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山慈菇（杜鹃兰）快速繁殖技术优化及铁皮石斛叶cDNAPCR文库的构建山慈菇是常用的名贵中药材,具有清热解毒、化痰散结等功效,临床上常用作抗肿瘤药物。《中华人民共和国药典》(国家药典委员会,1995,2000,2005)记载：山慈菇为兰科(Orchidaceae)植物杜鹃兰(Cremastraappendiculata(D.Don)Makino)、独蒜兰(Pleionebulbocodioides(Franch.)Rolfe)或云南独蒜兰(PleioneyunnanensisRolfe)的干燥假鳞茎,主要分布于四川、云南、贵州等长江以南各省区。由于具有较大的药用价值,因此对于山慈菇的需求量较大,同时自身繁殖率低,使得野生山慈菇(杜鹃兰)的生存状态恶化,数量急剧减少。因此,通过植物组织培养技术实现其体外的快速繁殖具有重大的药用、经济和环境意义。课题以实验室培养的杜鹃兰为外植体,通过最佳基本培养基、最佳植物激素及浓度、最佳有机添加物及浓度的确定,再进行四因素四水平的正交试验,从而获得杜鹃兰体外快速繁殖的最佳培养条件。实验结果显示,最佳基本培养基为1/2MS培养基,最佳激素浓度为1.Omg/LNAA,最佳有机添加物浓度为100g/L土豆汁(PE)。正交试验结果显示,1/2MS+50g/LBE+50g/LPE+0.75mg/L6-BA+0.75mg/LNAA,30.0g/L蔗糖,3.0g/L活性炭,5.5g/L琼脂,pH值5.8～6.2,为杜鹃兰体外快速繁殖的最佳培养条件。另选取各个生长时期具有特征的材料,采用石蜡切片技术对杜鹃兰形态发生过程进行观察,结合杜鹃兰外部形态发育过程,对其发育进行初步研究。另以RACE技术为基础,铁皮石斛(Dendrobiumcandidum)叶总RNA为起始材料,通过逆转录和末端转移构建出两端含有特定序列的cDNA,然后以连接有引入序列的引物进行PCR,在实验条件下扩增生物体中微量mRNA的cDNA,构建cDNAPCR文库。该方法构建的cDNAPCR文库能使cDNA放大100倍以上。通过比较,cDNAPCR文库的PCR效果明显高于逆转录产物的PCR效果。以5pg的总RNA为起始材料构建的cDNAPCR文库仍可得到一定

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