JJF 2056-2023 阻抗法全自动微生物检测系统校准规范

中华人民共和国国家计量技术规范JJF2056—2023阻抗法全自动微生物检测系统校准规范CalibrationSpecificationforAutomaticMicrobialDetectionSystemsbasedonImpedanceMethod2023-06-30发布2023-12-30实施国家市场监督管理总局发布JJF2056—2023一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一阻抗法全自动微生物检测系统校准规范CalibrationSpecificationfor一一一一一一一一一一一一一JJF2056—2023归口单位:全国生物计量技术委员会主要起草单位:中国计量科学研究院参加起草单位:湖南省计量检测研究院重庆市计量检测研究院本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释JJF2056—2023本规范主要起草人:张玲(中国计量科学研究院)隋志伟(中国计量科学研究院)刘思渊(中国计量科学研究院)参加起草人:胡楚征(湖南省计量检测研究院)彭建春(重庆市计量检测研究院)JJF2056—2023Ⅰ引言 (Ⅱ)1范围 (1)2引用文件 (1)3概述 (1)4计量特性 (1)5校准条件 (2)5.1环境条件 (2)5.2标准物质和校准设备 (2)6校准项目和校准方法 (2)6.1温度示值误差、温度波动度和温度均匀度 (2)6.2线性相关系数 (3)6.3检出限 (3)6.4重复性 (3)7校准结果表达 (4)8复校时间间隔 (4)附录A培养基和试剂 (5)附录B校准证书内页格式 (7)附录C校准原始记录格式 (8)附录D温度示值误差校准结果不确定度评定示例 (10)JJF2056—2023ⅡJJF1071《国家计量校准规范编写规则》、JJF1001《通用计量术语及定义》和JJF1059.1《测量不确定度评定与表示》共同构成支撑本规范制定工作的基础性系列规范。校准方法及计量特性等主要参考了JJF1101—2019《环境试验设备温度、湿度参数校准规范》、GB4789.38—2012《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数》,GB/T26428—2010《饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测》,国外食品检本规范为首次发布。JJF2056—20231阻抗法全自动微生物检测系统校准规范1范围校准。2引用文件本规范引用了下列文件:JJF1101—2019环境试验设备温度、湿度参数校准规范凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本规范。3概述阻抗法全自动微生物检测系统(以下简称检测系统)是通过测量微生物代谢引起的培养基电特性的变化来测定样品中微生物含量的仪器。在培养过程中,微生物的新陈代谢作用可使培养基中电惰性的大分子底物,如碳水化合物、蛋白质、脂肪等营养物质代谢为电活性的小分子产物,使培养基导电性增强。检测系统由温控系统和电子分析器组成。接种了样品的生长培养基置于一个装有一对不锈钢电极的样品管内,样品管在装配温控系统和电子分析器的恒温培养舱中培养,检测系统每过一定时间记录每个样品阻抗的变化,比照内部设定的阳性检出阈值,记录检测为阳性的时间。根据标准样品的微生物浓度和检出时间绘制检测系统内置的标准曲线,比对校准曲线计算实测样品的微生物含量。4计量特性检测系统的校准项目及技术指标见表1。表1检测系统校准项目及指标校准项目计量特性指标温度示值误差±1℃温度波动度±1℃温度均匀度≤2.0℃检出限≤10CFU/mL线性相关系数R2≥0.98重复性≤10%注:以上技术指标不用于合格性判别,仅供参考。JJF2056—20232ΔTdΔTd=Td-To(1)ΔTf=±max[(Tjmax-Tjmin)/2](2)5校准条件5.1环境条件实验室环境应当满足生产厂家的安装要求:a)环境温度(15~30)℃;b)相对湿度≤90%。5.2标准物质和校准设备5.2.1标准物质大肠埃希氏菌菌落计数国家有证标准物质或枯草芽孢杆菌菌落计数国家有证标准物质。5.2.2化学试剂无菌生理盐水(0.85%NaCl)或无菌磷酸盐缓冲液pH(7.2~7.4),见附录A中A.1~A.2。EC肉汤(E.colibroth)大肠埃希氏菌液体培养基或NB营养肉汤培养基(Nutritionbroth),见附录A中A.3~A.4。5.2.3校准设备无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度);或移液器(量程1mL)及适配的无菌吸头。温度校准装置,温度测量范围满足(20~50)℃,最大允许误差为±0.1℃。校准设备需经过计量检定或校准。6校准项目和校准方法在温度计量特性校准过程中,应根据检测系统的结构组成,将温度校准装置探头置于检测系统内架放置样品管的位置,选取具有代表性的位置孔(如检测系统是单层内架的,则选取中心孔和四周至少5个孔位;如检测系统的同一箱体内存在多层内架,则选取中心孔及四周至少9个孔位)分别进行校准。6.1温度示值误差、温度波动度和温度均匀度将周围环境温度控制在检测系统的说明书允许范围内,开机预热,设定并达到目标温度,检测系统在稳定状态下,所有测试孔的温度每2min记录一次,在30min内共测量16次,计算温度显示值与中心位置孔(检测系统内架放置样品管的几何中心位置孔或接近几何中心最近的位置孔)16次测量结果的平均值之差为温度示值误差的测量结果,按照公式(1)进行计算;校准装置各测量孔在30min内(每2min测试一次)实测最高温度与最低温度之差的一半,冠以“±”号,取全部测量点中变化量的最大值作为温度波动度的测量结果,按照公式(2)计算;在30min内全部测量点的每次测试中实测最高温度与最低温度之差的算术平均值作为温度均匀度的测量结果,按照公式(3)计算。JJF2056—20233ΔTu=(Timax-Timin)/n(3)式中:ΔTd—温度示值误差,℃;Td—检测系统的温度显示值,℃; To—校准装置测得的中心位置温度平均值,℃;ΔTf—温度波动度,℃;Tjmax—校准装置某个测量孔j在16次测量中的最高温度,℃;Tjmin—校准装置某个测量孔j在16次测量中的最低温度,℃;ΔTu—温度均匀度,℃;n—测量次数;Timax—各校准位置孔在第i次测得的最高温度,℃;Timin—各校准位置孔在第i次测得的最低温度,℃。6.2线性相关系数将大肠埃希氏菌菌落计数标准物质或枯草芽孢杆菌菌落计数标准物质按照证书要求溶于无菌生理盐水或无菌磷酸盐缓冲液中,并用该溶液依次10倍稀释为6个梯度。其中细菌的含量从105CFU/mL逐步稀释到0CFU/mL。每个梯度稀释样品/测试样品,取1mL加入适量的培养基(根据细菌类型选择EC肉汤或NB肉汤)。每个梯度做2管重复。一起上机检测,按照细菌浓度不同,约2h~20h后出结果。按公式(4)计算线性相关系数r。(xi-)(yi-)r(4)(xi-)2×(yi-)2式中:xi—第i个稀释梯度的检出时间;—每个稀释梯度的检出时间平均值;yi—第i个稀释梯度大肠埃希氏菌浓度的对数值;—每个稀释梯度大肠埃希氏菌浓度的对数值的平均值;n—稀释梯度的个数。6.3检出限菌落计数标准物质的梯度稀释样品,按照浓度从高到低,最低稀释梯度≤10CFU/mL。记录最低可被检测到的稀释梯度。检出限结果以≤10CFU/mL或≤102CFU/mL、≤103CFU/mL等方式记录。6.4重复性使用菌落计数标准物质配制浓度约(103~105)CFU/mL的测试样品。测试样做6管重复。依次记录每管测试样的检出时间,按式(5)计算检出时间的相对标准偏差(RSD),作为重复性的评价。JJF2056—20234 RSD=i-1)2××100%(5)式中,ri—每一管重复测试样品的检出时间;—测试样品的n次测量平均检出时间。7校准结果表达JJF1071中5.12的要求,并给出各校准项目名称和测量结果以及测量结果的扩展不确定度。8复校时间间隔阻抗法全自动微生物检测系统复校准间隔建议一般不超过1年。由于复校时间间隔的长短是由检测系统的使用情况、使用者、检测系统本身质量等诸因素所决定的,因此,送校单位可根据实际使用情况自主决定复校时间间隔。JJF2056—20235附录A培养基和试剂A.1磷酸盐缓冲液A.1.1成分磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0g;蒸馏水500mL;pH7.2。A.1.2制法贮存液:称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中,用大约175mL的1mol/L氢氧化钠调节pH,用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液:取贮存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分装于适宜容器中,于121℃高压灭菌15min。A.2无菌生理盐水A.2.1成分氯化钠8.5g;蒸馏水1000mL。A.2.2制法称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中,于121℃高压灭菌15min。A.3EC肉汤(E.colibroth)A.3.1成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0g;3号胆盐或混合胆盐1.5g;乳糖5.0g;磷酸氢二钾(K2HPO4)4.0g;磷酸二氢钾(KH2PO4)1.5g;氯化钠5.0g;蒸馏水1000mL;pH6.9±0.1。A.3.2制法将上述成分溶解于蒸馏水中,调节pH。于121℃高压灭菌15min。A.4NB肉汤(Nutritionbroth)A.4.1成分胰蛋白胨15.0g;植物蛋白胨5.0g;氯化钠5.0g;蒸馏水(最终定容至)1000mL。JJF2056—20236A.4.2制法将上述成分溶解于蒸馏水中,于121℃高压灭菌15min。灭菌后pH为7.2±0.2。A.5无菌1mol/LNaOHA.5.1成分氢氧化钠(NaOH)40.0g;蒸馏水1000mL。A.5.2制法称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中,于121℃高压灭菌15min。JJF2056—20237附录B校准证书内页格式(推荐性表格)序号校准项目校准结果1温度示值误差2温度均匀度3温度波动度4线性相关系数5检出限6重复性校准温度示值误差测量结果的扩展不确定度为:校准员:核验员:JJF2056—20238附录C校准原始记录格式(推荐性表格)系统名称型号规格制造厂商出厂编号委托单位名称联系人地址电话温度湿度大气压记录编号校准员核验员一、温度示值误差、温度波动度、温度均匀度(选择5~9个测量点)时间/min024681012141618202224262830不同位置孔测量值To/℃(其中1为中心位置孔)123456789系统温度显示值Td/℃温度示值误差ΔTd/℃温度波动度ΔTf/℃温度均匀度ΔTu/℃JJF2056—20239二、微生物线性测量标准物质检出时间菌液浓度CFU/mL相关系数r检出限CFU/mL菌落计数标准物质三、微生物定量测量结果序号待测样检出时间重复性/%123456平均值JJF2056—202310附录D温度示值误差校准结果不确定度评定示例D.1测量方法采用全自动温度校准装置测定阻抗法微生物定量分析仪的恒温孵育系统,并与检测系统的温度监测显示值进行比较。D.2测量模型示值误差可由公式(D.1)给出:ΔT=To-ΔT=To-Ti(D.1)ΔT—温度示值误差,℃;To—监测系统的温度监测显示值,℃; Ti—温度校准装置测得的温度,℃。D.3不确定度来源不确定度来源包括:测量重复性引入的标准不确定度u1,检测系统的温度分辨力引入的标准不确定度u2和温度校准装置引入的不确定度u3。D.4不确定度分量评定D.4.1测量重复性引入的标准不确定度u1选定一台系统,使用温度校准装置对恒温孵育系统连续测量10次,得到一组测量值:35.28℃,35.11℃,35.37℃,35.83℃,35.57℃,35.37℃,35.67℃,35.