了一次治疗，无复发现象（杨秀玲，2002).国内也有使用多西环素、贝尼尔、康利得、914A、肌内注射黄素、四环素等药物（张英明、朱织云，2002）。其中没有一种药物能彻底消除附红细胞：首先，已有研究表明，附红细胞主要分布于动物的骨髓和红细胞中，从而使附红血球对高浓度药物免疫。其次，药物对红细胞只有抑制作用，而对红细胞的毒性则几乎没有。此外，目前尚无有效的抗癌药物靶位点。因此，对于附红细胞的治疗还需要长期而深入的研究。六、治疗体会（一）饲养管理预防猪附红细胞体病是由多种因素引起的，在合适的环境和良好的养殖条件下，一般不会引起猪的急性感染。正常来说，人体内有一种良好的免疫系统，能够维持人体与疾病的动态平衡，并能将体内的血液维持在很小的程度。在一个猪群中，只有受到过度拥挤、恶劣天气、更换圈舍、更换饲料等严重的压力时，才会出现贫血、发热、黄疸等症状。目前还没有针对附红细胞体病的疫苗，仅在发病季节采取综合防治措施，加强饲养管理，提高猪场的营养，做好环境卫生和定期消毒，以降低其应激反应的发生。（二）切断传播途径附红细胞体病的流行具有显著的季节性，尤其是在夏季和秋季，尤其是在夏季和秋季，据国外学者证明，埃及伊蚊和既整蝇都能传染猪附红细胞。因此，在夏季和秋季，要及时采取措施进行防治，以保证猪的健康成长，同时要及时喷洒驱虫剂，以防治蚊虫传播疾病。粘红细胞体病可以通过直接接触、血源接触、垂直传播和蚊子叮咬传播。此外，动物的血液传染是由伤口传染的（动物之间的争斗，断尾，标记，阉割等）。因此，在饲养管理过程中，要注意针头、手术刀等器具的消毒，防止血液污染注射和注射。（三）生物安全防控如果没有附红细胞体感染的猪群，建议在引种前进行血液检测，如果检测结果为阴性，就可以进行检测，以免出现潜在的感染。另外，三氮脒和多西环素的应用要根据仔猪的实际情况，严格控制用量和用量，降低药物的不良反应，特别是妊娠期的母猪，要注意三氮脒的应用。结论猪附红细胞体病应尽早诊断，避免错过治疗的最佳时间，否则会造成内脏功能衰竭，二次感染，增加治疗的难度，造成严重的经济损失，根据作者以往的经验，上述几种疗法都能收到良好的疗效，但目前的猪瘟主要是混合感猪瘟、蓝耳、伪狂等疾病，而目前养猪业正面临着非洲猪瘟的严峻